藥理效應法對藏藥熏倒牛不同提取工藝的評價△

景 明 李 煬 王晶晶 藺興遙 劉喜平 任 遠

(1.甘肅中醫學院，甘肅 蘭州 730000;2.甘肅省中藥藥理與毒理學重點實驗室，甘肅 蘭州 730000)

藏藥熏倒牛為薔薇綱牦牛兒苗亞綱熏倒牛科植物B.iebersteiniacea的干燥地上部分，藏名譯音為明見賽保，民間又稱臭花椒、狼尾巴。主要分布于甘肅、青海、寧夏和四川(諾爾蓋)等地［1］。具有消炎止痛，清熱解毒，清血熱，祛風毒的作用，用于治療各種炎癥、結核癥、丹毒、瘧疾、咽喉腫痛、胃痛、全身水腫、中風、蟲蛇咬傷等［2］。對熏倒牛化學成分及藥理作用的研究已有報道［3－4］，但用藥理效應法評價熏倒牛提取工藝的研究尚未見報道。本實驗采用藥理效應法評價熏倒牛的提取工藝方法，為其開發和利用提供參考依據。

1 材料

1.1 藥品與試劑:二甲苯(天津市德恩化學試劑有限公司，批號20070914);戊巴比妥鈉(北京化學試劑公司，批號060222);其余試劑均為分析純;熏倒牛藥材經甘肅農業大學藥用植物教研室陳垣教授鑒定為熏倒牛B.heterostemon。

1.2 儀器:RB－200智能熱板儀(成都泰盟科技有限公司);BT125D電子分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司);KQ－100超聲波清洗器(昆山市超聲技術有限公司);R－200旋轉蒸發儀(瑞士BUCHI公司);HH－601恒溫水浴鍋(金壇市恒豐儀器公司)。

1.3 動物:昆明種小鼠，體質量(20±2)g，雌雄兼用，由甘肅中醫學院實驗動物中心提供，合格證號SCXK(甘)2011－0001;動物顆粒飼料由北京科奧協力飼料有限公司提供。

2 方法［5－6］與結果

2.1 不同工藝提取物的制備

2.1.1 傳統水煎工藝提取物的制備:稱取熏倒牛藥材粉末200g，加15倍量水煎煮1.5h，濾取藥液，藥渣再用12倍量水煎煮1.5h，合并兩次藥液，濾過，濾液濃縮至200mL，備用。

2.1.2 傳統水煎醇沉工藝提取物的制備:稱取熏倒牛藥材粉末200g，加15倍量水煎煮1.5h，濾取藥液，藥渣再用12倍量水煎煮1.5h，合并兩次藥液，濾過，濾液濃縮至1:1(g·mL－1)，攪拌下加入乙醇，使含醇度達70%，濾過，濾液回收乙醇后濃縮至200mL，備用。

2.1.3 醇提工藝提取物的制備稱取熏倒牛藥材粉末200g，加15倍量70%乙醇回流提取1.5h，濾取藥液，藥渣再用12倍量70%乙醇回流提取1.5h，合并兩次藥液，濾過，濾液回收乙醇后濃縮至至200mL，備用。

2.2 對小鼠熱板法致痛的影響:選擇痛閾值合格的雌性小鼠48只，隨機分為4組，分別為空白對照組、水煎提取組、水煎醇沉組、乙醇提取組。按熱板法測定每只小鼠痛閾值3次，取其平均值作為給藥前痛閾值。各組分別灌胃給藥，每只0.2 mL(10g原藥材/kg)，對照組給予等容量蒸餾水，連續給藥7d。末次給藥后1h測定各小鼠痛閾值，并計算痛閾提高率。各組痛閾值提高率分別為水煎提取物46.49%、水煎醇沉提取物36.99%、乙醇提取物102.04%，表明70%乙醇提取物鎮痛作用最明顯。結果見表1。

痛閾提高率(%)=(給藥后平均痛閾值－給藥前平均痛閾值)/給藥前平均痛閾值×100%

表1 熏倒牛提取物對小鼠熱板致痛的影響(x±s，n=12)

2.3 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響:小鼠48只，雌雄各半，隨機分為4組，分別為空白對照組、水煎提取組、水煎醇沉組、乙醇提取組。各組小鼠右耳涂藥1次，每次0.2mL(10g生藥/kg)，空白對照組涂以等容量蒸餾水，連續3d，末次給藥30min后，各給藥組用蒸餾水洗去耳廓上的藥物，并于右耳的內側均勻涂以二甲苯，每只0.05mL，左耳作為對照。30min后處死動物，用直徑8 mm的打孔器于左右耳對稱處打下耳片，分別稱重，計算各組動物的腫脹度，并計算腫脹抑制率。70%乙醇提取物能夠顯著抑制小鼠耳腫脹(P＜0.01)，水煎提取物、水煎醇沉提取物能夠抑制小鼠耳腫脹(P ＜0.05)。結果見表2。

耳片腫脹度=致炎側耳片質量(右)－對照側耳片質量(左耳)

抑制率(%)=(對照組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/對照組平均腫脹度×100%

表2 熏倒牛提取物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響(x±s，n=12)

3 討論

熏倒牛植化研究發現其干燥全草含多量鞣質和多糖，在體外抗菌藥效的跟蹤研究中分離獲得了β－谷甾醇、傘形花內脂、槲皮素、木犀草素－7－O－β－葡萄糖苷、山羊豆堿、反式－4－羥基山羊豆堿、甘露糖醇等6個生理活性物質［3］。雖然熏倒牛在民間的藥用價值較大，但有關熏倒牛的研究報道并不多，并且多局限于成分分析的研究。我們通過藥理效應研究熏倒牛的提取工藝，為其制劑提取工藝的優選及新產品開發提供科學依據。

［1］中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志(第一卷)［M］.北京:科學出版社，2004:415.

［2］楊永昌.藏藥志［M］.西寧:青海人民出版社，1991:263.

［3］王維恩，張曉峰，沈建偉等.藏藥熏倒牛化學成分研究［J］.天然產物研究與開發，2009，21:199－202.

［4］唐榮江，閔照華，黨合群.藏藥熏倒牛的實驗藥理研究［J］.西北藥學雜志，1988，3(3):8 －9.

［5］陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京:人民衛生出版社，2006:2942－3681.

［6］徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實驗方法學［M］.第3版.北京:人民衛生出版社，2002:8821.