注射用硫酸鏈霉素細菌內毒素檢查限值的研究

劉雪莉，袁坤，張敏（.河北省藥品檢驗所，石家莊0500；.石家莊市中醫院，石家莊05005）

注射用硫酸鏈霉素是一種對結核分支桿菌有強大抗菌作用的氨基糖苷類抗生素，《國家藥品標準化學藥說明書內容匯編》[1]對本品明確要求：“成人治療細菌性心內膜炎，每12小時1 g，與青霉素合用；小兒治療結核病，按體重20 mg·kg－1，一日1次，與其他抗結核藥合用”，其細菌內毒素理論限值計算按成人計：L＝K/M＝5 EU·kg－1·h－1/（1 000 mg·h－1/60 kg）＝0.3 EU·mg－1，按小兒計：L＝K/M＝5 EU·kg－1·h－1/20 mg·kg－1·h－1＝0.25 EU·mg－1。但考慮到無論是成人還是小兒用法中都提及該藥與其他藥品的聯合使用，故本品細菌內毒素檢查限值應遠小于理論限值。“化學藥品注射劑安全性檢查法應用指導原則”[2]要求細菌內毒素檢查設定限值“可適當嚴格，至計算值的1/3至1/2，以保證安全用藥”。2010年版《中國藥典》規定每1 mg鏈霉素中含內毒素的量應小于0.25 EU[2]，選取了理論限值，筆者認為該規定未考慮臨床使用中的聯合用藥，限值設定未“適當嚴格”，不能保證用藥安全。2000年版《日本抗生物質醫藥品基準解說》規定每1 mg鏈霉素中含內毒素的量應小于0.10 EU[3]，介于計算值的1/3至1/2，可保證用藥安全。本試驗參考有關文獻[4]，對注射用硫酸鏈霉素進行了細菌內毒素檢查限值提高至0.10 EU的可行性研究。

1 材料

注射用硫酸鏈霉素（編號①：華北制藥股份有限公司，批號：1001101；編號②：瑞陽制藥有限公司，批號：10022101；編號③：山東魯抗醫藥股份有限公司，批號：091107；編號④：深圳華藥南方制藥有限公司，批號：N080407；編號⑤：大連美羅大藥廠，批號：65081016；編號⑥：遼寧倍奇藥業有限公司，批號：090214；“驗證檢查”所抽檢的另外37批：華北制藥股份有限公司（批號：080102、081001、0901101、0905102、0910103、0911107、1002103、1004101），瑞陽制藥有限公司（批號：08110601、08122601、08122701、09080201、09090301、09090601、10020801、10030401），山東魯抗醫藥股份有限公司（批號：080116、080602、081205、090903、091207、100104、100301、100313），深圳華藥南方制藥有限公司（批號：N080719、N081012、N090803、N090806、N091114、N091203、N100101、N100103），大連美羅大藥廠（批號：6509308、65080723、65090704、65090801、65091101），所有藥品規格均為每支1 g）；鱟試劑（TAL1，湛江博康海洋生物有限公司，批號：1007080，規格：每支0.1 mL，靈敏度（λ）＝0.25 EU·mL－1；TAL2，湛江安度斯生物有限公司，批號：1008231，規格：每支0.1 mL，λ＝0.25 EU·mL－1）；細菌內毒素工作標準品（CSE，中國食品藥品檢定研究院，批號：150601-201069，規格：每支120 EU）；細菌內毒素檢查用水（BET水，湛江博康海洋生物有限公司，批號：1005040，規格：每瓶50 mL）。

2 方法與結果

2.1 TAL靈敏度復核試驗

按2010年版《中國藥典》（二部）附錄細菌內毒素檢查法[2]進行試驗，所用TAL靈敏度均在0.5λ～2.0λ范圍內，符合規定，結果見表1（注：以下各表中“+”表示TAL安瓿從恒溫箱中輕輕取出，緩緩倒轉180°，所形成凝膠不變形，不滑脫；“-”表示未形成凝膠或凝膠不堅實，變形并滑脫）

表1 TAL靈敏度復核試驗結果Tab 1 Test for confirmation of TALsensitivity

2.2 供試品有效稀釋濃度計算

參考2000年版《日本抗生物質醫藥品基準解說》[3]，注射用硫酸鏈霉素細菌內毒素檢查限值為0.10 EU·mg－1，則最低有效濃度為λ/L＝0.25 EU·mL－1/0.10 EU·mg－1＝2.5 mg·mL－1。

2.3 供試品干擾預試驗

將3個廠家3批注射用硫酸鏈霉素（編號①、②、③）按下表濃度稀釋成供試品管（NPC：只含相應濃度的供試品），供試品陽性對照管（PPC：含有相應濃度的供試品與2λ濃度的CSE）。取TAL1、TAL2，分別與上述NPC和PPC進行反應，每個濃度平行做2支，另分別做陰性對照管（NC：只加入BET水）與陽性對照管（PC：加入2λ濃度的CSE）各2支，于（37±1）℃保溫（60±2）min。結果表明，注射用硫酸鏈霉素20 mg·mL－1濃度對TAL1、TAL2均有干擾作用，10 mg·mL－1及其以下濃度對2個廠家TAL均無干擾作用，詳見表2。

2.4 供試品干擾確證試驗

根據預試驗，將編號①、②、③3批供試品稀釋為20、5 mg·mL－12個濃度進行干擾確證試驗，結果見表3。

表3 干擾確證試驗結果Tab 3 Results of interference test

表3結果表明，3批供試品濃度為20 mg·mL－1時，對TAL2均表現為干擾作用；3批供試品濃度為5 mg·mL－1時，Et均在0.5Es～2Es之間，對TAL無干擾作用。

2.5 樣品細菌內毒素檢查

分別取6個廠家不同批號樣品6批（供試品編號①至⑥），將其稀釋至2.5 mg·mL－1（即最低有效稀釋濃度），以靈敏度0.25 EU·mL－1的TAL1，按2010年版《中國藥典》（二部）附錄細菌內毒素檢查法，以檢查限值為0.10 EU·mg－1進行檢測，結果6批樣品均符合規定，詳見表4。

表4 樣品細菌內毒素檢查結果Tab 4 Results of bacterial endotoxins test for samples

2.6 驗證檢查

由于不同原料及生產工藝對產品細菌內毒素質量控制存在影響，為進一步確認提高后的標準是否使得各廠家生產的大部分產品都符合規定，筆者抽查檢驗了全國的5個廠家生產的其他37批樣品，按提高后的標準“每1 mg鏈霉素中含內毒素的量應小于0.10 EU”進行檢查，結果樣品均合格。

3 討論

以上試驗表明，注射用硫酸鏈霉素細菌內毒素檢查標準提高至2000年版《日本抗生物質醫藥品基準解說》規定的“每1 mg鏈霉素中含內毒素的量應小于0.10 EU”[3]是可行的。

沿用《中國藥典》的表述習慣，注射用硫酸鏈霉素細菌內毒素檢查限值可提高為：取本品，依法檢查（《中國藥典》2010年版二部附錄ⅪE），每1 mg鏈霉素中含內毒素的量應小于0.10 EU。

提高后的細菌內毒素檢查限值與國際標準接軌，能夠更好地控制藥品質量，為2015年版《中國藥典》對本品細菌內毒素的規定提供了有力的研究資料。

[1]統一藥品說明書及批準文號專項工作小組.國家藥品標準化學藥說明書內容匯編[S].第6冊.2002：6-161.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：999、附錄99、附錄213.

[3]日本抗生物質學術協議會.日本抗生物質醫藥品基準解說[S].2000年版.東京：時報株式會社，2000：Ⅱ-17.

[4]中國藥品生物制品檢定所，中國藥品檢驗總所.中國藥品檢驗標準操作規范[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：310.