土家藥大山黃連抑菌實驗

吳宗暉 田 菂

(1.吉首市人民醫院，湖南 吉首 416000; 2.湘西自治州民族中醫院，湖南 吉首 416000)

大山黃連，系土家族民間常用的一種民族藥。民間又稱大車前、水紅菜、翳子草。來源于龍膽科獐牙菜屬植物雙點獐牙菜 Swertia bimaculata(Sieb.et Zucc.)Hook.f.et Thoms的全草［1］，性寒、味苦，具有清熱解毒、清肝利膽、止瀉消炎等作用。土家醫常用于消化不良，胃炎，急、慢性肝炎，膽囊炎，目赤腫痛，牙痛，腸炎，流行性感冒，尿路感染等疾病。現代研究發現其主要成分為獐牙菜苦苷等有效成分，可用于多種炎癥。大山黃連提取物抑菌實驗研究方面尚未見報道。為此，我們對大山黃連藥液進行了抑菌實

驗研究。現將結果報道如下。

1 材料

1.1 藥材:采自湖南保靖縣呂洞山，當地習稱“大山黃連”。藥物標本經內蒙古大學生物系馬毓泉教授鑒定為龍膽科獐牙菜屬植物雙點獐牙菜Swertia bimaculata(Sieb.et Zucc.)Hook.f.et Thoms 。

1.2 標準菌株:金黃色葡萄球菌ATCC29213;表皮葡萄球菌ATCC12228;大腸埃希菌 ATCC25922;銅綠假單胞菌ATCC27853;糞腸球菌ATCC29212。營養瓊脂培養基，購于北京海淀區微生物培養基制品廠。

1.3 供試菌株菌種:來源于本院微生物學實驗室保存的菌種，用前經過鑒定，為典型菌株。1#ATCC12228表皮葡萄球菌、2#ATCC29213金黃色葡萄球菌、3#ATCC25922大腸埃希菌、4#ATCC27853銅綠假單胞菌、5#ATCC29212糞腸球菌、6#蠟樣芽胞桿菌(嘔吐物標本分離)、7#肺炎克雷伯菌肺炎(痰標本分離)、8#銅綠假單胞菌(痰標本分離)。

2 方法

2.1 藥液制備:稱取大山黃連藥材50g碎成粗末，置于燒杯中，加適量純化水浸泡1h后煎煮，沸后用文火再煎30min，濾出煎液后向燒杯中加入適量純化水按上法再煎煮1次，合并2次濾液減壓濃縮至50mL，置4℃保存備用。藥液濃度相當于1毫升含1g生藥。

2.2 瓊脂稀釋法:將不同濃度的抗菌藥物，加入融化并冷至50。C左右的定量M－H瓊脂中，制成含不同抗菌藥物濃度的平板，接種受試菌，孵育后觀察細菌生長情況，肉眼觀察以抑制細菌生長的瓊脂平板所含最低藥物濃度判為MIC。

2.3 含藥瓊脂平板制備:藥物制成1g/mL，按1:5、1:10、1:20、1:40配制成藥物瓊脂平板。瓊脂厚度約4mm(90mm直徑平板傾倒瓊脂總量為25ml)。

2.4 接種物制備與接種:用直接菌落懸液法制備濃度相當于0.5麥氏標準比濁管的菌懸液，再1:10稀釋。含藥瓊脂平板使用前，從2～8。C冰箱取出置35。C孵箱30min，待瓊脂平板表面水分干燥后進行接種。以接種環取制備好的菌液(約1～2μL)接種于瓊脂平板表面，形成直徑為5～8mm的菌斑，每個菌斑含菌數約為104CFU。接種順序是先接種無藥對照平板，而后從低藥物濃度向高藥物濃度平板。

2.5 孵育:瓊脂平板接種好菌液后，將平板置室溫待菌液被瓊脂吸收后(一般不超過30分鐘)把瓊脂平板倒置放入(35±2)。C孵箱孵育20～24h。

2.6 結果判讀:將平板置于暗色、無反光物體表面判讀試驗終點，以抑制細菌生長最低藥物濃度為MIC。接種處出現單個菌落或模糊薄霧狀可忽略不計。［2、3、4］

3 結果

對革蘭氏陽性菌有較好的抑菌性，除9#空白對照1:5、1:10、1:20、1:40 均未生長;藥物濃度為 1:5 時 1#、2#、3#、4#4株革蘭氏陽性菌均未見生長，1:10時除3#、4#有較弱的生長外余2株均見明顯生長，1:20時皆呈明顯生長;其余菌株在藥物濃度為1:5時即有明顯生長。如表1所示:1#ATCC29213金黃色葡萄球菌、2#ATCC12228表皮葡萄球菌、3#ATCC29212糞腸球菌、4#蠟樣芽胞桿菌(嘔吐物標本分離)、5#ATCC27853銅綠假單胞菌、6#ATCC25922大腸埃希菌、7#肺炎克雷伯菌肺炎(痰標本分離)、8#銅綠假單胞菌(痰標本分離)、9#空白對照。藥液濃度為1克/毫升生藥。

表1 大山黃連抑菌試驗結果

4 討論

抗生素從發現至今已成為了人類抵御細菌感染的有力武器。［5、6、7］但隨著抗生素的長期應用甚至濫用，越來越多的細菌對現有的抗生素產生了耐藥性，降低了現有抗生素的效率。由于中藥及民族藥的特殊性，細菌較少對中藥及民族藥產生耐藥性，并且中藥及民族藥具有毒副作用小，取材方便，經濟實惠的優點，因此研究和開發中藥及民族藥抗生素對解決耐藥菌株的問題具有重大意義，這也受到了眾多學者的廣泛關注。大山黃連抑菌實驗表明，對部分革蘭氏陽性菌有較好抑制作用，為治療因革蘭氏陽性菌感染引起的疾病提供了科學依據。大山黃連對其它菌株菌種無抑制作用。本次實驗結果對中藥及民族藥抗生素的開發和臨床的用藥都有一定的參考價值。本次實驗僅進行了單味民族藥的體外抑菌實驗，而中藥及民族藥在體內的作用機制及其有效成分都極為復雜，在人體內是否能達到體外實驗的效果還有待進一步的研究。

［1］周慎，譚光波.湖南藥物志(第七卷)［M］.長沙:湖南科學技術出版社，2004:5080～5081.

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［3］王嵩.中草藥抗細菌感染的研究［J］.北京中醫雜志，20O2，21(4):249 ～2

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［5］左國營，韓峻，余 巍，等.47種中草藥提取物的體外抗菌活性篩選研究［J］.中國藥房，2005，16(1O):798～799

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