超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的檢測及耐藥性分析

莫志航，寧炎

（增城市新塘醫(yī)院檢驗科，廣東增城511340）

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的檢測及耐藥性分析

莫志航，寧炎

（增城市新塘醫(yī)院檢驗科，廣東增城511340）

目的了解臨床產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌（E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)的發(fā)生率、耐藥性，以便于對ESBLs進行監(jiān)測和治療。方法對102株E.coli和78株K.pneumoniae采用美國臨床實驗室標準委員會（NCCLS)規(guī)定的ESBLs表型篩選和確證試驗確定ESBLs的發(fā)生率，并檢測產(chǎn)ESBLs的E.coli和K.pneumoniae的耐藥性。結(jié)果13.7%(14/102)的大腸埃希菌和26.9%(21/78)的肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs；產(chǎn)ESBLs菌株對亞胺培南耐藥率為0%，除對阿米卡星、頭孢西丁、替卡西林/克拉維酸聯(lián)合酶抑制劑耐藥率較低外，對三代頭孢菌素、磺胺類和喹諾酮類藥物均出現(xiàn)較高耐藥。結(jié)論對產(chǎn)ESBLs菌株引起的感染，亞胺培南為首選。

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；大腸埃希菌；肺炎克雷伯菌；耐藥性

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)主要由大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)生，能水解青霉素類、頭孢菌素類和單酰胺類抗生素，從而使之失效[1]。產(chǎn)ESBLs菌株有多重耐藥的特點，成為臨床抗感染治療的棘手問題。隨著廣譜抗生素的廣泛使用，產(chǎn)ESBLs細菌日益增多，耐藥問題成為人們關(guān)注的焦點。筆者對我院180株大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌行ESBLs檢出率及其耐藥性分析，現(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 菌株2010年4月至2011年4月從門診和住院患者的痰液、尿液、血液、膽汁和分泌物中分離的臨床菌株，鑒定采用法國生物梅里埃微生物檢驗儀ATB-express，其中大腸埃希菌102株，肺炎克雷伯菌78株。質(zhì)控菌株為標準菌株大腸埃希菌ATCC25922，肺炎克雷伯菌ATCC700603。

1.2 儀器及試劑法國生物梅里埃微生物檢驗儀ATB-express和配套的細菌鑒定試條(ATB G-5)，試條有20種抗生素，分別為：阿莫西林(AMO)、阿莫西林/克拉維酸(AMC)、哌拉西林(PIC)、哌拉西林/三唑巴坦(TZP)、替卡西林(TIC)、替卡西林/克拉維酸(TCC)、頭孢噻吩(CFT)、頭孢西丁(CXT)、頭孢噻肟(CTX)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢吡肟(FEP)、頭孢呋辛(CXM)、美諾培南(MERO)、亞胺培南(IMI)、復方新諾明(TSU)、妥布霉素(TOB)、阿米卡星(AKN)、慶大霉素(GEN)、奈替米星(NET)、環(huán)丙沙星(CIP)。ESBLs檢測紙片使用北京天壇生物制品公司產(chǎn)品。

1.3 細菌分離鑒定常規(guī)分離標本，使用梅里埃微生物檢驗儀ATB-express自動細菌鑒定和藥敏系統(tǒng)鑒定菌種并行藥敏分析。

1.4 ESBLs檢測

1.4.1 初篩試驗按NCCLS初篩標準，紙片法藥敏試驗只要符合下列任何一項指標：頭孢他啶≤22 mm，頭孢曲松≤25 mm，頭孢噻肟≤27 mm，氨曲南≤27 mm，即為產(chǎn)ESBLs可疑菌株[2]。

1.4.2 確證試驗按NCCLS文件標準，用頭孢他啶和頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟/克拉維酸兩組抗生素紙片做紙片擴散法藥敏試驗，任一組含克拉維酸的紙片和不含克拉維酸的紙片間抑菌環(huán)直徑≥5 mm可確認為產(chǎn)ESBLs菌株[2]。

2 結(jié)果

2.1 一般資料分離菌株共180株，其中大腸埃希菌102株，肺炎克雷伯菌78株；產(chǎn)ESBLs菌株共35株，其中產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌14株，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌21株。

2.2 產(chǎn)ESBLs菌株檢出率產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌檢出率分別為13.7%、26.9%，總檢出率為19.4%，見表1。

表1 180株細菌產(chǎn)ESBLs檢出率(株)

2.3 產(chǎn)ESBLs細菌耐藥率產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌的耐藥情況。產(chǎn)酶菌株對青霉素類、第三代頭孢菌素類均表現(xiàn)為高度耐藥，但對碳青霉烯類十分敏感，說明亞胺培南是治療產(chǎn)ESBLs菌株感染的較佳藥物，見表2。

表2 35株產(chǎn)ESBLs細菌耐藥率（%）

3 討論

第三代頭孢菌素廣泛應用于臨床是產(chǎn)ESBLs細菌出現(xiàn)的重要原因之一。由于常規(guī)體外藥敏試驗可能不能完全檢測出ESBLs，因此，及時準確地測定ESBLs對臨床具有重要意義。

從表1可以看出，我院分離的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌檢出率分別為13.7%、26.9%，總檢出率為19.4%，這與劉原等[3]報道較接近，但是比段建春等[4]的報道低，其原因可能與統(tǒng)計的范圍大小、地區(qū)用藥差異和病種不同有關(guān)。本實驗采用頭孢他啶和頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟/克拉維酸同時檢測ESBLs，可減少產(chǎn)ESBLs菌株的漏檢率[5]。

產(chǎn)ESBLs細菌在攜帶有ESBLs的質(zhì)粒同時可攜帶有對氨基糖苷類、喹諾酮類和磺胺類等抗菌素的耐藥基因，對氨基糖苷類、喹諾酮類和磺胺類等臨床常見抗菌素表現(xiàn)出多重耐藥性。本次研究發(fā)現(xiàn)我院產(chǎn)ESBLs菌株對頭孢噻肟的耐藥率明顯高于頭孢他啶，表明國內(nèi)產(chǎn)ESBLs菌株耐藥表型以水解頭孢噻肟為主，與余丹陽等[6]報道相同。

產(chǎn)酶菌株對氨基糖苷類藥物耐藥有一定差異，如大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌對慶大霉素的耐藥率分別為85.7%、71.4%，而對阿米卡星的耐藥率分別為21.4%、23.8%。形成這種敏感性差異的主要原因可能是這些菌株攜帶了不同的氨基糖苷類修飾酶基因[7]，以致藥物修飾酶基因作用底物不同，而產(chǎn)生了不同的耐藥表型[8]。

由于許多產(chǎn)ESBLs菌株在體外不表達酶的活性，體外藥敏試驗可顯示出對三代頭孢菌素、氨曲南等抗生素部分敏感，按美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)規(guī)定，無論體外對三代頭孢菌素、氨曲南的藥敏結(jié)果如何，均應報告對三代頭孢菌素、氨曲南等單酰胺類耐藥。

綜上所述，由于產(chǎn)ESBLs菌株的多重耐藥性、耐藥機制的復雜性以及治療的困難性，因此要積極采取應對措施，合理使用抗生素，及時準確地檢出耐藥菌株，延緩細菌的耐藥性產(chǎn)生，控制耐藥菌株的播散和流行。

[1]孫長貴,陳漢美.評價三種篩選方法檢測超廣譜β-內(nèi)酰胺酶及其臨床應用[J].中華醫(yī)學檢驗雜志,1999,22(4)：228-231.

[2]National committee for clinical Laboratory Standards.Performance standards for antimicrobial testing ninth information supplement M100-S9[S].Wayne,PA：National Committee for Clinical Laboratory Standards,2005.

[3]劉原,徐靈彬,耿燕,等.腸桿菌科細菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的流行病學特征研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志,2007,17(8)：910-913.

[4]段建春,呂曉菊,宋志勇,等.210株腸桿菌科細菌產(chǎn)ESBLs檢測及耐藥性調(diào)查[J].中國抗生素雜志,2005,30(7)：404-406.

[5]NCCLS.National Committee for Clinical Laboratory Standards for antimicrobial susceptibility testing Ninth informational supplement [J].M100-S9NCCLS,1999,19(1)：14-17.

[6]余丹陽,劉又寧.AMPC酶和ESBLs酶在陰溝腸桿菌中的表達及其對耐藥性的影響[J].中華醫(yī)學雜志,2002,82(19)：1355-1358.

[7]孫秋林,葉冬青,李旭.大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌耐藥性研究[J].中國抗感染化療雜志,2004,4(1)：33-35.

[8]馮旰珠,趙水娣,沈立.下呼吸道細菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶耐藥性分析[J].藥學與臨床研究,2007,15(1)：54-56.

Clinical detection and drug resistance analysis of extended spectrum beta-lactamases.

MO Zhi-hang,NING Yan. Department of Clinical Laboratory,Xintang Hospital of Zengcheng City,Zengcheng 511340,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the prevalence of strains producing extended spectrum beta-lactamases (ESBLs)amongEscherichia coilandKlebsiella pneumoniae,and to determine the drug resistance of the strans for better control and treatment of ESBLs.MethodsOne hundred and two strains ofE.coliand 78 strains ofK.pneumoniaewere investigated for production of ESBLs by phenotypic screening and confirmatory test provided by the NCCLS. The drug resistance of ESBLs-producing strains was also investigated.Results13.7%(14/102)ofE.coliand 26.9% (21/78)ofK.pneumoniaeinvestigated were found to produce ESBLs.All ESBLs-producing strains were found to be susceptible to imipenem,relatively lowly resistant to of amikacin,cefoxitin,cefoperazone/β-lactamase inhibitor combinations,and highly resistant to third generation cephalosporins,sulfonamides and quinolones.ConclusionImipenem is the premium antibiotics for the treatment.of infection caused by ESBLs-producing strains.

Extended spectrum beta-lactamases;Escherichia coli;Klebsiella pneumoniae;Drug resistance

R446

A

1003—6350（2012）18—078—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.18.037

2012-03-26)

莫志航（1980—），男，廣東省陽春市人，檢驗師，學士。