2006-2010年我院臨床分離大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥性監測

吳彪，符娟，符健，蔡篤運，黃春新，林鋒，賈杰

（海南省人民醫院，海南?？?70311）

2006-2010年我院臨床分離大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥性監測

吳彪，符娟，符健，蔡篤運，黃春新，林鋒，賈杰

（海南省人民醫院，海南海口570311）

目的分析2006-2010年我院臨床分離的大腸埃希菌1 722株和肺炎克雷伯菌872株對常用抗菌藥物耐藥性的變遷情況。方法采用VITEK-32全自動微生物鑒定及藥敏分析系統對大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌鑒定并行藥敏試驗，應用WHONET5.4軟件對藥敏結果進行統計。結果2006-2010年從臨床送檢的標本中共分離出大腸埃希菌1 722株和肺炎克雷伯菌872株，兩種細菌對常用的多種抗菌藥物，特別是3代頭孢菌素產生相當程度的耐藥性，僅對美洛培南敏感性較好。結論臨床應根據藥敏試驗結果，合理選用抗菌藥物，防止醫院感染。

大腸埃希菌；肺炎克雷伯菌；耐藥性；監測；超廣譜β-內酰氨酶

大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌是臨床常見菌，又是重要的院內獲得性感染的重要病原菌，其耐藥性的變遷和現狀倍受人們的關注。為了解我院產ESBLs菌的發生率和耐藥性特點，以控制產ESBLs菌的傳播和流行，我們對2006-2010年從臨床各標本中分離出的大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌進行了ESBLs檢測，并分析其耐藥性變遷狀態，現報道如下：

1 材料與方法

1.1 菌株來源2006-2010年我院臨床各類臨床標本（包括痰、尿、血、膽汁、膿液、腹水、糞便等）分離出大腸埃希菌1 722株和肺炎克雷伯菌872株（剔除同一患者相同部位的重復菌株）。標準菌株為大腸埃希菌ATCC 25922、ATCC 35218(ESBLs產生株)和肺炎克雷伯菌ATCC 700603(ESBLs產生株)。

1.2 藥物敏感試驗遵循2001年NCCLS標準[1]，采用VITEK-32型全自動微生物分析系統進行細菌鑒定、藥敏分析及ESBLs檢測，VITEK-32型全自動微生物分析儀及藥敏試劑均為法國BioMerieux公司產品。ESBLs菌株的確證采用雙紙片法，抗菌藥物紙片為頭孢噻肟/克拉維酸(30/10 μg)和頭孢他啶/克拉維酸(30/10 μg)。

1.3 統計學方法用WHONET5.4軟件對患者首次分離的大腸埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌進行耐藥性分析及統計。

2 結果

2.1 2006-2010年大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的分離率2006-2010年我院大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌總的分離率相對穩定，大腸埃希菌的分離率波動于10%～12%之間，肺炎克雷伯菌的分離率波動于3%～7%之間，在2009年、2010年后者的分離率有上升趨勢，見表1。

2.2 2006-2010年大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs產酶率2006-2010年我院分離的1 722株大腸埃希菌和872株肺炎克雷伯菌中，產ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的檢出率分別為44.4%和29.0%，近3年來（2008年、2009年、2010年）ESBLs的檢出率較2006年、2007年有下降趨勢，見表2。

表1 2006-2010年大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌分離率

表2 2006-2010年大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs產酶率

2.3 大腸埃希菌2006-2010年的耐藥性變遷大腸埃希氏菌2006-2010年對3代頭孢菌素及左氧氟沙星等藥物的耐藥率大多都在50%以上，已失去臨床應用價值，3代頭孢菌素/β內酰胺酶抑制劑的復合劑及阿米卡星耐藥性也逐年增加，但穩定于20%以下，臨床尚可應用，唯碳青霉烯類美洛培南敏感性仍高，見表3。

表3 大腸埃希菌對18種抗菌藥物的耐藥率

2.4 肺炎克雷伯菌2006-2010年的耐藥性變遷肺炎克雷伯菌2006-2010年對3代頭孢菌素及左氧氟沙星的耐藥率均較高，已失去臨床應用價值，對3代頭孢菌素/β內酰胺酶抑制劑復合制劑及阿米卡星有一定的敏感性，對碳青霉烯類美洛培南尚屬敏感，見表4。

表4 肺炎克雷伯菌對18種抗菌藥物的耐藥率

3 討論

大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌是引起社區和院內感染的重要細菌，本研究顯示大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的分離率在5年內保持相對穩定，分離率分別為11.1%和5.6%。

本調查表明大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對青霉素類、頭孢菌素類及氨曲南等藥物耐藥率較高，可能與細菌產生ESBLs有關。ESBLs是絲氨酸蛋白酶的衍生物，存在于細菌中，是細菌染色體外的蛋白質，主要由大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌屬產生[2]。ESBLs不僅能分解頭孢菌素類和青霉素類抗生素，而且能分解單環β-內酰胺類抗生素，使這些抗菌藥物失去抗菌活性，但它能被β-內酰胺酶抑制劑所抑制，故應用3代頭孢菌素/β-內酰胺酶抑制劑尚有一定療效。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥質粒不僅攜帶ESBLs耐藥基因，同時具有氨基糖苷類、氟喹諾酮類藥物的耐藥基因，不但可導致ESBLs在細菌間的傳播，還可導致氨基糖苷類、氟喹諾酮類和磺胺類藥物在細菌間的交叉耐藥[3-4]，產生多重耐藥菌株，成為醫院感染的重要病原菌，給感染的臨床治療帶來更大困難。

我院近5年來在分離出大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中，產ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌分別為44.4%和29.0%，與陳梅莉等[5]的報道（47.6%和20.1%）相近，明顯高于姚興偉等[6]的檢測結果（15.6%和8.5%），低于Mohnarin 2009年度報告：中南地區細菌耐藥監測[7]的報道（60.9%和46.8%）。出現地區差異的主要原因可能與各地抗菌藥物使用的品種數量及用藥習慣不同有關。ESBLs菌株的產生和流行與臨床上大量使用廣譜β-內酰胺抗菌藥物特別是3、4代頭孢菌素密切相關，同時住院患者間的交叉感染、長期住院也是獲得ESBLs感染的危險因素。

既往臨床上治療腸桿菌科細菌感染多用氟喹諾酮類藥物，近年來其耐藥率有增高趨勢。本調查表明我院大腸埃希菌對左氧氟沙星的耐藥率已維持在40%～60%，肺炎克雷伯菌對左氧氟沙星的耐藥率自2006年的19.1%增至2010年的34.0%，耐藥率上升尤為明顯。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對左氧氟沙星耐藥性嚴重，歸結于20多年來，廣泛使用該抗菌藥物的結果。其次，大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中存在氟喹諾酮類耐藥基因的質粒傳播，導致耐藥菌株的增多?，F在氟喹諾酮類對治療產ESBLs的腸桿菌科細菌感染已失去價值。

氨基糖苷類抗菌藥物屬高效、廣譜抗菌藥物，被認為適用于治療大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌感染。本調查中，大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對慶大霉素高度耐藥；而對阿米卡星的耐藥率較低。形成這種敏感性差異的主要原因可能是這些菌株攜帶了不同的氨基糖苷類修飾酶基因，其中，阿米卡星經過結構改造、對修飾酶具有一定穩定性有關，因此其耐藥率遠低于慶大霉素[8]。

目前碳青霉烯類抗菌藥物是治療產ESBLs菌感染的首選藥物，目前已成為臨床上治療產ESBLs菌感染的最后一道防線，我院大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對美羅培南仍保持著較高的敏感性，但耐藥率分別由2006年的1.3%和0.0%上升至2010年的3.2%和0.6%，這可能由于碳青霉烯類抗菌藥物的廣泛應用，造成其耐藥菌株逐漸產生，其主要的耐藥機制是產生了碳青霉烯酶；而臨床常規藥敏試驗方法，無法將其檢測出來[9]。臨床應引起足夠重視，并有待于進一步研究。

綜上所述，臨床不適當地使用第3代頭孢菌素和氟喹諾酮類藥物是導致大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌高耐藥率的主要原因。因此，臨床醫師應嚴格掌握抗菌藥物的適應證，盡可能依據細菌培養和藥敏試驗結果選用藥物。同時，應該積極采取有效防范措施，避免或減少醫院感染的發生，對已經發生的醫院感染，做好細菌耐藥性的監測，合理用藥，以減少ESBLs陽性菌和多重耐藥菌株的產生和播散。

[1]National Committee for Clinical Laboratory standards.Performance standards for antimicrobial susceptibility tests[J].NCCLS,2001,21 (1)：40-45.

[2]張玲,黃留玉.革蘭陰性桿菌產超廣譜β-內酰胺酶研究進展[J].中華醫院感染學雜志,2008,18(6)：897-900.

[3]王忠永,李響新,呂美艷,等.革蘭陰性桿菌超廣譜β-內酰胺酶基因分型及耐藥相關性研究[J].中華醫院感染學雜志,2010,20 (16)：2361-2364.

[4]Jacoby GA,Han P.Detection of extended-spectrum beta-lactamases in clinical isolates ofKlebsiella pneumoniaeandEscherichia coli[J]. J Cli Microbiol,1996,34(4)：908-911.

[5]陳梅莉,馬友正.臨床分離主要革蘭陰性桿菌分布及耐藥性監測[J].中華醫院感染學雜志,2011,21(5)：986-987.

[6]姚興偉,李慧萍,楊曦明.153株大腸埃希菌和84株肺炎克雷伯菌耐藥性分析[J].臨床檢驗雜志,2010,28(4)：318.

[7]李麗,田磊,張蓓,等.Mohnarin 2009年度報告：中南地區細菌耐藥監測[J].中國臨床藥理學雜志,2011,27(7)：533-539.

[8]張淑清.產ESBLs大腸埃希菌對氨基糖苷類藥物耐藥基因研究[J].中國實驗診斷學,2012,2(16)：299-301.

[9]孫景勇,倪語星.Mohnarin 2008年度報告：華東地區細菌耐藥性監測[J].中國抗生素雜志,2010,35(7)：503-507.

Drug resistance of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae isolated in our hospital from 2006 to 2010.

WU Biao,FU Juan,FU Jian,CAI Du-yun,HUANG Chun-xin,LIN Feng,JIA Jie.People's Hospital of Hainan Province, Haikou 570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo monitor the drug resistance of 1 722 stains ofEscherichia coli(E.coli)and 872 stains ofKlebsiella pneumoniaeisolated in our hospital from 2006 to 2010.MethodsStrains ofE.coliandKlebsiella pneumoniaewere identified by VITEK-32 Automatic Microbial Identification and analyzed by drug-susceptibility testing.Then the results were analyzed using WHONET5.4 software.ResultsFrom 2006 to 2010,the 1 722 stains ofE.coliand 872 stains ofKlebsiella pneumoniaeisolated were highly resistant to most commonly used antimicrobial drugs,especially the third generation of cephalosporin drugs.They were found to be highly susceptible to meropenem.ConclusionThe drug resistance ofE.coliandKlebsiella pneumoniaefrom hospital infection is very serious.We should strengthen the monitoring of the antibiotic resistance of pathogens.The antimicrobial agents should be used reasonably based on the results of susceptibility tests.

Escherichia coli;Klebsiella pneumoniae;Drug resistance;Monitoring;Extended-spectrum beta-lactamase

R378

A

1003—6350（2012）18—012—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.18.005

2011-04-11）

海南省自然科學基金項目(編號：310123)

吳彪（1976—），海南省海口市人，主治醫師，碩士，研究方向：感染性疾病。E-mail:wubiaohk@qq.com