紫外分光光度法測定野木瓜片含量

黃秀展 潘民儒 李榮德

（貴港市冠峰制藥有限公司，廣西 貴港 537100）

野木瓜片為野木瓜經加工得的浸膏片，收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第十四冊，具有祛風止痛、舒筋活絡之功效。用于風邪阻絡型三叉神經痛，坐骨神經痛，風濕關節痛。野木瓜主要含有黃酮類、酚類和皂甙類成分[1]，其單一成分文獻報道少。原標準中尚未收載含量測定方法，雖文獻中曾有報導其綠原酸的含量測定[2]，但因黃酮類成分是野木瓜的主要成分之一，因此控制黃酮類成分含量也是必要的。文獻報道有關測定總黃酮類化合物的方法有：紫外分光光度法[3,4]、薄層層析-比色法[5,6]、硝酸鋁顯色法[7-9]等，本法選擇硝酸鋁顯色法，參考中國藥典2000年版收載品種排石顆粒、《衛生部藥品標準》中成藥方劑第20冊野木瓜注射液的方法，以蘆丁為標準進行研究，結果表明，本法簡單、準確、重現性好。

表1 穩定性試驗結果（n=8）

1 儀器與試劑

UV-2100型紫外可見分光光度計（日本島津），BP-110S電子天平（德國Sartorius公司），超聲儀（上海必能信：SB?5?200；電壓：220V；頻率：50Hz）。

蘆丁對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，野木瓜片由貴港市冠峰制藥有限公司提供。甲醇等其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 測定溶液的制備

2.1.1 蘆丁對照品溶液的制備

精密稱取經120℃干燥至恒重的蘆丁對照品20mg，置100mL量瓶中，加50%甲醇適量，振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL含蘆丁0.2mg）。

2.1.2 供試品溶液的制備

取野木瓜片20片，除去糖衣，精密稱定，研細，取約2g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加甲醇100mL，稱定重量，超聲處理（200W，頻率50Hz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.1.3 陰性溶液的制備

按照制劑處方（不加野木瓜藥材）按供試品溶液制備的方法，制成陰性溶液。

2.2 測定波長選擇

取上述蘆丁對照溶液、供試品溶液及輔料溶液各1mL，分別置10mL量瓶中，加50%甲醇至5mL，加5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4mL，再加50%甲醇至刻度，搖勻。以相應的溶液為空白，在UV-2100型紫外可見分光光度計上，于400～600nm波長范圍內測定吸收曲線。結果見圖1，表明蘆丁經過顯色后，在510nm波長處有最大吸收，與多數文獻報道[10]一致，野木瓜片樣品經過顯色后，亦在510nm波長處有最大吸收，輔料幾乎無吸收，對測定無干擾。

圖1 陰性（A）、對照品（B）、供試品（C）

2.3 標準曲線的制備

精密量取蘆丁對照品溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，分別置10mL量瓶中，各照2.2自“加50%甲醇至5mL”起，以相應的溶液為空白，在510nm處測定吸收度，以吸收度（A）為縱坐標，濃度C（mg/mL）為橫坐標，計算其回歸方程（n=5）：A=8.0149C＋0.0987，r=0.9995，結果表明：蘆丁在0.0202～0.1010mg范圍內呈現良好的線性關系。

2.4 加樣回收率試驗

已知樣品（批號：20040801）其含量為8.62mg／片，精密稱取該樣品5份，每份約1g，分別精密加入蘆丁對照品溶液（1.02mg/mL）20mL，置錐形瓶中，精密加甲醇100mL，按2.1.2供試品溶液的制備方法制備，并照2.2自“加50%甲醇至5mL”起，以相應的溶液為空白，在510nm處測定吸收度，計算回收率，結果平均回收率為99.1%，RSD為2.07%（n=5）。

2.5 穩定性試驗

精密稱取樣品（批號：20040801）2g，按2.1測定溶液的制備方法制備供試品溶液及蘆丁對照品溶液，分別在放置1、3、5、10、15、30、60、90min后，照2.2自“加50%甲醇至5mL”起，以相應的溶液為空白，在510nm處測定吸收度，結果見表1，表明對照品溶液及供試品溶液顯色穩定。

2.6 重復性試驗

取同一樣品（批號：20040801）5份，各約2g，精密稱定，按2.1.2供試品溶液的制備方法制備，并照2.2自“加50%甲醇至5mL”起，以相應的溶液為空白，在510nm處測定吸收度，結果平均含量為8.70 mg/片，RSD為2.79%（n=5），表明方法重復性好。

2.7 樣品測定

按照“2.1.2”項下方法，制備3批樣品溶液。另取“2.1.1”項下對照品溶液和相應的溶劑為空白，按上述方法，在510nm處分別測定吸收度，計算含量，結果見表2。

表2 野木瓜片樣品測定結果

3 討 論

該實驗為本公司按新藥注冊分類9類研制所做的研究，本法現已收載于國家食品藥品監督管理局標準（試行）YBZ10772006“野木瓜片”標準中，經多年生產實踐證明，本法靈敏、準確，用于野木瓜片的質量控制是可行而有效的，但其專屬性的含量測定方法有待進一步研究。

[1] 中藥大詞典(下冊)[M].上海：上海科學技術出版社,1986.

[2] 李國強,周本宏,吳國秋,等.野木瓜片中綠原酸的含量測定[J].中國當代醫藥,2010,17(10)：120-121.

[3] 馮德民,彭衛欣.正交函數分光光度法測定復方蘆丁片中維生素C和蘆丁兩組分[J].藥物分析雜志,1990,10(1)：29.

[4] 王強,楊競雄.山柰中總黃酮的含量測定[J].現代應用藥學,1990,7(2)：9-10.

[5] 陳芳群.柱層析-紫外分光光度法測定射干、川射干、白射干中總黃酮的含量[J].藥物分析雜志,1991,11(3)：170-172.

[6] 謝德隆,王蘇,程志偉,等.燈盞花黃酮苷化學成分的研究[J].中成藥,1990,21(10),15-17.

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