HPLC法測定補腎強身片中淫羊藿苷的含量

顏春華 魏清榕

（1 丹東市食品藥品檢驗所，遼寧 丹東 118002；2 鞍山市食品藥品檢驗所，遼寧 鞍山 114006）

補腎強身片具有補腎強腎的功效，用于治療腰酸足軟，頭暈耳鳴，眼花心悸，陽萎遺精，由淫羊藿、菟絲子、金櫻子、女貞子、狗脊五味中藥組成。該中成藥收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第十五冊[1]，標準中無定量指標，不能有效控制其質量。淫羊藿為方中的君藥，其主要成分為淫羊藿苷，我們采用HPLC法[2]對方中淫羊藿苷進行含量測定。方法簡便、準確，重現性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本Shimadzu公司LC-10ATVP高效液相色譜儀；檢測器：SPD-M10AVP；Class-vp工作站；CSF-1A超聲波發生器（上海超聲波儀器廠）。

1.2 試藥

淫羊藿苷對照品：由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110737-200319（供含量測定用）；甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水；其它試劑均為分析純；補腎強身片為市售品（批號為060101，060102，060103）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Diamonsil?（鉆石）C18（5μm，250×4.6mm）；流動相：乙睛-水（30∶70）；檢測波長：270nm；柱溫：室溫；流速：1.0mL/min；理論板數按淫羊藿苷峰計算不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷對照品10.40mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取此液2mL，置5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL含淫羊藿苷41.6μg）。

圖1 HPLC色譜圖

表1 淫羊藿苷回收率實驗結果

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取約1g，精密稱定，置50mL量瓶中，加稀乙醇30mL，超聲處理1h，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，按上述色譜條件測定，結果見圖1A、B。

2.4 線性關系考察

精密吸取對照品溶液2、4、5、6、8mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。分別吸取各濃度溶液10μL注入液相色譜儀中，測定峰面積，以淫羊藿苷進樣量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸。得回歸方程為：Y=45186.35+6455486.779X，r=0.9999，表明淫羊藿苷在0.0832～0.3328μg范圍內呈良好的線性關系。

2.5 陰性對照試驗

按處方比例配制不含淫羊藿的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制備，測定，結果在淫羊藿苷對照品吸收峰位置處無干擾（見圖1C）。

2.6 精密度試驗

分別精密吸取41.6μg/mL的淫羊藿苷對照品溶液10μl，按正文含量測定項下色譜條件，連續進樣5次，測定峰面積，結果平均峰面積為1328978，RSD=1.03%。

2.7 穩定性試驗

取同一份供試品溶液分別放置2、4、8、12、16、20、24h測定供試品中淫羊藿苷的峰面積，測得其峰面積的平均值為1385511，RSD為1.23%，表明供試品溶液至少在24h內穩定。

2.8 重現性試驗

取同一批號的供試品適量，精密稱定6份，按含量測定項下的方法操作，制備供試品溶液，測定供試品中淫羊藿苷的含量，結果平均含量為0.89mg/片，RSD=1.16%。

2.9 回收率試驗

取已知淫羊藿苷含量的補腎強身片樣品（批號為060103，淫羊藿苷含量為0.90mg/片，平均片重為0.3995g）約1g，精密稱定，共計6份，分別精密加入淫羊藿苷對照品溶液（0.1514mg/mL）15mL，按含量測定項下方法操作，制備供試品溶液，測定補腎強身片中淫羊藿苷的含量，計算回收率，測定結果見表1。

2.10 樣品含量測定

按本質量標準含量測定項下方法操作，制備供試品溶液，測定三批補腎強身片中淫羊藿苷的含量，測定結果分別為0.89、0.92、0.90mg/片。

3 討 論

流動相的篩選與確定，曾采用不同比例的乙睛-0.05%磷酸溶液，乙睛-水為流動相，進行了試驗，結果乙睛-水體積比為30∶70時，供試品中淫羊藿苷與相鄰組分分離度良好，故確定為含量測定項下色譜條件。

[1]中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準.中藥.中藥成方制劑[S].第十五冊.1997.

[2]中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典:一部[M].北京:化學工業出版社,2005:6.