監測血漿EBV-DNA含量在鼻咽癌診療中的意義

柳文菊，杜昆

（長江大學附屬第一人民醫院檢驗科，湖北荊州434000）

監測血漿EBV-DNA含量在鼻咽癌診療中的意義

柳文菊，杜昆

（長江大學附屬第一人民醫院檢驗科，湖北荊州434000）

目的探討鼻咽癌患者放化療過程中血漿EBV-DNA含量在臨床診療中的意義。方法采用熒光定量PCR法檢測50例NPC患者在不同的診療階段血漿EBV-DNA的含量，同時設50例健康體檢者為陰性對照組。結果50例NPC組中EBV-DNA檢測陽性率為92.0%（46/50），健康對照組陽性率為8.0%（4/50）；46例EBV-DNA陽性的患者中，26例患者從第一周治療開始，DNA水平就開始明顯下降，至治療結束前已檢測不到DNA的復制；14例患者開始幾周DNA水平變化并不明顯，至治療結束前，基本檢測不到DNA的復制；6例患者在治療過程中均可檢測到較高水平的EBV-DNA。結論采用熒光定量PCR方法檢測NPC患者血漿中游離的EBV-DNA是一種敏感可靠的方法，對于NPC的早期診斷及預后具有非常重要的臨床意義。

熒光定量PCR；鼻咽癌；EBV-DNA；血漿

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是一種普遍存在的皰疹病毒群，感染后能累及機體全身各個器官系統[1-2]，其中以侵犯造血系統和淋巴系統最為常見，可引起各種惡性腫瘤，從而嚴重危害人類生命健康。鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我國南方常見的一種惡性腫瘤，其具體的發病機制仍然不清楚，但目前認為NPC的發生與EBV感染有關[3-4]。自Mutirangura等[5]報道NPC患者血漿中可檢測到EBV-DNA以來，許多學者都進行了這方面的研究，并證實NPC患者血漿EBV-DNA量的含量能夠反映體內腫瘤負荷情況[6-7]。我們采用TaqMan探針熒光定量PCR技術對50例已確診為鼻咽癌的患者血漿EBV-DNA進行定量檢測，探討鼻咽癌患者放化療過程中血漿EBV-DNA含量在臨床診療中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料2009年1月至2011年2月間入住我院腫瘤分院經初診確診為鼻咽癌的患者50例。年齡27～65歲，平均47.6歲。其中男性38例，女性12例。所有的患者均接受同期放化療。放射治療按照臨床檢查和CT/MRI示腫瘤范圍設野，并按臨床常規進行。化療與放療同時進行，采用草酸鉑70 mg/m2每周一次連續6周。放化療期間，每周用間接鼻咽鏡檢查鼻咽腫物1～2次，同時密切注意頸淋巴結腫脹的消退情況。治療結束后2～3個月復查鼻咽CT或MRI、胸片、腹部B超等以評價療效。療效的評價依據WHO實體瘤評價標準進行。另采集50例健康體檢者血樣（由體檢中心負責抽取）作為陰性對照組。兩組之間性別、年齡差異無統計學意義。

1.2 血漿標本的采取每位受檢者每次抽取血外周血3 ml，加入到EDTA抗凝管中，2 000 rpm離心5 min，吸取200 ul血漿于-20℃凍存備用。

1.3 EBV-DNA的提取及擴增將凍存的血漿復融后放置至室溫，嚴格按照中山大學達安基因股份有限公司提供的EBV熒光定量PCR檢測試劑盒說明書進行DNA的提取。吸取抽提的DNA入PCR的反應管中，在德國產Agilent Technologies Stratagene Mx3000P全自動擴增儀上擴增。擴增程序如下：93℃3 min，再93℃45 s、55℃2 min，共40個循環。反應結束后結果由計算機進行數據處理，以IU/ml報告，小于檢測下限5.0×102IU/ml結果判定為陰性。

1.4 統計學處理所有實驗數據應用SPSS13.0統計軟件進行統計分析。符合正態分布的計量資料采用方差分析，非正態分布的計量資料采用秩和檢驗。兩組間EBV-DNA陽性率比較采用卡方檢驗，P＜0.01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 鼻咽癌組和健康對照組血漿EBV-DNA陽性檢出率結果如表1所示，50例鼻咽癌患者中共檢出46例EBV-DNA陽性患者，而50例健康對照組中檢出4例EBV-DNA陽性，兩組統計學比較差異有統計學意義（P＜0.01）。

2.2 放化療后不同時期血漿EBV-DNA水平46例EBV-DNA陽性鼻咽癌患者在治療后不同時期檢測血漿EBV-DNA含量，發現40例在治療后EBV-DNA含量逐漸減少，至第6周完全檢測不到EBV-DNA；另外6例在治療過程中均能檢測到EBV-DNA。

表2 46例EBV-DNA陽性患者治療期間血漿EBV-DNA水平(IU/ml)

2.3 血漿EBV-DNA動態變化與療效的關系治療前，92%（46/50）的患者血漿中可檢測到較高水平的EBV-DNA，8%（4/50）患者未檢測出EBV-DNA。46例EBV-DNA陽性的患者中，26例患者從第一周治療開始，DNA水平就開始呈明顯下降，到第4周至第5周，就基本已經檢測不到DNA的復制。14例患者開始幾周DNA水平變化并不明顯，但到治療結束前1～2周，也基本檢測不到DNA的復制。對這40例患者在治療結束后進行一系列相關檢查，確定為完全緩解，而另外6例在治療過程中均能檢測到EBV-DNA，在治療結束后進行相關檢查，發現這6例患者均有腫瘤殘留，其中2例為顱內殘留，4例示淋巴結殘留。

3 討論

長期以來，檢測EB病毒相關抗原抗體如殼抗原IgA抗體(VCA-IgA)、早期抗原IgA抗體(EA-IgA)等是篩查、輔助診斷和監測鼻咽癌病情變化的主要方法[8]。有研究表明VCA-IgA滴度水平在放療中不隨腫瘤的消退而下降，提示抗體檢測不能精確反映體內腫瘤負荷。由于VCA-IgA半衰期較長，即使體內EB病毒被清除，在較長一段時間內血液中仍可檢出該抗體，故VCA-IgA不能準確反映鼻咽癌病情變化的情況[9]。

由于鼻咽癌患者血漿或血清中可檢測出EBV-DNA，本研究通過用熒光定量PCR技術檢測50例鼻咽癌患者血漿中EBV-DNA水平，46例（92%）陽性[中位濃度為（5.23±5）IU/ml]；而在50例對照組中，僅4例（8%）陽性（中位濃度為0 IU/ml），兩者比較差異有統計學意義（P＜0.01）。這一結果與Lo等[10]的研究結果一致，表明檢測血漿EBV-DNA是一種敏感有效的初治篩選NPC的方法。

目前，監測NPC患者腫瘤轉移、復發的方法主要依靠常規體檢、間接鼻咽纖維鏡和影像學檢查，但這些方法的敏感性和特異性較差、檢測過程繁瑣、費用昂貴、發現不及時以及不能明確區分腫瘤病灶為原發病灶還是轉移病灶等問題。而PCR定量檢測NPC患者在治療不同階段的血漿EBV-DNA含量，能夠給臨床提供快速和準確的療效觀察。本研究中，46例EBV-DNA陽性患者中，40例患者經治療后，血漿中檢測不到EBV-DNA，同時其癥狀也得到緩解，腫瘤消退；而另外6例患者，在治療過程中均能檢測到EBV-DNA，其癥狀緩解不明顯，有腫瘤殘留。這表明NPC患者治療后EBV-DNA的含量能很好的反映患者病情變化，這對NPC患者的療效及預后判斷具有非常重要的臨床意義。

綜上所述，采用熒光定量PCR方法檢測血漿中游離的EBV-DNA，對于NPC的早期診斷、療效及預后判斷具有重要的臨床意義，尤其是對高危地區和高危人群的鼻咽癌篩查和鼻咽癌患者的預后有重要的實用價值。

[1]OkanM.Overview and problematic standpoints of severe chronic activeepslein-barr virlis infection syndrome[J].OncolHematol, 2002,44(4)：273-282.

[2]易世紅,蘇盈盈,張國梁.EB病毒檢測及EB病毒感染相關疾病的分析[J].中國衛生檢驗雜志,2009,19(1)：26-27.

[3]Feng P,Chan SH,Soo MY,et al.Antibody response to Epstein-Barr virus Rta protein in patients with nasopharyngeal carcinoma：a new serologic parameter for diagnosis[J].Cancer,2001,92：1872-1880.

[4]林欽塘.EB病毒感染與鼻咽癌發病機制的關系[J].癌癥,2009,8：791-804.

[5]Mutirangura A,Pornthanakasem W,Theamboonlers A,et al.Epstein-Barr viralDNA in serum of patientswith naso-pharyngeal carcinoma[J].Clin Cancer Res,1998,4(3)：665.

[6]李多杰,彭開桂,江浩.血漿EBV DNA定量分析在監測鼻咽癌患者復發和轉移中的價值[J].實用腫瘤雜志,2008,23(1)：12-15.

[7]葉新芊,李金高,龔曉昌,等.鼻咽癌血漿EB病毒DNA水平與腫瘤負荷的關系[J].實用癌癥雜志,2007,22(2)：147-149.

[8]唐國全,周向陽,陽春茂.EB病毒IgA滴度在鼻咽癌診斷的敏感性和特異性[J].廣西醫學,2008,30(6)：831-832.

[9]羅耀凌,歐國萍,池沛冬,等.聯合檢測EB病毒相關抗體和抗原對診斷鼻咽癌的價值[J].癌癥,2009,28(1)：96-99.

[10]Lo YM,Chan LY,Lo KW,et al.Quantitative analysis of cell-free Epstein-Barr virus DNA in plasma of patients with nasopharyngeal carcinoma[J].Cancer Res,1999,59(6)：1188-1191.

Clinical significance of plasma Epstein-Bar virus DNA concentration in the diagnosis and treatment of nasopharyngeal carcinoma.

LIU Wen-ju,DU Kun.Department of Clinical Laboratory,the First Affiliated Hospital of Yangtze University,Jingzhou 434000,HuBei,CHINA

ObjectiveTo investigate the clinical significance of plasma Epstein-Bar virus DNA (EBV-DNA)concentration in the diagnosis and treatment of nasopharyngeal carcinoma(NPC).MethodsFluorescence quantitative PCR was used to determine the content of EBV-DNA in blood serum in 56 patients with NPC(the study group)and 50 healthy individuals(the control group).ResultsThe positive rate of EBV-DNA was 92%(46/ 50)in the study group and 8%(4/50)in the control group.Among the 46 patients detected positive in the study group, 26 patients were detected with significantly decreased EBV-DNA at the first week of treatment,and with no EBV-DNA at the end of the treatment.Fourteen patients were detected with high levels of EBV-DNA at the initial weeks of treatment,but with no EBV-DNA at the end of the treatment.Six patients were found to maintain a high levels of EBV-DNA throughout the treatment.ConclusionDetermination of EBV-DNA by fluorescence qualitative PCR in blood serum is reliable and sensitive,which has high clinical value in the diagnosis and treatment of NPC.

Fluorescence qualitative PCR;Nasopharyngeal carcinoma;EBV-DNA;Plasma

R739.63

A

1003—6350（2012）18—007—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.18.003

2012-03-19）

柳文菊（1971—），女，湖北省荊州市人，主管技師，學士。