TEL-AML1融合基因的表達與兒童急性淋巴細胞白血病的療效及預后相關性研究

謝淑佩，段炤，陳媛媛，梁昌達

（江西省兒童醫院血液科，江西南昌330006）

TEL-AML1融合基因的表達與兒童急性淋巴細胞白血病的療效及預后相關性研究

謝淑佩，段炤，陳媛媛，梁昌達

（江西省兒童醫院血液科，江西南昌330006）

目的研究TEL-AML1融合基因在兒童急性淋巴細胞白血病（ALL）中的表達情況，探討該融合基因對其療效及預后的影響。方法選取200例ALL患兒作為研究對象，分析TEL/AML1、E2A/PBX1、m-BCR/ ABL、AF4/MLL四種融合基因的表達情況，并分為TEL/AML1+組（44例）與TEL/AML1-組（135例），比較兩組患兒細胞抗原、年齡、白細胞計數、誘導化療緩解、病死率及中樞侵犯等情況。結果TEL/AML1+表達均為B細胞系，共計44例，占22.0%，14例E2A/PBX1陽性（7.0%），5例AF4/MLL陽性（2.5%），2例m-BCR/ABL陽性（1.0%）。TEL-AML+組患兒CD13與CD20的表達與TEL-AML-組患兒存在顯著性差異（P＜0.05），具有統計學意義，其他抗原表達未見與陰性組有顯著差異。TEL-AML1+組患兒與TEL-AML1-組患兒比較，白細胞計數低于20×109/L，短期治療達CR比例更高，而死亡率及中樞神經侵犯比例更低，提示TEL-AML1+組患兒危險程度明顯低于陰性組。結論TEL/AML1融合基因在兒童急性淋巴細胞型白血病中較為常見，尤其是B細胞性ALL，其陽性表達是預后較好的標志之一。

TEL-AML1融合基因；兒童；急性淋巴細胞型白血病；

目前發現細胞遺傳學的改變在急性白血病(Acute leukemia，AL)發生中具有重要的作用，可增加造血細胞的自我更新及增殖能力，改變細胞的分化機制，引起造血干細胞或定向祖細胞向白血病細胞轉化。較為常見的細胞遺傳學異常包括染色體易位、染色體數目改變和原癌基因異常表達[1-2]。TEL-AML1融合基因在兒童急性淋巴細胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia，ALL)較為常見。本次研究收集兒童ALL患兒的骨髓細胞標本，分析TEL-AML1融合基因在兒童急性淋巴細胞白血病中的表達及其與臨床療效的相關性，為評估ALL患兒的治療反應和預后、預防復發提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2007年1月至2011年12月我科收治的200例ALL患兒作為研究對象，所有研究標本來源于我院診斷為ALL患兒的骨髓細胞，均符合MICM型診斷標準。其中男性124例，女性76例，年齡范圍4個月～12歲，中位年齡4.6歲，初發時外周血WBC(1.1～398.0)×109/L。

1.2 標準

1.2.1 納入標準1）年齡＜14歲；2）于我院經骨髓檢查確診為ALL的初診患兒；3）復發的ALL患兒近4周內未用過激素及化療。

1.2.2 排除標準1）入院前4周內已給予激素或化療的患兒；2）患兒及家屬不配合者；3）患兒存在其他自身免疫性疾病和遺傳性家族史。

1.3 實驗方法收集患兒入院當天的年齡、性別；初診時外周血的白細胞數、幼稚細胞絕對計數及生化指標，所有操作均由我院檢驗科常規完成；骨髓的原始和幼稚淋巴細胞比例、細胞FAB形學分類測定；流式細胞儀測定骨髓白血病細胞的免疫表型（流式細胞儀型號：BDFACSCantoII，產地：美國）。

1.3.1 標本采集和骨髓細胞分離于初診未化療前采集骨髓標本，按體積2：1將骨髓標本沿管壁加入淋巴細胞分離液，2 000 r/min離心15 min，吸取中間單個核細胞層，加RPMIL 1640或pH 7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗，2 000 r/min離心5 min，取細胞沉淀物，計數細胞調整至1.0×107/ml。

1.3.2 RNA抽提1×107個單核細胞以1 ml的TRlzol試劑打勻，加0.2 ml氯仿，顛倒混勻，用力振蕩15 s，室溫放置2～3 min，4℃12 000 r/min 30 min，吸取無色透明上清液約0.5 ml，加異丙醇0.5 ml，室溫放置5～10 min，4℃12 000 r/min 15 min，棄上清，倒放在濾紙上吸干水分，用70%，100%酒精各清洗RNA沉淀一次，4℃12 000 r/min，棄上清，空氣干燥RNA，加適量DEPC水溶解RNA。用紫外分光光度計測定A260值。

1.3.3 逆轉錄(RT)反應樣品RNA20 μg，加6'隨機引物1 μl，DEPC水補足至20 μl，70℃變性5 min，4℃保存。再在每管中加入5×RT buffer 8.0 μl，0.1 mol/L DTT 4 μl，10 mmol/L dNTPs 2.0 μl，100 U/μl RNAsin 1.0 μl，200 U/μ1M-MLV 1.0 μl，DEPC水4.0 μl，逆轉錄體系總量為40 μl。37℃反應60 min，95℃滅活5 min，4℃保存。嚴格按照試劑盒要求操作，采用巢式PCR反應檢測TEL-AML1融合基因，并根據其是否表達分為TEL/AML1+組與TEL/AML1-組。

1.4 研究方法將融合基因TEL/AML1表達陽性的患兒納入TEL/AML1+組，未檢測到其他異常融合基因的患兒納入TEL/AML1-組，比較兩組患兒細胞抗原、年齡、白細胞計數、誘導化療緩解、病死率及中樞侵犯等情況。

1.5 統計學方法采用SPSS13.0軟件包進行統計學處理，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1200 例患兒融合基因陽性病例的免疫分型分布TEL/AML1+表達均為B細胞系，共計44例，占22.0%，E2A/PPBX1表達的患兒14例，占7.0%；BCR/ABL表達患兒2例，占1.0%；AF4/Mll表達5例，占2.5%。按照TEL-AML1表達進行分組，TEL-AML+組44例，135例未檢測到其他異常融合基因的患兒納入TEL-AML-組，失訪5例，見表1。

2.2 TEL-AML+組與TEL-AML-組患兒不同細胞表面抗原的表達經比較發現，TEL-AML+組患兒CD13與CD20的表達與TEL-AML-組患兒存在顯著性差異（P＜0.05），具有統計學意義，其他抗原表達未見與陰性組有顯著差異，見表2。

2.3 TEL-AML1基因與患兒臨床特征及療效的關系TEL-AML1+組患兒與TEL-AML1-組患兒比較，白細胞計數低于20×109/L，短期治療達CR比例更高，而死亡率及中樞神經侵犯比例更低，提示TEL-AML1+組患兒危險程度明顯低于TEL-AML1-組，見表3。

表1 200例患兒融合基因陽性病例的免疫分型分布[例（%）]

表2 TEL-AML+與TEL-AML-患兒不同細胞表面抗原的表達[例（%）]

表3 TEL-AML+與TEL-AML-患兒臨床特征及療效的比較[例（%）]

3 討論

本次研究中列入200例急性淋巴細胞白血病的患兒，共有65例出現染色體易位融合基因，最為常見的為TEL-AML1，占22%，另外還有EA/PBX1、BCR-ABL和MLL-AF4等，與其他報道相符[3-4]。有學者[5]研究發現，急性淋巴細胞白血病(ALL)約占兒童白血病的75%，以12p13上的TEL(Translocation ets leukemia)基因與21q22上的AML1(Acutemyeloid leukemia 1)基因融合更為多見，占B系急性淋巴細胞白血病患兒的16%～36%。

TEL基因屬于ETS轉錄因子家族，其功能為調節細胞分化和增殖相關的靶基因轉錄水平。TEL經二聚體化和SUMO-1修飾后才有正常的功能，TEL基因在各組織細胞中均廣泛表達，但血液系統的細胞中相對高表達，對骨髓中所有細胞譜系的建立起關鍵作用，特別是造血祖細胞歸巢到骨髓的過程中具有重要作用[6-7]。AML1是核心結合因子CBF(Core binding factor)的亞基，與CBFβ二聚體化后在造血過程中起重要的作用[8]，AML1核心結合因子啟動HOX基因并調節下游的轉錄過程，在調節造血細胞的發育中具有重要意義。AML1基因對骨髓造血細胞系的正常發育是必需的，因此AML1的功能受損可影響骨髓的細胞增殖和分化過程[9]。

通過比較分析，我們發現兒童B系ALL以TEL-AML1+融合更為多見，其免疫表型也具有一定的特點：以前B系和普通B淋巴細胞表型為主，早前B和成熟B淋巴細胞的表型極為少見；另外，細胞表面抗原的比較發現，TEL-AML1+組患兒的CD13表達更高，而CD20表達率更低。有學者認為在高危、復發和誘導緩解后的兒童ALL患者中可檢測出微小殘留病灶中CD20抗原表達上調[10]。左英熹等[11]研究發現，TEL-AML1+患兒伴有髓系CD13、CD33抗原高水平表達及CD20的低水平表達。

我們同時還發現，TEL-AML1+的ALL患兒CD10、HLA-DR的高水平表達。CD10是一種Ⅱ型結構膜蛋白，一般在早期的淋巴前體細胞、生發中心被激活的B細胞中表達；HLA-DR分子見于B淋巴細胞、單核-巨噬細胞等，參與免疫活性細胞間的互相作用，有學者認為這兩個抗原可作為TEL-AML1+的ALL患兒微小殘留病(MRD)的檢測指標。

本次研究發現TEL-AML1+組的ALL患兒預后較好，其死亡率及中樞神經系統侵犯均顯著低于TEL-AML1-組患兒。我們認為，TEL-AML1+組患兒外周血白細胞總數及幼稚細胞絕對計數顯著低于TEL-AML1-組ALL患兒，表明TEL-AML1+組患兒體內腫瘤負荷較低，短期內達CR的比例更高。有學者認為TEL-AML1+的ALL患兒對左旋門冬酰胺酶的敏感度更高，對化療敏感、治療短期內即可獲得完全緩解，而且CR時間更長，短期內復發率低，平均復發時間為獲得CR的2年后，而且復發后仍然對化療藥物敏感，可獲得二次緩解[12]。因此，我們認為TEL-AML1基因融合可作為ALL患兒預后判斷的指標之一。

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Expression of TEL-AML1 fusion gene in children with acute lymphoblastic leukemia and its effect on the clinical efficacy and prognosis.

XIE Shu-pei,DUAN Zhao,CHEN Yuan-yuan,LIANG Chang-da.Department ofHematology,Children's Hospital of Jiangxi Province,Nanchang 330006,Jiangxi,CHINA

ObjectiveTo study the expression of TEL-AML1 fusion gene in children with acute lymphoblastic leukemia(ALL),and its effect on the clinical efficacy and prognosis.MethodsReverse transcription and polymerase chain reaction was applied to detect the expression of four fusion genes(TEL/AML1,E2A/PBX1,BCR/ABL and AF4/MLL)in 200 children with ALL.Based on the expression of TEL/AML1,the patients were divided into two groups：TEL/AML1+group and TEL/AML1-group.Comparison was made in terms of the immunological characteristics,age,white cell count,prognosis between two groups.ResultsOf the 200 children,44(22.0%)were TEL-AML1 positive,14(7.0%)were E2A/PBX1 positive,5(2.5%)were AF4/MLL positive,and 2(1.0%)were m-BCR/ABL positive.In TEL-AML1+group,the positive rate of CD13was significantly higher than that in TEL-AML1-group(P＜0.05),while the positive rate of CD20was significantly lower(P＜0.05).Besides,TEL/AML1+ group has better prognosis in terms of high complete remission rate and low white cell count.ConclusionTEL/ AML1 fusion gene is the most common molecular aberration in childhood ALL,especially in B cell lymphoblastic leukemia,and positive patients show better prognosis.

TEL-AML1 fusion gene;Children;Acute lymphoblastic leukemia

R725.5

A

1003—6350（2012）22—004—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.22.002

2012-08-30)

江西省衛生廳普通科技計劃（編號：20123143）

謝淑佩（1978—），女，江西省南昌市人，主治醫師，本科。