TSHR和MMP-9在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及其臨床意義

王朝暉，李玉中，宋麗媛，王乃玉

(大連醫科大學 附屬第二醫院1.實驗中心，2.檢驗科，3.病理科，遼寧 大連 116027)

TSHR和MMP-9在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及其臨床意義

王朝暉1，李玉中2，宋麗媛3，王乃玉3

(大連醫科大學 附屬第二醫院1.實驗中心，2.檢驗科，3.病理科，遼寧 大連 116027)

［目的］探討甲狀腺乳頭狀癌(PTC)組織中促甲狀腺激素受體(TSHR)與基質金屬蛋白酶(MMP-9)的表達及其與病理參數之間的關系。［方法］應用免疫組織化學(SP)法檢測56例PTC，30例結節性甲狀腺腫及11例正常甲狀腺組織標本的TSHR和MMP-9蛋白表達。［結果］TSHR蛋白在PTC、結節性甲狀腺腫和正常甲狀腺組織的表達率分別為91.07%、70.00%和27.27%，三組間比較差異有顯著性意義(P＜0.05);TSHR在有淋巴結轉移PTC組與無淋巴結轉移組的表達率分別為76.92%與95.35%(P＞0.05);在Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期的表達率分別為89.66%與92.60%(P＞0.05)。MMP-9蛋白在PTC、結甲和正常甲狀腺組織中表達率分別為88.37%、36.67%和0%，三組間比較差異有顯著性意義(P＜0.05);在有淋巴結轉移PTC組與無淋巴結轉移PTC組的表達率分別為92.31%與79.07%(P＞0.05)，在Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期的表達率分別為89.66%與74.07%(P＞0.05)。TSHR、MMP -9的表達與患者的性別、年齡及腫瘤大小均無相關性(P＞0.05)。［結論］TSHR蛋白高表達與甲狀腺乳頭狀癌的發生有關，可能是甲狀腺癌發生的一個早期標志;MMP-9高表達可能與甲狀腺癌細胞侵襲和轉移密切相關。

甲狀腺乳頭狀癌;TSHR;MMP-9;免疫組織化學法

甲狀腺癌的發生發展是一個受多因素影響，表現為多步驟的復雜過程，涉及大量的相關基因結構和表達調控的改變。促甲狀腺激素受體(TSHR)是調控甲狀腺細胞生長、分化的主要受體，其異常表達是獲得性、遺傳性或先天性甲狀腺疾病的重要原因之一［1］。MMP-9是基質金屬蛋白酶(MMPs)家族成員之一，是降解細胞外基質(ECM)的主要酶類，其主要作用是降解ECM，分解基底膜中的纖維連接蛋白和層粘連蛋白［2］。腫瘤細胞通過分泌基質金屬蛋白酶來水解基底膜和基質中的Ⅳ型膠原等成分，破壞基底膜，侵入小血管和淋巴管而造成腫瘤擴散［3］。本實驗通過檢測甲狀腺乳頭狀癌組織TSHR、MMP-9蛋白表達，旨在探討TSHR、MMP-9與腫瘤發生發展之間的關系。

1 材料和方法

1.1 臨床資料

收集2010年1月—12月大連醫科大學附屬第二醫院手術切除的甲狀腺乳頭狀癌(PTC)、結節性甲狀腺腫(簡稱結甲)和正常甲狀腺組織(PTC根治術取出的患者另一側正常甲狀腺)蠟塊各56、30和11例，56例癌癥患者中男性18例，女性38例，年齡20～74歲，中位年齡53歲。有淋巴結轉移13例，無淋巴結轉移43例。Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期29例。患者術前均未進行放化療和生物治療。

1.2 方 法

用免疫組織化學法檢測97例標本TSHR和MMP-9蛋白的表達，TSHR抗體購自武漢博士德公司，使用濃度1∶100;MMP-9抗體購自Neomarkers公司，工作濃度1∶100，操作步驟按免疫組化試劑盒要求進行，組織切片在檸檬酸鹽緩沖液中用微波進行抗原熱修復100℃ 10 min。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做空白對照。免疫組化(Streptavidin Peroxidase，SP)試劑盒和DAB顯色劑均購自北京中山試劑有限公司。

1.3 結果判斷

TSHR以胞膜或胞漿出現棕黃色為陽性細胞。隨機計數10個高倍視野(400×)下的腫瘤細胞數，陽性細胞＞20%為陽性表達;MMP-9以胞漿出現棕黃色為陽性細胞。隨機計數10個高倍視野(400×)下的腫瘤細胞數，陽性細胞＞10%為陽性表達。

1.4 統計學方法

應用SPSS13.0統計軟件包，兩組或多組計數資料比較采用χ2檢驗進行統計學分析，檢驗水準α=0.05。用Spearmen相關性分析。

2 結 果

2.1 TSHR與MMP-9蛋白在PTC、結甲和正常甲狀腺組織的表達

TSHR蛋白在PTC、結甲和正常甲狀腺組織的表達率分別為 91.07%、70.97% 和 27.27%，三組間比較差異有顯著性意義(P＜0.05);MMP-9蛋白在PTC、結甲和正常甲狀腺組織的表達率分別為88.37%、36.67%和0%。三組間比較差異有顯著性意義(P＜0.05)。TSHR和MMP-9免疫組化染色圖片如圖1。

2.2 TSHR、MMP-9蛋白表達與PTC患者病理參數的關系

TSHR、MMP-9蛋白表達與PTC患者的性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移及分期差異均無顯著性意義。見表1。

2.3 TSHR與MMP-9蛋白表達的相關性

TSHR與MMP-9的相關性分析顯示，二者表達相關性無顯著性意義。Spearmen相關系數r=0.031，P=0.822 ＞0.05，見表 2。

3 討 論

甲狀腺癌是內分泌系統最常見的惡性腫瘤之一，不同的組織類型其惡性程度雖不相同，但都具有侵襲性強和易轉移的特點，尤其PTC多伴有淋巴結轉移。轉移和復發是導致治療失敗和患者死亡的主要原因。TSHR為甲狀腺濾泡上皮細胞膜受體，促甲狀腺激素通過與TSHR結合調控甲狀腺的功能和促進甲狀腺濾泡細胞的生長，TSHR在甲狀腺的調控中起主導作用。研究發現，PTC組織中TSHR的表達明顯高于結甲和正常甲狀腺組織，在淋巴結轉移組的表達與無淋巴結轉移組差異無顯著性意義。與王志峰［4］報道蛋白的表達相一致。而與戴亞麗［5］報道的蛋白表達結果相反。另外本研究發現，Ⅲ～Ⅳ期的表達低于Ⅰ～Ⅱ期，這說明TSHR的高表達可能與甲狀腺乳頭狀癌的發生有關，而與腫瘤惡性發展程度無關。如果能抑制甲狀腺濾泡上皮細胞膜促甲狀腺激素受體的過度表達將有可能阻滯甲狀腺乳頭狀癌的發生。

圖1 TSHR和MMP-9蛋白在PTC、結甲和正常甲狀腺組織的表達(免疫組化 ×200)Fig 1 Expressions of TSHR and MMP-9 in PTC，nodular goiter and normal thyroid tissues(SP ×200)

表1 TSHR、MMP-9蛋白表達與PTC患者病理參數的關系Tab 1 The expressions of TSHR and MMP-9 in PTC tissues and their relation with clinicopathologic

表2 TSHR與MMP-9蛋白表達的相關性Tab 2 The relation of TSHR with MMP-9

MMP-9是腫瘤細胞分泌或誘導宿主細胞產生的能降解幾乎所有基底膜Ⅳ型膠原的蛋白酶。其通過降解腫瘤細胞基膜和包繞腫瘤的基質，突破基質屏障［6］。腫瘤細胞浸潤是通過血管內皮下基底膜及包膜的膠原降解而完成的，是腫瘤細胞血行轉移的形成途徑［7］。本研究發現MMP-9蛋白在PTC的表達明顯高于結甲和正常甲狀腺組織，且在有淋巴結轉移組的表達92.31%高于無淋巴結轉移組79.07%，在Ⅲ～Ⅳ期的表達89.66%高于Ⅰ～Ⅱ期表達74.07%，雖然結果差異不明顯，這可能與病例數較少有關，但至少說明乳頭狀甲狀腺癌的浸潤和轉移可能與MMP-9大量產生有關。如果能抑制MMP-9的產生，將會減少乳頭狀甲狀腺癌細胞的轉移。如果能尋找干擾二者蛋白表達的藥物，將有可能抑制甲狀腺癌細胞的生長、浸潤和轉移。

:

［1］程維剛，殷德濤，盧秀波，等.THSR、ER與 CyclinD1在分化型甲狀腺癌中的表達及其意義［J］.鄭州大學學報，2005，5(4):353 -376.

［2］Yang J H，Briggs W H，Libby P.Small mechanical strains selectively suppress matrix metallpprotainase-1 expression by human vascular smooth muscle cells［J］.Biol Chem，2003，273(11):6550 -6555.

［3］唐華美，胡宏慧，金宇飚，等.胃癌中 MMP-2表達與TNM分期和淋巴結轉移的相關性研究［J］.外科理論與實踐，2003，8(3):233 -236.

［4］王志峰，劉勤江，廖世奇，等.甲狀腺癌NIS和TSHR表達的矛盾性及非相關性［J］.腫瘤防治研究，2011，38(8):909-913.

［5］戴亞麗，葉靜，張帆，等.乳頭狀甲狀腺癌抑癌基因TSHR、P16和RAS啟動子甲基化研究［J］.中華內分泌代謝雜志，2010，26(5):381-384.

［6］Maeta H，Ohgi S，Trada T.Protein expression of matrix matalloprotei nases 2 and 9 and tissue inhibitors of matalloproteinases 1 and 2 in papillary thyroid carcinomas［J］.Virchows Arch，2001，438(5):121 -128.

［7］李慧云，吳增常.五種基質金屬蛋白酶基因在乳頭狀甲狀腺癌中的表達［J］.中華內分泌代謝雜志，2003，19(6):449-451.

Clinical significances of the TSHR and MMP-9 expressions in papillary thyroid carcinoma

WANG Zhao-hui1，LI Yu-zhong2，SONG Li-yuan3，WANG Nai-yu3
(1.Laboratory Center，2.Department of Clinical Laboratory，3.Department of Pathology，the Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Dalian116027，China)

Abstract:［Objective］To evaluate the expressions of thyroid stimulating hormone receptor(TSHR)and matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in papillary thyroid carcinoma(PTC)and their clinical significances.［Method］The SP immunohistochemistry was used to detect the expressions of TSHR and MMP-9 protein in 56 cases of PTC，30 cases of nodular goiter and 11 cases of normal thyroid tissue.［Results］The positive expression rate of TSHR in PTC was significantly higher than those of nodular goiter and normal thyroid tissue(P＜0.05).and the rates in PTC with lymph node metastasis and without were 76.92%and 95.35%respectively(P＞0.05)，The rates in stageⅢ-Ⅳand stageⅠ-Ⅱwere 89.66%and 92.60%respectively(P＞0.05);The positive expression rate of MMP -9 protein in PTC was significantly higher than those of nodular goiter and normal thyroid tissue(P＜0.05).and the rates in PTC with lymph node metastasis and without were 92.31%and 79.07%respectively(P＞0.05)，and the rates in stage Ⅲ-Ⅳand stageⅠ-Ⅱwere 89.66%and 74.07%respectively(P＞0.05).Their expressions of both TSHR and MMP -9 were not related to sex，age and tumor size of the patient(P＞0.05).［Conclusion］Over-expression of TSHR might be related to the development of PTC and become a early marker of the thyroid carcinoma.The over-expression of MMP -9 could be related to invasion and metastasis.

Key words:papillary thyroid carcinoma;TSHR;MMP-9;immunohistochemistry

R736.1

A

1671-7295(2012)05-0443-03

遼寧省大連市科技計劃基金資助項目(2011E15SF107)

2012-04-15;

2012-09-03

王朝暉(1963-)，女，遼寧大連人，副主任技師。E-mail:dlwangzhaohui@163.com

李玉中，主任技師。E-mail:dlliyuzhong@126.com