神經結扎損傷大鼠鞘內注射新斯的明和GABA受體激動劑的相互作用

楊 森

（遼寧省錦州市中心醫院麻醉科，遼寧 錦州 121000）

周圍神經損傷可以引起相應肢體皮膚對正常非傷害性機械刺激的過程敏感，即異常觸痛。在幾種實驗模型中，以結扎引起的神經損傷模型中異常觸痛表現的最為明顯。一般來說，在脊髓水平使用膽堿酯酶抑制劑、α2-腎上腺素受體激動劑、NMDA受體拮抗劑、γ-氨基丁酸（GABA）受體激動劑、腺苷受體激動劑等在結扎引起的脊神經損傷大鼠模型中均有減輕異常觸動的作用。本實驗目的在于采用大鼠神經病理性疼痛模型，采用不同劑量比例聯合用藥及等效線法研究鞘內注射新斯的明與蠅蕈醇或新斯的明與巴氯酚之間可能存在的相互作用。

1 資料與方法

1.1 雄性SD大鼠，體質量200～300g，按照Kim和Chung等[1]提出的方法建立大鼠神經病理性損傷的模型。以安氟醚麻醉大鼠后，仔細分離左側腰5、6脊神經并用6-0黑絲線在背根神經節的遠端與坐骨神經發出的近端之間結扎脊神經。手術后7d內如大鼠的縮爪閾值≤4.0g，則按照常規方法進行大鼠鞘內置管。鞘內分別注射不同劑量的新斯的明、蠅蕈醇、及巴氯芬，劑量分別為：新斯的明0.3、1、3、10μg；蠅蕈醇0.1、0.3、1、3、10μg；巴氯芬0.1、0.3、1、3μg。

表1 鞘內單獨和聯合應用新斯的明、蠅蕈醇、巴氯酚時ED50 及95%可信區間

表2 鞘內單獨或聯合應用新斯的明、蠅蕈醇及巴氯酚時的副作用發生率

1.2 測定觸痛閾值時，大鼠單個置于底部為線網的籠中飼養。20min，采用von Frey法對神經損傷側后爪的跖側中間部位進行刺激，知道出現有疼痛表現的陽性反應[2]。在壓力達到15g仍未出現陽性反應時，認為動物達到截止閾值（cutoffvalue）。

為了描述 藥物相互作用的特征及強度，在本研究中計算了聯合用藥時的總分數值。見表1。

將單獨給藥時的ED50值記為1，則總分數值的計算公式為：

總分數值=（聯合用藥時的新斯的明劑量/單獨用藥時的新斯的明劑量）+（ 聯合用藥時蠅蕈醇/單獨用藥時蠅蕈醇的劑量），總分數值接近1表明藥物具有相加作用；若總分數值＜1，則說明藥物具有協同作用。

1.3 統計學處理

量效關系數據以%MPE平均值+SEM表示：ED50值、斜率、95%的可信區間等根據量效關系進行分析；變異系數和理論值、ED50值95%的可信區間（95%Cis）根據單獨用藥時的變異系數進行計算。各組內的最小拮抗效應與最大激動效用之間采用配對t檢驗進行比較，P＜0.05為有效統計學意義。

2 結 果

正常大鼠的縮爪閾值大于5g。在脊神經結扎后，大多數大鼠對機械刺激的閾值降低（從術前的15g下降到平均基礎值≤4.0g，但仍具有正常的行為學表現及體質量增加。對神經結扎的動物進行導管植入后，縮爪閾值范圍為（1.99±0.17）到（3.69±0.5）g之間。

三種激動劑鞘內注射的時間效應過程基本相似，鞘內注射新斯的明、蠅蕈醇和巴氯酚及聯合用藥可以產生劑量依賴性的抗異常觸痛效應。各個劑量的藥物均不導致嚴重的運動功能障礙，但各藥組中均有一些大鼠表現為輕至中度的運動功能障礙、鎮靜及尿頻現象，見表2。

3 討 論

在本研究中有兩個重要的發現：①對于脊神經損傷引起的異常觸痛，鞘內聯合應用新斯的明及蠅蕈醇可以產生顯著的協同效應；②與單用GABAB受體激動劑相比，聯合應用GABAA受體激動劑與新斯的明能更有效地減輕異常觸痛。這些研究表明，協同作用的產生有賴于GABAA受體及毒蕈堿受體的激活。巴氯酚是強效GABA類似物，對GABAB受體有選擇性的激動作用；蠅蕈醇可選擇性的激活GABAA受體亞型。新斯的明通過毒蕈堿樣受體作用于神經元細胞膜上與G蛋白耦聯的受體。脊髓中外側細胞柱膽堿能神經的分布來源于脊髓固有的膽堿能神經纖維。這些膽堿能神經末梢時初級傳入神經的突觸前末梢[3]。

總之，鞘內單獨注射新斯的明、蠅蕈醇或巴氯酚可對異常觸痛產生劑量依賴性緩解作用，且不產生嚴重副作用。在神經結扎損傷大鼠模型鞘內使用新斯的明與蠅蕈醇具有協同作用，但與巴氯酚合用不產生協同作用。這些研究結果表明，對異常觸痛的協同抑制作用需要同時激活毒蕈堿受體和GABAA受體。

[1] Kim SH,Chung JM.An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat[J].Pain,1992,50(3)：355-363.

[2] Chaplan SR,Bach FW,Pogrel JW,et al.Quantitative assessment of tactile allodynian in the rat paw[J].J Neurosci Methods,1994,53(1)：55-63.

[3] Tallarida RJ,Murray RB.Manual of pharmacologic calculations with computer programs[M].2nd ed,New York：Springer-Verlag,1987.