HPLC法測(cè)定維吾爾藥理血奇朗糖漿中沒(méi)食子酸的含量

魚 洋 朱敏輝 蘇來(lái)曼·哈力克

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830011;2.新疆吐魯番地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，新疆 吐魯番 838002;3.新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，新疆 烏魯木齊 830004)

理血奇朗糖漿是有大棗、天山堇菜、睡蓮花、玫瑰花等五味藥材組成的維吾爾醫(yī)常用成方制劑，收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)－維吾爾藥分冊(cè)》［1］，根據(jù)維吾爾醫(yī)藥理論，該糖漿具有理血，養(yǎng)肝，降熱，祛痰的功效，臨床用于發(fā)燒，頭疼，熱性咳嗽，高血壓等癥。目前該標(biāo)準(zhǔn)只有兩項(xiàng)試管鑒別，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。為了更好的控制制劑的質(zhì)量，保證臨床用藥安全、有效，采用高效液相色譜法測(cè)定了其中總沒(méi)食子酸的含量。

1 儀器、試劑與樣品

日本島津LC－20AT高效液相色譜儀，色譜柱為Waters Symmetry VP－ODS柱(4.6mm ×250mm，5μm)，KLZ －UP超純水儀(臺(tái)灣艾柯成都康寧實(shí)驗(yàn)專用純水設(shè)備廠)。沒(méi)食子酸對(duì)照品(批號(hào):110831－200302，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所);乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸為分析純。理血奇朗糖漿(批號(hào):20110730、20110809、20110813)由新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果

文獻(xiàn)報(bào)道理血奇朗糖漿中玫瑰花含揮發(fā)油、黃酮類、沒(méi)食子酸等成分［2－3］，睡蓮花也含沒(méi)食子酸，因此采用高效液相色譜法對(duì)理血奇朗糖漿中總沒(méi)食子酸進(jìn)行了測(cè)定，以作為質(zhì)量控制指標(biāo)。

2.1 色譜條件選擇 色譜柱為VP－ODS(4.6mm×250mm，5μm);流動(dòng)相為 0.4% 磷酸:乙腈(97∶3);檢測(cè)波長(zhǎng)270nm;流速 1mL·min－1;柱溫;40℃。

2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的沒(méi)食子酸對(duì)照品6.40mg，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)過(guò)濾，即得，40μg·mL－1對(duì)照品溶液。見(jiàn)圖1。

2.3 供試品溶液的制備精密量取理血奇朗糖漿3mL，置50mL的量瓶中，加流動(dòng)相稀釋定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)過(guò)濾，作為供試品溶液。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)取供試品，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算柱效，分離度，理論板數(shù)及拖尾因子，結(jié)果在選定的色譜條件下，沒(méi)食子酸和供試品中其它組分色譜峰可達(dá)到基線分離，沒(méi)食子酸色譜峰的分離度符合要求。見(jiàn)圖2。

圖2 理血奇朗糖漿供試品色譜圖

圖3 缺睡蓮花、玫瑰花陰性對(duì)照溶液色譜圖

2.5 缺睡蓮花、玫瑰花陰性對(duì)照供試品溶液的制備 取理血奇朗糖漿處方中的大棗、天山堇菜、倒提壺三味藥材原處方量的1/10(缺睡蓮花、玫瑰花藥材)，即大棗6g，天山堇菜2.8g，倒提壺 2.8 g，按制備工藝，加水 250mL，煮沸 1h，過(guò)濾，藥渣加水150mL，煮沸0.5h，合并濾液，定容至100mL，即得理血奇朗糖漿陰性對(duì)照溶液。精密量取該溶液3 mL，加流動(dòng)相20mL溶解，定容于50mL的容量瓶中，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)過(guò)濾，即得缺睡蓮花、玫瑰花陰性對(duì)照供試品。分別吸取供試品溶液，對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液10μL進(jìn)樣，結(jié)果陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾。見(jiàn)圖3。

2.6 線性范圍的考察 精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，加甲醇適量溶解，搖勻，制成50μg.mL－1的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，分別吸取 1、5、10、15、20μL 注入高效液相色譜儀中，記錄峰面積。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程:Y=3E+0.6X+12082(r=0.9999)。結(jié)果表明，沒(méi)食子酸在 0.0506μg～0.4060μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取理血奇朗糖漿3.0mL，照上述方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果平均含量為 0.748mg.mL－1，RSD=0.88%，精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取室溫下放置的理血奇朗糖漿供試品，精密吸取3.0mL，按上述方法供試品溶液，每隔一段時(shí)間，分別在 0.0、2.0、4.0、10、12h 進(jìn)樣 10μL，記錄峰面積。結(jié)果顯示樣品溶液在室溫下12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)分別精密量取1.5mL理血奇朗糖漿9 份，分別加 0.256mg·mL－1的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液 3.5、4.5、5.5mL，各 3 份，置 50mL 的量瓶中，加流動(dòng)相稀釋定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)過(guò)濾后進(jìn)樣10μL，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為100.95%(n=9，RSD=3.40%)。見(jiàn)表1。

表1 理血奇朗糖漿加樣回收率測(cè)定結(jié)果(n=9)

2.10 樣品的測(cè)定分別取3批理血奇朗糖漿，照上述方法測(cè)定含量。結(jié)果為0.7211 ～0.9205 mg.mL－1，平均含量為0.8301 mg.mL－1。

表2 理血奇朗糖漿中沒(méi)食子酸的含量(n=2)

3 討論

3.1 維吾爾成方理血奇朗糖漿由5味中藥組成，成分較為復(fù)雜，其中睡蓮花、玫瑰花均含沒(méi)食子酸，選用流動(dòng)相為0.4%磷酸:乙腈(97∶3)，供試品直接用流動(dòng)相稀釋，在選定的條件下沒(méi)食子酸色譜峰得到很好的分離。因此，樣品選用流動(dòng)相(0.4%磷酸:乙腈(97∶3))提取的方法。

3.2 方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，靈敏度高，適用于理血奇朗糖漿中總沒(méi)食子酸的分離與測(cè)定，總沒(méi)食子酸平均含量為0.8301μg.mL－1，下浮20% ，推薦沒(méi)食子酸的含量限度可定為不低于0.65μg/mL。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn) －維吾爾藥分冊(cè)［S］.1999:187

［2］趙軍四種維吾爾藥材化學(xué)成分與生物活性研究 浙江大學(xué)博士論文［D］，2009:62

［3］閏雪生姚乾元?jiǎng)⒄褟?qiáng)玫瑰花藥材中沒(méi)食子酸含量的HPLC測(cè)定法 現(xiàn)代中醫(yī)藥［J］2008，28(6)80－81