HPLC法測定蒙藥毛浩日查干顆粒劑二苯乙烯苷含量

孟克巴牙爾 韓圖雅

(1.內蒙古自治區國際蒙醫醫院，內蒙古 呼和浩特 010020;2.內蒙古醫學院蒙醫學院2009級碩士研究生，內蒙古 呼和浩特 010059)

本品主要由手掌參、黃精、玉竹、何首烏、廣棗5味藥材組成。具有補腎壯陽、滋補強身，用于腎寒、腎虛、精血不足、筋骨酸痛、年邁體虛等。收載衛生部藥品標準蒙成分冊［1］。

1 儀器、試劑及樣品

1100型高效液相色譜儀(美國Agilentg公司制造);NC－2000色譜工作站(大連中北公司);TG332A型1/10萬光電天平(湘儀制造);AS2060B型超聲清洗儀(上海科學儀器公司制造)。

甲醇、乙腈:色譜純，由美國 Tedai公司生產;磷酸、乙醇為分析純;水為三蒸水。二苯乙烯苷由中國藥品生物制品檢定所提供。毛浩日查干－5顆粒劑由內蒙古復旦蒙耀科技有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 耐用性試驗及色譜條件:Agilent XDB－C8柱 (150×4.6 mm，5μm)、非羅門 Kromasil C18柱(200 × 4.6 mm，5μm);流動相:乙腈 － 水(24:86)、甲醇 － 水(20:60);流速:1mL·min－1;測定波長320nm;柱溫30℃。以上條件均可基線分離樣品中二苯乙烯苷，分離度大于1.2。試驗采用用Kromasil C18柱;流動相為乙腈－甲醇－水(40:10:150)［2］。

2.2 測定溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備:精密稱取二苯乙烯苷對照品適量0.75mg，置10mL量瓶內，加甲醇溶解，配制成濃度為0.075mg·mL－1的溶液(棕色量瓶內保存)。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品(粉碎，研細，過100目篩)100mg，精密稱重，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，靜止，用0.45μm濾膜濾過，即的。

2.2.3 專屬性試驗:依照樣品制備方法制備不含何首烏的毛浩日查干－5顆粒劑陰性制劑，依照色譜條件測定，陰性對照品在二苯乙烯苷保留時間內無干擾峰出現，表明其它藥材對二苯乙烯苷的測定無干擾。

圖1 標準品

圖2 樣品

2.3 線性關系考察:精密吸取對照品溶液1mL置10mL量瓶內為A溶液，精密量取A溶液1mL同法稀釋10倍為B溶液。吸取 B 溶液 2.5、5μL，A 溶液 1、2、4、8μL 按色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，對照品含量為橫坐標，繪制標準曲線，作回歸分析。回歸方程:Y=Y=11149927χ －20038，r=0.9999。二苯乙烯苷在 0.0075 ～0.12μ范圍內線性關系良好。

2.4 精密度試驗:精密吸取同一供試品溶液10μL，連續進樣5次，測定二苯乙烯苷峰面積平均為1256732±8972，二苯乙烯苷峰面積的RSD為0.71%。

2.5 穩定性試驗:取同一供試品溶液10μL，分別于樣品制備后第0、2、4、8h測定二苯乙烯苷峰面積，二苯乙烯苷峰面積的RSD為0.72%。樣品溶液在8h內穩定。

2.6 重復性試驗:取同批次樣品，按2.2項下的方法制備樣品 5 份。測定結果平均 0.65 mg·g－1，RSD 為1.7%

2.7 回收率試驗:取已知二苯乙烯苷含量的毛浩日查干－5顆粒劑，置10mL容量瓶內，分別精密加入二苯乙烯苷對照品溶液(0.075mg·mL－1)，加甲醇至刻度，溶液轉入置50mL具塞錐形瓶中，按供試品方法制備，提取，過濾。按色譜條件測定，計算回收率，平均回收率為99.26%;RSD=1.8%。

表1 毛浩日查干－5顆粒劑二苯乙烯苷回收率測定

2.8 樣品測定:分別吸取對照品溶液與樣品溶液10μL，依上述色譜條件測定5批樣品二苯乙烯苷含量，測定結果分別為 0.65、0.56、0.74、0.48、0.83 mg·g－1，二苯乙烯苷平均含量分別為0.65mg·g－1(n=3)，樣品中二苯乙烯苷含量在 0.48 ～0.83mg·g－1之間，批次之間含量差異較大。

3 討論

本試驗對樣品溶液制備方法進行系統性研究。分別考察超聲、回流、浸泡提取方法，超聲處理方法操作簡便、省時，更可取。對乙醇、甲醇、乙腈提取溶劑考察，三者對二苯乙烯苷溶出率并無明顯差異;本文采用甲醇提取。提取時間測定，樣品超聲處理30min后二苯乙烯苷含量不再增加。

對流動相考察表明，乙腈－水(24:86)、甲醇－水(20:60)均可基線分離樣品中二苯乙烯苷，分離度大于1.2，但分離度變異較大。采用乙腈－甲醇－水(40:10:150)分離效果更為理想。色譜柱適用性研究表明，Agilent XDB－C8柱 (150 ×4.6 mm，5μm)、非羅門 Kromasil C18柱(200 ×4.6 mm，5μm)均可適用本試驗測定，本文采用非羅門Kromasil C18柱(200×4.6 mm，5μm)。測定結果表明，5批樣品中二苯乙烯苷含量差異較大，可能與顆粒劑制備有關。采用HPLC法測定毛浩日查干－5顆粒劑指標性成分，可作為該藥質量控制的方法之一。該方法重現性好，操作簡便、靈敏、準確、可靠。

［1］國家藥典委員會.衛生部藥品標準蒙藥分冊［S］.1998，127

［2］國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.中國醫藥出版社，2010，164