唐山地區食管癌與人乳頭狀瘤病毒感染及p53的相關性

李向利，宋會新，張術波

（1.遷西縣人民醫院胸外科，河北 遷西 064300；2.華北煤炭醫學院附屬醫院，河北 唐山 063000）

唐山地區食管癌與人乳頭狀瘤病毒感染及p53的相關性

李向利1，宋會新1，張術波2

（1.遷西縣人民醫院胸外科，河北 遷西 064300；2.華北煤炭醫學院附屬醫院，河北 唐山 063000）

目的 研究人乳頭狀瘤病毒(HPV)在唐山地區食管癌、癌旁組織和正常食管組織中的感染情況和p53表達的關系。方法采用TCT法檢測45例食管癌組織、相應癌旁組織和正常食管組織中HPV感染情況，免疫組化SP法檢測p53的表達。結果45例食管癌組織、相應癌旁組織和正常食管組織中HPV感染陽性率分別為20.0%、40.0%和6.7%，差異有統計學意義(P＜0.05)，p53蛋白的檢出率分別為97.8%、62.2%和4.4%。HPV和p53陽性表達與年齡、性別、TNM分期和淋巴結轉移均無明顯聯系。HPV感染率與p53陽性表達程度呈正相關。結論唐山地區食管癌組織中存在HPV感染，與食管癌的發生、發展有關，與p53的表達有一定的相關性。

食管癌；唐山；人乳頭狀瘤病毒；p53

食管癌是嚴重威脅人民生命的腫瘤之一，目前病因仍未明確，可能與生活習慣、遺傳因素、自然地理環境和病毒感染等有關。食管癌組織中可檢測到人乳頭狀瘤病毒(Human papillomavirus，HPVs)，作為第一個被確定為致腫瘤的病毒，HPV與食管癌的關系目前結論不一，不同地區HPV感染率也不等。p53是迄今為止發現的與人類腫瘤相關性最高的抑癌基因，同樣也是腫瘤領域研究最廣泛的抑癌基因之一[1-2]。為探討HPV感染及p53的表達與食管癌發生發展的關系，本文通過采用新柏式液基細胞學技術(TCT）和免疫組化檢測唐山地區食管癌患者食管癌組織HPV的感染和p53的表達情況，探討HPV感染在食管癌中和癌旁正常組織中的差異及其與p53表達的相關性，現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院胸外科2005年5月至2010年11月收治的45例唐山地區食管癌患者的食管組織標本，有完整的臨床資料，其中男性31例，女性14例；年齡45～73歲，平均(56.7±5.8）歲。食管癌組患者按1997年國際抗癌聯盟TNM分期標準，Ⅰ期25例，Ⅱ期15例，Ⅲ期5例；無淋巴結轉移29例，有淋巴結轉移16例。所有病例分別取癌組織、癌旁組織(距癌灶5 cm內)及正常食管黏膜組織制成標本，均經術前快速冷凍病理和術后常規病理檢查確診，術前均行化療、放療及免疫治療。

1.2 方法

1.2.1 HPV的檢測 新柏氏TCT檢查：將標本采集在干凈、干燥的容器中，裝入離心管中離心3 min，棄上清液，將細胞保存液加入離心管中混勻倒入保存瓶，震蕩混勻，經Thinprep 2000微電腦處理系統程序化處理，制成直徑2 cm的薄層細胞涂片，95%乙醇固定10 min，HE染色，封固，鏡檢。對于有多量血液黏液標本，加入25%冰醋酸3～5滴充分混勻，經過多次梯度程序而清除雜質離心收集細胞，顯微鏡下觀察結果。

1.2.2 免疫組織化學染色試劑與方法 鼠抗人p53單克隆抗體及免疫組織化學染色超敏試劑盒為美國Maxim Bistech公司產品。常規制片4μm厚石蠟切片，進行p53免疫組織化學染色(SP法)，操作步驟按說明書進行。用檸檬酸緩沖液行微波抗原修復，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為空白對照，已知陽性片作為陽性對照。

1.3 結果判定 均按試劑盒說明術進行，細胞核內棕褐色顆粒為雜交陽性信號。光鏡下，p53于細胞核內表達，呈棕褐色或棕黃色顆粒為陽性。在高倍鏡下(×400)每張切片隨機選擇5個視野，每個視野計數200個細胞，計算陽性細胞所占百分比。(-)為無陽性細胞；(+)為陽性細胞數比例＜25%；(++)為陽性細胞數比例25%～50%；(+++)為陽性細胞≥50%。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV的感染和p53的表達 食管癌組織中HPV陽性9例(20.0%)，癌旁組織中HPV陽性18例(40.0%)，正常組織中HPV陽性3例(6.7%)，差異有統計學意義(P＜0.05)。食管癌組織中p53陽性44例(97.8%)，癌旁組織中p53陽性28例(62.2%)，正常組織中p53陽性2例(4.4%)，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 食管癌組織、癌旁組織和正常組織中HPV的感染和p53的表達情況(例)

2.2 HPV的感染和p53的表達與食管癌臨床特征的關系 本組研究中食管癌患者年齡＜55歲病例為20例，HPV表達陽性率為20%(4/20)；≥55歲病例為25例，HPV表達陽性率為20%(5/25)，差異無統計學意義(P＞0.05)。＜55歲病例中，p53表達陽性率為100%(20/20)；≥55歲病例為24例，p53表達陽性率為96%(24/25)，差異無統計學意義(P＞0.05)。食管癌男性病例數為31例，HPV表達陽性率為22.6%(7/31)，女性病例數為14例，HPV表達陽性率為14.3%(2/14)，差異無統計學意義(P＞0.05)。男性病例中，p53表達陽性率為96.8%(30/31)；女性病例中，p53表達陽性率為100%(14/14)，差異無統計學意義(P＞0.05)，見表2。據TNM分期：Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期HPV陽性率均為20%，差異無統計學意義(P＞0.05)；Ⅰ期p53表達陽性率為96%(24/25)，Ⅱ期和Ⅲ期HPV的p53表達陽性率均為100%，差異無統計學意義(P＞0.05)。淋巴結轉移HPV表達陽性率為18.8%(3/16)；無淋巴結轉移病例為29例，HPV表達陽性率為20.7%(6/29)，差異無統計學意義(P＞0.05)。p53的表達在食管癌淋巴結轉移陽性病例為16例，p53表達陽性率為100%(16/16)；淋巴結轉移陰性病例為28例，HPV表達陽性率為96.6%(28/29)，差異無統計學意義(P＞0.05)。

表2 HPV的感染和p53的表達與食管癌臨床特征的關系

2.3 食管癌中HPV感染與p53表達之間的關系 運用Spearman相關分析食管癌中HPV感染與p53表達，HPV感染率與p53陽性表達程度呈正相關(r=0.371，P＜0.05)，見表3。

表3 食管癌中HPV感染與p53表達之間的關系

3 討論

食管癌的發生表現為多階段、多基因參與的復雜過程，常常發現時已到了中晚期，預后不理想。早發現、早診斷、早治療是目前對付癌癥的有效手段，近年來的研究致力于研究其致病機理，發現各種原因造成的細胞增殖與凋亡作用機制的失衡是腫瘤發生的主要原因[3]。p53基因作為目前研究較成熟的一種抑癌基因，其主要作用是當細胞DNA發生損傷時，它能使細胞分裂終止在G1/S期，從而進行充分的修復，當修復成功后自動回復正常狀態。若損傷難以修復，則進入細胞自動凋亡引起程序性死亡。p53基因有野生型和突變型兩種，野生型在細胞內的活性是被嚴格控制的，參與細胞周期的調控，維持正常生理代謝。突變型蛋白半衰期延長，易累積，但卻已不是抑癌基因而向癌基因轉變。p53基因的失活和蛋白的異常表達會導致細胞生長失去抑制作用或促進細胞的惡變及過度增殖[4]。作為致癌因素之一的HPV感染，其屬于乳頭狀瘤病毒組，分型很多，根據體外研究認為其編碼的E6蛋白能與p53蛋白結合形成復合物，使其失去抑癌作用，促使細胞的增殖，故HPV感染可能是其發病的危險因素之一[5]。

本研究顯示食管癌、癌旁組織和正常組織中HPV陽性率相比差異有統計學意義。食管癌、癌旁組織和正常組織中p53陽性表達相比差異有統計學意義。與相關研究結果相似，檢測食管癌患者中有20%發現HPV感染，提示HPV感染可能和唐山地區食管癌的發生存在聯系，癌旁組織中HPV感染率更是高達40%，認為其高表達可促進正常細胞的惡變和食管癌細胞的增殖浸潤，考慮野生型p53蛋白半衰期短，具不穩定性，不易檢測，突變型p53蛋白其具有癌基因活性，可引起細胞惡性增殖且具有抗凋亡作用，導致細胞轉化和腫瘤的發生，使檢測成為可能，發生腫瘤時p53蛋白的大量表達均為突變型p53蛋白，其不再具有抑癌作用，而是促進細胞增殖[6-7]。我們發現HPV感染率和p53陽性表達與年齡、性別、TNM分期和淋巴結轉移均無明顯聯系。相關研究認為p53表達與淋巴結轉移相關，其表達增加預示預后欠佳，淋巴結轉移的可能性大，與本實驗不符，考慮本實驗p53表達陽性結果高，陰性例數極少，未能有效的體現與臨床特征間的差異，可增加樣本量再行分析。本實驗研究認為HPV感染率與p53陽性表達程度呈正相關，與其他相關研究結果相似，認為HPV感染可破壞細胞增殖與凋亡的平衡，促使p53表達的增加，進而促進細胞惡變增殖。但仍有研究認為HPV感染與不同地區、甚至在同一地區不同地方感染人群所占的百分比不盡相同，與食管癌的關聯性仍不好確定，有待于在今后的研究中進一步深入及完善[8]。

綜上所述，聯合檢測二者在食管癌中的表達情況對預測食管癌的生物學行為、指導臨床治療有一定意義，兩者可能成為研究食管癌發病機制的有效途徑。

[1]黃偉鵬,許建生,陳潔容,等.胸段食管癌淋巴結轉移分布特征的螺旋CT表現[J].中國臨床醫學影像雜志,2009,20(4):236-239.

[2]呂宗舜,黃象謙.食管癌的診斷進展[J].世界華人消化雜志,2010, 8(9):1017-1019.

[3]王東旭,李 偉.食管癌病因學進展[J].世界華人消化雜志,2010, 8(9):1029-1030.

[4]漆楚波,朱潤慶,夏和順,等.組織芯片簡易制作方法及免疫組化有效性分析[J].腫瘤防治研究,2007,34(8):629-632.

[5]陳云昭,姚恩生,楊 蘭.人乳頭狀瘤病毒感染與新疆哈薩克族食管癌發生關系的探討[J].現代預防醫學,2008,35(13):2407-2409．

[6]何保呂,段廣才,蔡 琳.高危型HPV感染和p53基因多態性與食管癌關系的研究[J].海峽預防醫學雜志,2007,13(3):8-10．

[7]韓建英,徐致祥,邢海平,等.中國食管癌高發區與河流的相關研究[J].河南預防醫學雜志,2008,19(1):1-3．

[8]陳云昭,姚恩生,楊 蘭,等.人乳頭狀瘤病毒感染與新疆哈薩克族食管癌發生關系的探討[J].現代預防醫學,2008,35(13): 2407-2409．

R735.1

B

1003—6350（2012）20—035—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.20.014

2012-05-23）

河北省唐山市科技計劃項目（編號：111302060b）

李向利（1976—），男，河北省遷西縣人，主治醫師，學士。