HPLC法測定芯芭中木犀草素的含量

趙俊蘋 塔 娜 侯 敏

(1.呼和浩特市食品藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020;2.內(nèi)蒙古食品藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

芯芭收載于《衛(wèi)生部藥品標準》蒙藥分冊［1］。根據(jù)“2009～2010年度國家藥品標準提高工作科研立項綜合意見單”增修訂內(nèi)容的要求，通過查閱有關文獻［2］，對芯芭中所含木犀草素進行了含量測定研究，參照《中國藥典》2010年版一部［3］“北劉寄奴”項下的含量測定方法，以木犀草素作為指標成分，進行含量測定方法研究，經(jīng)分析方法驗證，該方法重現(xiàn)性好，專屬性強，得到了比較滿意的分析結(jié)果。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:島津 LC－20泵，CBM－20A型控制器，SPDM20A型檢測器，LC－Solution色譜工作站。

1.2 試劑與試藥:木犀草素對照品(批號110823－200903，供含量測定用)中國藥品生物制品檢定所;芯芭由錫盟蒙藥研究所提供。甲醇為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

2.1.1 色譜柱:色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實驗研究采用 ALLtima HP C18柱 (4.6×250mm)。流動相:乙睛 －0.3%磷酸(30∶70)，流速:1.0mL/min;檢測波長:347nm;理論板數(shù)按木犀草素峰計不得低于4000。

2.1.2 供試品溶液的制備:取本品粉末(過二號篩)約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率500W，頻率40KHz)50min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 對照品溶液的制備:取木犀草素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含8μg的溶液，即得。

2.1.4 陰性對照試驗:按 2.1.2 與 2.1.3 項下的方法制備供試品溶液和對照品溶液。分別精密吸取甲醇空白溶液、對照品溶液、供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，測得結(jié)果為:空白溶液色譜圖中在與木犀草素對照品以及供試品色譜圖相對應的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其它組分對木犀草素的測定無干擾。見圖(1、2、3)。

2.1.5 線性關系考察:精密稱取木犀草素對照品約4.079mg，置100mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。再精密吸取10mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。(木犀草素 8.158μg·mL－1)分別取 1、2、5、10、15、20μL 進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對進樣量進行回歸分析，結(jié)果木犀草素在8.158～163.16ng范圍內(nèi)呈良好的線性關系?；貧w方程為y=4306.6x－711.79;r=1。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗 :取同一份供試品溶液，分別在0、2、6、10、12h進行測定，結(jié)果表明木犀草素在12h內(nèi)的面積積分值基本穩(wěn)定不變，RSD為0.47%。

2.1.7 重復性試驗 :取同一批樣品6份，各取粉末(過三號篩)約1g，測定每份樣品含量，按外標法計算含量，結(jié)果平均含量為0.0205%，RSD為0.71%。

2.1.8 加樣回收試驗:取供試品(含量 0.205mg·g－1)6份，各約0.5g，精密稱定，置6個具塞錐形瓶中，分別依次精密加入木犀草素對照品溶液(木犀草素0.0512)2.0mL，再分別精密加甲醇使成25mL，搖勻，按2.1.3項下方法操作，測定每份含量，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 木犀草素加樣回收試驗結(jié)果

2.1.9 樣品含量測定:兩批樣品的測定結(jié)果見表2。

表2 樣品中木犀草素含量測定結(jié)果

圖1 陰性對照色譜圖

圖2 對照品色譜圖

圖3 樣品色譜圖

3 討論

檢測波長的選擇:精密稱取木犀草素對照品適量，用甲醇制成每1mL含25μg的溶液，通過島津SPD－M20A型二極管陣列檢測器對木犀草素自200～400nm波長范圍掃描。結(jié)果木犀草素在347nm處有最大吸收。結(jié)合《中國藥典》2010年版一部“北劉寄奴”藥材項下含量測定方法，選擇347nm作為檢測波長。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標準蒙藥分冊［S］.1998·18

［2］常新全，丁麗霞.中藥活性成分分析手冊［下冊］［M］.學苑出版社，2002·1528

［3］國家藥典委員會·中國藥典［S］.中國醫(yī)藥科技出版社，2010，91