阿折地平片的人體藥動學研究

舒成仁，衛樂樂，葛苗苗（1.湖北黃石市中心醫院藥劑科，湖北黃石435000；.華中科技大學附屬協和醫院藥劑科，武漢 4300）

阿折地平是一種新型二氫啶類鈣通道阻滯藥，它能擴張血管，降低外周血管和冠脈血管阻力，增加冠狀竇血流，改善心臟和肺的血液流動力學。對輕癥或中等癥狀原發性高血壓、腎障礙伴高血壓以及重癥高血壓患者的降壓作用較好。筆者通過測定健康志愿者口服阿折地平片后的血藥濃度，觀察其經時變化過程，估算藥動學參數，為臨床用藥提供參考依據。

1 材料

1.1 儀器

LC-MS/MS系統，包括API-4000型三重四極桿串聯質譜儀（美國Applied Biosystem Sciex公司）；Agilent 1200高效液相色譜儀，包括Analyst 1.5.1數據處理系統（美國Agilent公司）；AUW2200精密天平（日本Shimadzu公司）；BR16型高速冷凍離心機（河北白洋離心機廠）；XW-80A微型渦旋混合儀（上海滬西分析儀器廠有限公司）。

1.2 試藥

阿折地平片（江蘇云陽集團藥業有限公司，規格：每片8 mg，批號：20100120）；阿折地平對照品（江蘇云陽集團藥業有限公司，批號：20090316，純度：99.6%）；內標：哌羅匹隆對照品（山東中科泰斗化學有限公司，批號：090801，純度：99.57%）；甲醇、乙腈、甲酸、乙酸銨為色譜純。

2 方法

2.1 色譜和質譜條件

色譜柱：Phenomenex Kinetex C18（50 mm×2.1 mm，4.6 μm）、Phenomenex Security GuardTMC18預柱；流動相：甲醇-10 mmol·L－1醋酸銨緩沖液（含1%甲酸）＝70∶30；流速：0.8 mL·min－1；進樣量：10 μL。

采用電噴霧（ESI）-多離子反應監測（MRM）進行離子方式監測，離子監控條件：氣簾氣：25.00 psi；GAS1：60.0 psi；GAS2：60.0 psi；噴霧電壓：5 500 V；去溶劑濃度：500 ℃；Ihe：ON；碰撞氣（CAD）：6.00；射入電壓（EP）：10.00 V。阿折地平和內標哌羅匹隆的解簇電壓（DP）分別為80 V和150 V；碰撞能量（CE）分別為：36.8 eV和50 eV；用于檢測的離子反應分別為m/z583.5→m/z167.2（阿折地平）和m/z427.5→m/z177.0（哌羅匹隆）。

2.2 受試者選擇

健康志愿者24名（男、女各半），受試者平均年齡為（23.75±2.02）歲，平均身高為（167.5±8.45）cm，平均體質量為（59±7.6）kg。在研究開始前7天內，每人接受1次全面體檢，合格者參加本試驗。受試前2周及試驗期間，不服用任何其他藥物。經醫學倫理委員會審批通過，本人簽署知情同意書。

2.3 分組與給藥方案

單劑量給藥：健康受試者24名，配對比較法隨機分組，即按性別、體重加以配對，隨機分為A組和B組，每組12人（男、女各半），A組受試者口服阿折地平片8 mg，B組口服16 mg。多劑量給藥：阿折地平片，每日8 mg，連續服7 d，每日07：30空腹用200 mL溫開水送服。

2.4 血樣采集

單劑量口服給藥：分別給予8 mg和16 mg藥物，并于給藥前0 h及給藥后0.5、1、2、3、4、6、9、12、24、36、48、72、96 h時收集血樣。多劑量口服給藥：8 mg單劑量給藥結束后即入組多劑量給藥試驗。多劑量給藥組每天服藥1次，每次8 mg，連續給藥7 d。于給藥后的第3、4、5、6天清晨服藥前采血，第7天服藥前及服藥后0.5、1、2、3、4、6、9、12、24、36、48、72、96 h時收集血樣。于－70℃避光保存。

2.5 血樣處理

避光精密吸取血漿200 μL至2 mL離心管中，加入內標（100 μg·L－1哌羅匹隆）溶液50 μL，混勻，加乙腈600 μL沉淀蛋白，渦旋混勻1 min，于15 000 r·min－1、4 ℃離心5 min，取上清液10 μL進樣測定，記錄色譜圖及化合物的峰面積，采用內標法進行定量。

2.6 方法學考察評價

2.6.1 特異性考察：取空白血漿樣品、空白血漿加待測物、受試者血漿樣品，將以上樣品按照“2.5”項方法處理并測定，色譜圖見圖1。結果顯示，阿折地平和內標哌羅匹隆的保留時間分別為1.4 min和0.7 min左右；干擾峰的峰面積小于最低定量限峰面積的20%，不影響測定的準確度。

2.6.2 標準曲線的繪制及最低定量限：精密吸取人空白血漿180 μL，移至2 mL塑料離心管中，分別避光加入阿折地平系列標準溶液20 μL，配成含阿折地平7種不同濃度的標準含藥血漿樣品，按“2.5”項方法處理并測定，記錄色譜圖。以阿折地平與內標的峰面積之比（Y）以及加入濃度（X），進行線性擬合，權重系數為1/Y2，求得的直線回歸方程：Y＝0.704 3X+0.012 23（r＝0.998 4），結果表明，阿折地平血藥濃度在0.05～40.00 μg·L－1范圍內線線性關系良好。阿折地平在血漿中的最低定量限為0.05 μg·L－1。

2.6.3 回收率與精密度考察：阿折地平高、中、低3種質量濃度（0.1、4、30 μg·L－1）的日內 RSD 分別為 3.263%、3.308%、2.735%，日間RSD分別為8.365%、7.273%、4.840%，提取回收率在101.41%～102.17%之間，相對回收率在94.63%～97.24%之間，符合生物樣品分析要求。

2.6.4 介質效應考察：阿折地平3種不同濃度質控樣品的介質效應分別為94.90%、97.69%、101.68%，內標的介質效應為102.66%。在5種不同來源的空白血漿中介質效應基本恒定在85%～115%范圍之間。

2.6.5 穩定性考察：阿折地平不同濃度的標準含藥血漿樣本（每個濃度做3份樣本，長期穩定性5份），按”2.5”項所述方法處理并測定，考察血漿樣本于不同保存條件下的穩定性。考察結果顯示，處理后的樣本于自動進樣器4℃避光放置4 h、室溫下避光放置4 h、反復凍融3次和－70℃避光保存56 d的情況下穩定。

圖1 典型圖譜A.空白血漿；B.空白血漿+0.05 μg·L－1阿折地平對照品溶液+25 μg·L－1內標溶液；C.健康受試者1號口服阿折地平8 mg后4 h的血漿樣品+25 μg·L－1內標溶液；Ⅰ.阿折地平；Ⅱ.哌羅匹隆Fig 1 Typical spectrumA.blank plasma；B.blank plasma+azelnidipine control（0.05 μg·L－1）+internal standard（25 μg·L－1）；C.plasma sample obtained from a healthy volunteer at 4 h after oral administration of azelnidipine 8 mg+internal standard（25 μg·L－1）；Ⅰ.azelnidipine；Ⅱ.perospirone

2.7 數據處理

采用非房室模型計算受試者給藥后的藥動學參數。用SPSS 15.0軟件包進行方差分析（ANOVA），顯著性差異的標準為P＜0.05。單劑量給藥2個劑量組間及與多劑量給藥組間藥動學參數的比較：AUC0～96h、AUC0～∞、cmax經劑量校正后采用方差分析；tmax、t1/2直接采用方差分析。

3 結果

3.1 單劑量與多劑量口服阿折地平片的藥動學參數

單劑量給藥后各劑量組多數受試者符合二室模型，藥動學參數按照二室模型擬合，各主要藥動學參數詳見表1（表中，＊表示單劑量組間比較；#表示多劑量組（8 mg）與單劑量組（8 mg）比較）；單劑量給藥后阿折地平的平均藥-時曲線詳見圖2；單劑量和多劑量口服阿折地平片停藥后平均藥-時曲線見圖3。

3.2 單劑量和多劑量口服阿折地平片后男、女藥動學參數

單劑量和多劑量口服阿折地平片后男、女藥動學參數比較見表2。

4 討論

阿折地平遇光易發生光歧化反應，故所有操作都應在遮光條件下進行。本試驗建立的阿折地平液-質聯用（LC-MS）法，樣品提取操作較簡便、靈敏度高、樣品穩定性及回收率等均符合生物樣本測定要求、專屬性強，適合阿折地平藥動學及生物等效性研究[1，2]。

2組12名健康受試者分別單劑量口服給藥8、16 mg后所得的藥動學以非房室模型計算藥動學參數，經統計學檢驗，t1/2、AUC0～96h、cmax、AUC0～∞經劑量校正后各組間差異均無統計學意義，說明在8～16 mg劑量范圍內本品基本呈線性藥動學特征。試驗過程中受試者在生命體征、自主癥狀、生化指標等方面未見異常，表明阿折地平在此劑量范圍內，在中國健康受試者中具有良好的耐受性。

多劑量口服給藥后所得的藥動學以非房室模型計算，與等劑量單次給藥動學參數比較，除t1/2、CLz/F外，其他參數均無顯著性差別，說明本品每天給藥1次的給藥方法在中國人體內幾無蓄積作用。健康受試者的藥動學行為及藥-時曲線與國外文獻報道的同種產品基本一致[3]。

本試驗結果表明，各組主要藥動學參數在受試者的性別方面表現為單劑量口服低劑量組除Vz/F外，其余參數均有顯著性差別（P＜0.05）；單劑量口服16 mg組t1/2以及多劑量口服8 mg組t1/2、cmax存在顯著性差別，其他參數無顯著性差別。阿折地平單劑量給藥低劑量組男、女存在一定差異，高劑量及多劑量給藥組基本不存在顯著性差異。

表1 單劑量和多劑量口服阿折地平片后的藥動學參數（n＝12）Tab 1Pharmacokinetic parameters of azelnidipine after single and multi-oral oral dose ofAzelnidipine tablet（n＝12）

圖2 單劑量給藥后阿折地平的平均藥-時曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curve of azelnidipine after single oral dose

圖3 單劑量和多劑量口服阿折地平片停藥后平均藥-時曲線Fig 3 Mean plasma concentration-time curve of azelnidipine after stopping taking single and multiple oral dose

表2 單劑量和多劑量口服阿折地平片后男、女藥動學參數比較（n＝6）Tab 2 Comparison of pharmacokinetic parameters of azelnidipine between male and female after single and multiple oral dose ofAzelnidipine tablet（n＝6）

[1]Li D，Li L，Peng CM.Determination of azelnidipine in human plasma by liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometry[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2007，43（2）：575.

[2]Kuramoto K，Ichikawa S，Hirai A，et al.Azenidipine and amlodipine：a comparison of their pharmacokinetics and effects on ambulatory blood pressure[J].Hypertens Res，2003，26（3）：201.

[3]Kiyoshi K，Yoko U.Simultaneous determination of azelnidipine and two metabolites in human plasma using liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography B，2006，844（1）：45.