PTHrP和BSP聯(lián)合檢測在前列腺癌骨轉(zhuǎn)移診斷中的價(jià)值

朱開常，許小林，劉 峰，王 忠，陳 琳，沈建國，金建忠，王 悅，李 迅，徐 敏，李家棟

(上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院奉賢分院，上海201400)

甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(Parathyroid hormone related protein，PTHrP)是1987年從惡性高血鈣腫瘤患者的腫瘤中提取純化的，與細(xì)胞的增殖分化和鈣轉(zhuǎn)移有關(guān)。多種類型腫瘤組織中存在PTHrP過度表達(dá)，并已證實(shí)PTHrP為惡性腫瘤致體液性高血鈣的原因［1］。人骨唾液蛋白(Human bone sialoprotein，hBSP)是細(xì)胞外基質(zhì)中的一種酸性糖蛋白，參與信號(hào)識(shí)別、細(xì)胞黏附和轉(zhuǎn)移，在破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞與骨小梁表面結(jié)合過程中發(fā)揮重要作用。BSP與惡性腫瘤及骨轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，且在眾多前列腺癌骨轉(zhuǎn)移標(biāo)志中，顯示出很高的靈敏性及特異性［2］。近期我們對(duì)2009年1月～2010年9月確診的原發(fā)性前列腺癌患者檢測了其前列腺癌組織中PTHrP和BSP表達(dá)，并探討二者表達(dá)與術(shù)后骨轉(zhuǎn)移的關(guān)系，旨在為前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的預(yù)防和治療尋找新的藥物靶點(diǎn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 89例前列腺癌患者癌組織石蠟包埋標(biāo)本，患者年齡32～74(54.6±4.2)歲，中位年齡46歲。均經(jīng)病理檢查證實(shí)診斷，TNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期48例，Ⅲ期30例，Ⅳ期5例。根據(jù)核素骨顯像結(jié)果分為骨轉(zhuǎn)移組42例和無骨轉(zhuǎn)移組47例，其中無骨轉(zhuǎn)移組包括無轉(zhuǎn)移患者26例，骨外轉(zhuǎn)移患者21例。兩組一般資料具有可比性。

1.2 PTHrP和BSP表達(dá)檢測 采用常規(guī)ABC法對(duì)兩組標(biāo)本行PTHrP和BSP的免疫組織化學(xué)染色。PTHrP鼠抗人單克隆抗體購于美國Calbiochem公司，BSP鼠抗人單克隆抗體購自加拿大Bio-Wen公司，ABC免疫組化試劑盒和DAB染色盒購自北京中山試劑公司，按照試劑盒說明進(jìn)行操作。以已知PTHrP和BSP的陽性切片作為對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為每次染色的陰性對(duì)照。PTHrP和BSP陽性細(xì)胞染色為棕黃或棕褐色，定位于胞質(zhì)，連續(xù)計(jì)數(shù)＞10個(gè)高倍視野，每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)腺上皮細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞的平均百分率，陽性細(xì)胞數(shù)＜25%為陰性，25%～80%為弱陽性(+)，＞80%為強(qiáng)陽性(++)。

1.3 隨訪 采用電話或信件方式對(duì)兩組進(jìn)行隨訪，隨訪截至2011年10月1日，共隨訪12個(gè)月，記錄新發(fā)生的骨轉(zhuǎn)移情況，隨訪終點(diǎn)為研究結(jié)束或患者死亡。對(duì)可能影響前列腺癌患者骨轉(zhuǎn)移的臨床因素采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型統(tǒng)計(jì)，患者生存預(yù)后情況采用Log-rank生存曲線分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，組間計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組PTHrP和BSP表達(dá) PTHrP和BSP染色部位均位于癌細(xì)胞胞質(zhì)，邊緣正常前列腺上皮細(xì)胞和浸潤淋巴細(xì)胞均無著色。PTHrP和BSP在骨轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)均明顯高于無骨轉(zhuǎn)移組(χ2值分別為10.47 和8.48，P 均 ＜0.01)，且強(qiáng)陽性表達(dá)亦均明顯高于后者(χ2值分別為 11.04和 9.17，P 均 ＜0.05)，見表1。無骨轉(zhuǎn)移組中無轉(zhuǎn)移及骨外轉(zhuǎn)移者兩指標(biāo)陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表1 兩組前列腺癌組織PTHr P和BSP表達(dá)比較

2.2 隨訪 隨訪率100%。無骨轉(zhuǎn)移組隨訪12個(gè)月，17例發(fā)生骨轉(zhuǎn)移。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析結(jié)果顯示，前列腺癌組織中PTHrP和BSP高表達(dá)是骨轉(zhuǎn)移的主要危險(xiǎn)因素(P＜0.01)，其相對(duì)危險(xiǎn)度分別為1.348和1.293(表2)。兩組隨訪期間共有24例死亡，Log-rank生存曲線分析結(jié)果顯示，隨著觀察時(shí)間延長，PTHrP和BSP高表達(dá)者累積生存概率均明顯低于PTHrP和 BSP陰性表達(dá)者(P均＜0.05)。

表2 PTHr P和BSP對(duì)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析

3 討論

轉(zhuǎn)移性骨腫瘤是晚期惡性腫瘤的常見并發(fā)癥，據(jù)統(tǒng)計(jì)，發(fā)生率占全身轉(zhuǎn)移性腫瘤的15%～20%，僅次于肺轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移［3］。腫瘤患者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移后常導(dǎo)致局部劇烈疼痛、病理性骨折、高鈣血癥、脊髓壓迫等癥狀，不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，而且影響患者的生存期。臨床約70%的乳腺癌、前列腺癌等親骨性腫瘤患者在自然病程中發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，肺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、腎癌、甲狀腺癌等患者在病程發(fā)展中亦有15%～30%發(fā)生骨轉(zhuǎn)移［3］。

PTHrP是1987年Burtis等從與高鈣血癥相關(guān)的惡性腫瘤組織中分離出一種具有全身作用的體液因子，其生物學(xué)作用多樣，參與多種組織器官的生長發(fā)育，如骨骼、皮膚、牙齒、腎臟、胰腺等，還直接影響胎兒的骨骼礦化，對(duì)某些細(xì)胞的增殖和分化起促進(jìn)作用［4，5］。PTHrP作為成骨細(xì)胞的一種自分泌和旁分泌因子調(diào)節(jié)骨形成和骨吸收［6，7］。在前列腺癌和乳腺癌的動(dòng)物模型中，PTHrP具有促進(jìn)骨轉(zhuǎn)移的作用［5，8～10］，但有關(guān) PTHrP 在腫瘤骨轉(zhuǎn)移中的具體作用與機(jī)制尚不清楚［1，11，12］。

BSP是細(xì)胞外基質(zhì)中一個(gè)大的糖基化和磷酸化蛋白，其相對(duì)分子質(zhì)量為70～80 kD，核心蛋白為33～34 kD，在破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、滋養(yǎng)細(xì)胞、血小板中均發(fā)現(xiàn)有BSP和其mRNA表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)BSP在破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞與骨小梁表面結(jié)合過程中發(fā)揮重要作用。研究表明，許多腫瘤在發(fā)展過程中均伴隨有BSP表達(dá)，而這些表達(dá)BSP的腫瘤亦更容易表現(xiàn)出侵襲、轉(zhuǎn)移［13］。Waltregny 等［14］對(duì)乳腺癌和前列腺癌研究首次闡明BSP在腫瘤的骨轉(zhuǎn)移中作用顯著。Jain等［15］研究提示，血清BSP是診斷前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的重要參考指標(biāo)，其水平的增高是骨轉(zhuǎn)移的高危因素，BSP的高穩(wěn)定表達(dá)可增加前列腺癌細(xì)胞的血管侵襲能力，提高前列腺癌細(xì)胞的骨骼黏附能力，對(duì)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移可能起促進(jìn)作用。

本研究結(jié)果顯示，PTHrP和BSP在骨轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率均明顯高于無骨轉(zhuǎn)移組，且強(qiáng)陽性表達(dá)亦均明顯高于后者，支持PTHrP和BSP高表達(dá)與前列腺癌骨轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的理論。PTHrP和BSP陽性表達(dá)率在無轉(zhuǎn)移者和骨外轉(zhuǎn)移者間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步證實(shí)PTHrP和BSP預(yù)測骨轉(zhuǎn)移發(fā)生的優(yōu)越性和靶向性。本研究對(duì)47例未發(fā)現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移患者隨訪12個(gè)月，結(jié)果17例發(fā)生骨轉(zhuǎn)移。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織中PTHrP和BSP高表達(dá)是預(yù)測骨轉(zhuǎn)移的主要危險(xiǎn)因素，其相對(duì)危險(xiǎn)度分別為1.348和1.293。同時(shí)，應(yīng)用Log-rank生存曲線分析結(jié)果提示，隨著觀察時(shí)間延長，在前列腺癌患者中PTHrP和BSP高表達(dá)者的累積生存概率均明顯低于PTHrP和BSP陰性表達(dá)者，提示PTHrP和BSP高表達(dá)患者的預(yù)后較差。PTHrP和BSP可作為評(píng)估前列腺癌患者預(yù)后的重要預(yù)測因子。

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