蟾灰膠囊質量標準的初步研究

張 華

(山東中醫藥大學，山東濟南 250355)

癌癥已成為人類致死的首要病因。目前臨床放化療藥物效果皆不夠理想。用中藥治療癌癥［1-3］，不僅能扶正抗癌，且能針對性的治療癌癥，恢復受損的臟器功能，收到良好效果。蟾灰膠囊為驗方制劑，由干蟾皮、灰樹花、人參、全蝎等藥材組成，是一劑療效突出的扶正抗癌藥。參考相關文獻 ［4-6］，現對其質量控制方法進行探討，為深入研究奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LabAlliance高效液相色譜儀;Diamonsil C18(5 μm，250 mm×4.6 mm)柱。FA1104型電子分析天平 (上海精密科學儀器有限公司);ZF—2型三用紫外分析儀 (上海安亭電子儀器廠)。

1.2 對照品與供試品 人參皂苷Rg1(ginsenoside批號110703-200424);華蟾酥毒基 (cinobufagin批號 110803-200504);脂蟾毒配基 (resibufogenin批號110718-200507)，均購自中國藥品生物制品檢定所。蟾灰膠囊 (自制)。灰樹花、干蟾皮、全蝎、人參均符合相關質量標準要求。

1.3 試劑 硅膠G(薄層色譜用，青島海洋化工有限公司，批號20051056);甲醇色譜純 (天津市四友生物醫學技術有限公司，批號070515101)其余試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1干蟾皮鑒別［6-7］取內容物粉末5.0 g，加乙醇60 mL，回流30 min，濾過，濾液置5 mL量瓶加乙醇至刻度，通過D101大孔樹脂柱，先用水洗脫至無色，棄水洗液;再用30%乙醇洗至無色，棄30%乙醇洗脫液;后用乙醇洗脫，收集洗脫液100 mL，水浴揮干，殘渣用1 mL乙醇溶解，為供試品溶液。取干蟾皮藥材，同法制備陽性對照液。取華蟾酥毒基對照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法 (附錄ⅦB)試驗，吸取上述3種溶液各10、10、6μL，分別點于同一硅膠G薄層板，以環己烷-三氯甲烷-丙酮 (4∶3∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。結果見圖1。

圖1 干蟾皮薄層鑒別

2.2 人參鑒別［8-11］取內容物細粉5 g，研細，用硅藻土分散，加甲醇20 mL，超聲20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣用水溶解，移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇萃取，萃取液加3倍氨試液，振搖，放置分層，取上清液水浴蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解。取人參皂苷 Rg1對照品制成0.24 mg/mL的對照液。取上述溶液各8、4 μL分別點于同一硅膠薄層板，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水 (15∶40∶20∶10)10℃放置后的下層液，展開，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。結果見圖2。

圖2 人參的鑒別

3 定量測定

3.1 標準對照液的制備 精密稱取減壓干燥24 h的脂蟾毒配基1.60 mg，華蟾酥毒基1.82 mg，用甲醇溶解并定容至5 mL，從中精取0.1 mL稀釋至1 mL，得對照品溶液。

3.2 供試液的制備［6-7］取3批膠囊內容物研細，約10 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL精密稱定，回流2 h，放冷，用甲醇補足減失質量，濾過，取續濾液，微孔濾膜濾過，即得。

3.3 色譜條件［6-7］以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑;以0.5%磷酸二氫鉀溶液-乙腈 (50∶50)(用磷酸調pH值3.2)為流動相，體積流量1 mL/min，檢測波長為296 nm，柱溫40℃，理論板數按脂蟾毒配基峰計算不低于4 000。

3.4 定量測定方法學考察［12］

3.4.1 專屬性試驗 陰性對照液的制備，取除干蟾皮外的三味藥材，同本制劑制備方法制備陰性顆粒，同供試液的制備方法制備陰性對照液。

取陰性對照液及標準對照液，分別在測定的條件下進樣，結果在與標準對照液色譜峰保留時間相應部位，陰性對照液無色譜吸收峰，表明該方法專屬性良好，陰性對照無干擾。結果見圖3。

3.4.2 線性關系及線性范圍 取不同質量濃度的標準對照液分別進樣50 μL，以進樣質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖并線性回歸，得脂蟾毒配基和華蟾酥毒基的標準曲線Y=25 735 876.5X+23 179.5，r=0.999 9，和Y=312 973 96X+12 656，r=0.999 5，表明兩者質量濃度在0.003 2～0.32 mg/mL和0.003 64～0.364 mg/mL范圍內，峰面積與質量濃度之間呈良好的線性關系。

3.4.3 精密度試驗 精密吸取標準溶液，分別連續進樣6次，記錄峰面積，計算脂蟾毒配基和華蟾酥毒基RSD分別為1.8%和1.9%，表明儀器精密度良好。

3.4.4 穩定性試驗 精制后的供試液，分別在0、4、8、12、24、48 h進樣1次，測定，計算脂蟾毒配基和華蟾酥毒基RSD分別為2.0%和2.2%，說明供試液在48 h內穩定。

圖3 陰性對照液 (A)、對照品 (B)和樣品 (C)HPLC色譜圖

3.4.5 重復性試驗 同一批樣品，按照3.2項下方法精制供試液6份，分別測定，計算脂蟾毒配基和華蟾酥毒基的含量，RSD分別為1.6% 和1.7%，說明重復性良好。

3.4.6 回收率試驗 精密稱取已知含有量的樣品約5 g，精密稱定，共6份，分別加入標準品0.8 mL、0.6 mL質量濃度為0.32 mg/mL和0.364 mg/mL的脂蟾毒配基及華蟾酥毒基標準對照液，按3.2項下方法制備，分別進樣測定，結果見表1、表2。表明測定結果可靠。

表1 脂蟾毒配基回收率考查結果

表2 華蟾酥毒基回收率考查結果

3.5 蟾灰膠囊樣品測定 取供試液，進樣50 μL，測定并計算樣品華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的質量分數。測定結果見表3。

3批樣品中華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的平均質量分數分別為0.052 9 mg/g和0.051 2 mg/g，考慮到干蟾皮有一定的毒副作用，擬定華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的質量分數范圍為0.046～0.058 mg/g。

4 討論

蟾灰膠囊中人參，蟾皮均有獨特的顯色斑點。干蟾皮鑒別樣品液的精制方法開始借鑒2010年版《中國藥典》蟾酥項下鑒別方法，結果背景干擾很大，經改進后有好轉，能較好達到鑒別的目的。灰樹花和全蝎至今沒有找到專屬性好的鑒別方法，暫不對這兩味藥進行鑒別。

表3 蟾灰膠囊測定結果

脂蟾毒配基與華蟾酥毒基的高效液相吸收峰相鄰但能達到較好的分離，可同時測定兩種成分的含有量。測定方法快速便捷，方法學考查結果表明能保證測定結果的準確可靠。根據研究結果，暫定本品含脂蟾毒配基和華蟾酥毒基在0.046～0.058 mg/g范圍內。

［1］李益民.中醫藥治療癌癥體會［J］.國醫論壇.2010，25(3):22.

［2］張天太，張洪珍，段昕波.參芪扶正注射液聯合甲地孕酮對晚期癌癥患者生存質量的影響［J］.現代中西醫結合雜志，2011，20(15):1824.

［3］Cho W C.Scientific evidence on the supportive cancer care with Chinese medicine ［J］.Chin J Lung Cancer，2010，13(3):190.

［4］張 萍，王 峰，林瑞超.液相法測定強力救心滴丸中蟾酥的華蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量［J］.藥物分析雜志，2005，25(4):436.

［5］羅 虹，李 文，孫麗燕.PHLC法測定蟾麝救心丸中蟾酥的含量［J］.光譜實驗室，2005，22(3):544.

［6］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:360.

［7］莊美芳，梁桃圣.干蟾皮質量標準的研究［J］.中國藥房，2008，19(30):2363.

［8］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.中國醫藥科技出版社，2010:8.

［9］陳來景，張善杰，岳隨有.芪參膠囊中黃芪、人參的鑒別［J］.中國中醫藥現代遠程教育，2010，8(1):162.

［10］馮欣煜，姚志凌.地黃固本膠囊的質量標準研究［J］.中國現代藥物應用，2007，1(4):37.

［11］賀云杰，趙 晨，李 妍，等.參附強心丸中人參、大黃、桑白皮的薄層鑒別及烏頭堿的限度檢查［J］.世界科學技術-中醫藥現代化，2009，11(3):468.

［12］周 晶，張德福.HPLC法測定鶴蟾膠囊中脂蟾毒配基的含量［J］.中國藥師，2010，13(1):53.