蒙藥嘎日迪－12紅花中羥基紅花黃色素A的含量

鮑勁松 白英歌

(呼倫貝爾市人民醫院，內蒙古 海拉爾 021000)

嘎日迪－12由漏蘆花、多葉棘豆、麥冬、紅花、人工牛黃等12味藥組成。其中漏蘆花功能為殺“粘”、清熱解毒，根據相關文獻，對其進行蘆丁、槲皮素、山奈素的考察，結果未檢出明顯的色譜峰。紅花具通經散瘀，消腫止痛功能，參照《中國藥典》2005年版一部紅花項下高效液相色譜法(附錄ⅥD)對其進行含量測定，通過實驗分析，結果分離效果和重現性好，專屬性強。

1 儀器與試劑

LC－10ATvP泵，SCL－10AvP型控制器，SPD－10AvP型檢測器，CLass－vP色譜工作站。島津UV—1700型紫外—可見分光光度儀。HU3120B超聲波清洗器。羥基紅花黃色素A對照品(批號:111637－200503):由中國藥品生物制品檢定所提供;嘎日迪－12由呼倫貝爾市鄂溫克旗蒙醫院提供。甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件:本實驗采用Dimonsi C18色譜柱 (250×4.6mm，5μm);甲醇 － 乙腈 －0.7%磷酸(26:2:72)(用三乙胺調pH至6.0±0.1)為流動相;柱溫30℃;403nm作為檢測波長;對照品及樣品理論板數不低3000。進樣量:10μL

2.2 供試品與對照的制備

2.2.1 對照品溶液的制備:取羥基紅花黃色素A對照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成每1mL含15μg的溶液，即得。

2.2.2 樣品溶液的制備:取本品，研細，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，稱定重量，超聲(功率250w，頻率33kHz)40min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 提取效率的考察:以25%甲醇作為提取溶劑進行超聲提取，為保證被測成分的完全提取，實驗中考察了超聲10、20、30、40min不同提取時間對提取效率的影響，含量測定結果見表1。從表中數據可見，超聲40min供試品中羥基紅花黃色素A的含量基本穩定不變，故將提取時間定為超聲40min。

表1 羥基紅花黃色素A提取效率的考察

2.3.2 線性關系考察:取羥基紅花黃色素 A對照品約8mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加25%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻(0.0668 mg·mL－1)，精密吸取 1、2、4、5、8、10mL，分別置25mL量瓶中，加25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取10μL進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對對照品進入的量進行回歸分析，結果羥基紅花黃色素A在0.00668μg～0.0668μg范圍內呈良好的線性關系。回歸方程為 y=19639728x+4795.9，r=0.9998。標準曲線數值見表2。

表2 標準曲線數值表

2.3.3 穩定性試驗:溶液穩定性試驗 取同一份供試品溶液，分別于 0、2、6、8、12h 進行測定，結果見表3。從表中數據可以看出，羥基紅花黃色素A在12h內的峰面積積分值基本穩定不變。2.3.4 精密度(重復性試驗):取同一批號(20090802)供試品6份，各約2g，精密稱定，按擬定方法制備供試品溶液，測定每份供試品的含量，結果見表4。

表3 標準曲線數值表

表4 重復性試驗試驗結果

2.3.5 準確度(加樣回收試驗):取供試品(含量為0.4328 mg·g－1)6份，各約1g，精密稱定，分別置6個具塞錐形瓶中，精密加入25mL25%甲醇，再精密加入用25%甲醇配制的羥基紅花黃色素A對照品溶液(羥基紅花黃色素A濃度0.0168 mg·mL－1)25mL，分別按擬定方法制備供試品溶液，測定每份的含量，計算回收率，結果見表5。

表5 羥基紅花黃色素A加樣回收試樣結果

2.3.6 耐用性實驗:換不同的廠家，不同型號的色譜柱，取樣品重復性試驗中的1號、2號供試品及對照品溶液，分別進樣，測定含量。結果見表6。

表6 不同色譜柱的耐用試驗

2.3.7 樣品含量測定:取本品按擬定方法制備供試品溶液，測定3批樣品的測定結果見表7。

表7 樣品中羥基紅花黃色素A含量測定結果

2.3.8 專屬性考察:陰性對照試驗:按擬定方法制備供試品溶液和對照品溶液。另取按處方比例并以相同工藝制備的缺紅花的陰性對照品溶液，按供試品溶液制備法制得的陰性對照溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，測得結果為:陰性對照色譜圖中在與羥基紅花黃色素A對照品以及供試品色譜相應的保留時間處無色譜峰出現，表明其他組分對羥基紅花黃色素A的測定無干擾。見圖 1、2、3。

圖1 對照品圖譜

圖2 供試品圖譜

圖3 陰性對照圖譜

3 小結

采用高效液相色譜法對嘎日迪－12散進行了羥基紅花黃色素A的含量測定，該方法簡便快速，經加樣回收試驗及精密度試驗、穩定性試驗、耐用性等試驗，結果準確可靠，為該藥質量標準研究奠定了良好的基礎。