斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾新技術(shù)檢測家畜血吸蟲病的效果試驗(yàn)

胡香蘭，嚴(yán)世龍，郭友春，和學(xué)武

(1.永勝縣動物疫病預(yù)防控制中心，云南 永勝 674200;2.永勝縣光華鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，云南 永勝 674211;3.永勝縣順州鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，云南 永勝 674210)

云南省永勝縣是血吸蟲病重度流行縣，長期以來在動物血吸蟲病防治領(lǐng)域一直采用糞便頂管毛蚴孵化法作為診斷動物感染血吸蟲病的唯一方法。該方法具有檢出率高、診斷準(zhǔn)確、設(shè)備簡單、技術(shù)要領(lǐng)易掌握的特點(diǎn)，長期在基層動物血吸蟲病防治工作中推廣運(yùn)用。但由于該方法自身的局限性，受季節(jié)、氣候、水質(zhì)等因素的影響較大，尤其是干旱缺水年，無法保證動物血防工作的正常開展。為探索新的快速診斷方法，2011年永勝縣采用浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供的斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)，在縣內(nèi)6個血吸蟲病疫區(qū)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))54個村委會中進(jìn)行試驗(yàn)推廣，取得了較好的效果。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

血吸蟲病抗原膠體金，試劑由浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、浙江省畜牧獸醫(yī)局提供，玻璃毛細(xì)管由四川成都華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠提供，每筒500支。待檢血清、血紙、牛糞便均采自血吸蟲病疫區(qū)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))。

1.2 操作

①待檢血清的稀釋:80倍稀釋待檢血清，即吸取待檢血清0.01mL，加生理鹽水0.79mL，搖勻。②待檢血紙的浸泡:用賬頁打孔器(直徑 0.55 cm)裁取待檢血紙 1片(0.24 cm2)，加生理鹽水0.5mL浸泡30min，搖勻成待檢血紙浸出液。③用玻璃毛細(xì)管吸取80倍稀釋的血清或血紙浸出液點(diǎn)樣于反應(yīng)板孔的NC上，每個孔點(diǎn)2個樣品。④點(diǎn)樣3～4mim后，滴甲液封閉，1滴/孔。⑤待甲液滲入NC后，滴乙液反應(yīng)顯色，1滴/孔。⑥待乙液滲入NC后，用蒸餾水或自來水洗滌，1滴/孔，判定結(jié)果。⑦判定:紅色斑點(diǎn)判定為血吸蟲病陽性，黃色或淺粉紅色斑點(diǎn)判為陰性。

1.3 符合率試驗(yàn)

首先在動物血吸蟲病感染率相對較高的部分鄉(xiāng)(鎮(zhèn))采集牛血清、血紙，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)檢測，檢出的陽性牛用糞便頂管毛蚴孵化法進(jìn)行病原檢查［1］，按標(biāo)準(zhǔn)采樣，實(shí)行一糞三檢，在規(guī)定的時間段觀察記錄，結(jié)果進(jìn)行對比。

1.4 特異性試驗(yàn)

在疫區(qū)采集糞檢肝片吸蟲感染陽性而血吸蟲病感染陰性的牛血清35份，血吸蟲病陽性感染牛血清30份，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)進(jìn)行特異性試驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 符合率試驗(yàn)

在永勝縣6個血吸蟲病疫區(qū)的54個村委會采集2 800份牛血紙和755份牛血清，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)檢測，血紙檢出陽性牛78頭，血清檢出陽性72頭;再對這2 800頭牛采用糞便毛蚴孵化檢查法進(jìn)行檢測，檢出陽性74頭。斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)與病原學(xué)檢查陽性符合率血紙為94.8%，血清為97.3%。

2.2 特異性試驗(yàn)

肝片吸蟲陽性牛血清35份，血吸蟲病感染陽性牛30份，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)進(jìn)行檢測，未發(fā)現(xiàn)與肝片吸蟲之間出現(xiàn)交叉反應(yīng)現(xiàn)象，與陽愛國等所做結(jié)果相一致，說明具有較強(qiáng)的特異性。

2.3 陰性符合率比較

參照陽愛國等的做法，在永勝縣血吸蟲病非疫區(qū)4個鄉(xiāng)(鎮(zhèn))采集牛血紙600份，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)進(jìn)行檢測，未檢出陽性牛。同樣對這600頭牛用糞便頂管毛蚴孵化法檢測也未檢出陽性畜，陰性符合率達(dá)100%。

2.4 血清與血紙比較

在永勝縣6個血吸蟲病疫區(qū)54個村委會采取2 800份牛血紙、755份牛血清進(jìn)行檢測，血紙檢測出陽性牛78頭，血清檢出陽性72頭，說明不論是用血紙還是血清檢測均可達(dá)到相同效果。

2.5 推廣應(yīng)用

在開展了符合率、特異性等試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，在血吸蟲病輕度感染區(qū)采集牛耳靜脈血紙18 480份，用金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)與糞便檢測同步進(jìn)行檢查，開展疫情監(jiān)測，結(jié)果兩種方法均未查出陽性。金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)的應(yīng)用在永勝縣取得了較好的效果。

3 討論與小結(jié)

(1)從永勝縣試驗(yàn)的結(jié)果來看，在血吸蟲病疫區(qū)不論采集血紙和血清作病原材料，用斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)進(jìn)行檢測，其陽性符合率分別達(dá)94.8%和97.3%，符合率較高。所以在實(shí)際應(yīng)用過程中兩者均可使用。

(2)斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)檢測血吸蟲具有特異性強(qiáng)，檢出符合率高，操作簡單、方便、快速，且不受環(huán)境氣候影響［2］，不受檢查時間限制，能夠同時結(jié)合其它動物防疫、診療活動同步開展工作的優(yōu)點(diǎn)，特別適合在目前血吸蟲病感染強(qiáng)度低，糞便檢查容易引起漏判的情況下在基層推廣應(yīng)用。

(3)斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾技術(shù)使永勝縣家畜血吸蟲病防治技術(shù)從單一的頂管毛蚴孵化檢查法向多種檢查方法縱深發(fā)展，同時也全面提升了永勝縣家畜血吸蟲病診斷技術(shù)，開創(chuàng)了山區(qū)動物血防工作的新局面。斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾診斷技術(shù)是將斑點(diǎn)酶標(biāo)與免疫膠體金結(jié)合起來的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)［2］，該方法在加樣過程中如果不按規(guī)程操作，會導(dǎo)致檢測結(jié)果判斷出現(xiàn)偏差，用血清來檢測容易出現(xiàn)漏檢，而用血紙檢測容易出現(xiàn)誤判。建議:在大規(guī)模推廣使用前首先進(jìn)行小范圍試驗(yàn)，在熟練掌握技術(shù)操作規(guī)程后再進(jìn)行大面積推廣。

［1］ 農(nóng)業(yè)部血吸蟲病防治辦公室.動物血吸蟲病防治手冊［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)科技出版社，1998:184－192.

［2］ 陽愛國，毛光瓊，謝智明，等.斑點(diǎn)金標(biāo)免疫滲濾新技術(shù)檢測家畜血吸蟲病的效果試驗(yàn)〔J〕.中國獸醫(yī)雜志，2008，44(4):3 －4.