菊泰軟膏劑中紫錐菊提取工藝

常艷茹 趙雪嬌 劉雅萍 趙昱瑋 張 倩 楊冬華

（1 吉林天藥藥物研發(fā)有限公司，吉林 長春130012；2 沈陽化工研究院有限公司，遼寧 沈陽 110141）

菊泰軟膠囊為本公司已經(jīng)上市的保健食品，由西洋參提取物和紫錐菊兩味藥材組成具有抗疲勞、提高免疫力及升高外周白細胞作用。處方中主藥西洋參為五加科植物西洋參Panax quinquefolium L.的干燥根，藥理實驗表明西洋參具有明顯的生肌、收斂、抗菌作用[1]處方中紫錐菊（Echinacea purpurea （L.） Moench.），又名紫花松果菊，為菊科松果菊屬植物紫花松果菊的干燥全草，主要藥用成分為菊苣酸、松果菊苷、生物堿、多糖及糖蛋白等活性成分[2]。其所含有的多糖可以抑制透明質(zhì)酸酶，刺激新組織的產(chǎn)生，此外紫錐菊具有良好的抗菌和抗病毒作用，有利于皮膚傷口愈合[3]?；谝陨希覀儗⒕仗┸浤z囊制成軟膏劑，用于清熱解毒，涼血祛腐止痛，用于Ⅰ、Ⅱ度燒燙傷。本實驗以該處方中紫錐菊為研究對象，建立了高效液相色譜法測定菊苣酸的含量，利用正交實驗方法對乙醇提取紫錐菊工藝進行研究。

1 儀器與試藥

1.1 實驗原料

紫錐菊全草（吉林省宏檢醫(yī)藥藥材有限公司），提取前粉碎過20目篩。

1.2 實驗儀器與試藥

高效液相色譜儀：SHIMADZU LC-2010（日本島津公司），紫外檢測器：所用的試劑乙腈為色譜純，其它試劑為分析純。菊苣酸對照品（批號：111752-200902，規(guī)格：20 mg，中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 實驗方法[4-7]。

2.1.1 色譜條件

色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為乙腈-0.5%磷酸水溶液=15∶85流速為1.0mL/min，檢測波長為330nm 檢測溫度：30℃；進樣量為10μL。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取菊苣酸對照品10mg置20mL容量瓶中，用70%乙醇溶解并加至刻度。再精密吸取1mL置10mL容量瓶中，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.05mg/mL對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0μL注入液相色譜儀中，測定峰面積。以菊苣酸質(zhì)量X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，得方程：Y=5E+06X-9868.6 r=1 線性范圍：0.10～1.00μg。

2.1.3 正交實驗設(shè)計

以干膏得率和菊苣酸的含量為考察指標(biāo)，用正交實驗法L9（34）進行試驗，選擇影響提取工藝中的4個主要因素：A（乙醇濃度/%）、B（加醇量/倍）、C（提取時間/小時）、D（提取次數(shù)/次），每個因素3個水平進行試驗。

表1 因素水平表

2.1.4 提取工藝和數(shù)據(jù)測量

按L9（34）正交表安排實驗，稱取紫錐菊全草粗粉100g，按表2所列條件加入乙醇后回流，濾過，濾液置已干燥至恒重蒸發(fā)皿中水浴蒸干，于60℃減壓干燥48h，置干燥器中冷卻0.5h，迅速稱重并密閉保存。

干膏得率測定：根據(jù)干膏得率=W/100×100%計算，W為干膏重。

菊苣酸含量測定：精密稱取各提取物樣品適量，置10mL量瓶中，用70%乙醇溶解并加至刻度，過0.45μm濾膜，按上述色譜條件，精密取續(xù)濾液10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；測定菊苣酸峰面積，根據(jù)2.1.2中線性方程計算菊苣酸含量，含量結(jié)果見表4。

2.2 結(jié)果

2.2.1 極差分析

表2 正交設(shè)計方案和出膏率試驗結(jié)果

表3 干膏得率方差分析表

表4 正交設(shè)計方案和菊苣酸含量試驗結(jié)果

表5 菊苣酸含量方差分析表

以干膏得率為考察指標(biāo)，由表2、表4中極差R值大小顯示，各因素主次作為：A＞C＞D＞B，即乙醇濃度為重要因素，其次是提取次數(shù)、提取時間和乙醇用量；以菊苣酸含量為考察指標(biāo)可知，各因素主次作為：A＞C＞B＞D，即乙醇濃度為重要因素，其次是提取次數(shù)、乙醇用量和提取時間。

2.2.2 方差分析

將實驗所得數(shù)據(jù)用SPSS軟件進行方差分析，結(jié)果見表3和表5.方差分析結(jié)果表明：以干膏得率為考察指標(biāo)，A因素和C因素均為顯著性影響因素（P＜0.05），B、D無顯著性意義，最優(yōu)工藝為A2B1C3D1即用8倍量70%乙醇提取3次，提取1h。以菊苣酸含量為考察指標(biāo)可知，A、C因素有極顯著性影響（P＜0.05）B為顯著性意義，其他因素?zé)o顯著性意義（P＞0.05）以最優(yōu)工藝為A3B3C3D3，即用12倍量80%乙醇提取3次，提取2h。

根據(jù)極差和方差分析的結(jié)果，考慮到菊苣酸為紫錐菊主要有效成分，其含量與軟膏藥效有重要關(guān)系，可能直接影響藥物品質(zhì)，因此以菊苣酸含量作為考察指標(biāo)，并結(jié)合經(jīng)濟節(jié)能的原則綜合分析確定A3B1C3D1為最佳工藝，即用8倍量80%乙醇提取3次，提取1h。

2.3 驗證實驗

由于優(yōu)選的工藝未包括在正交設(shè)計表的9次試驗中，故對其進行驗證試驗。用同一批藥材，按照前述的提取過程，按A3B1C3D1工藝條件進行試驗3次，結(jié)果見表6。由表6可知此工藝基本穩(wěn)定可行。

表6 驗證試驗結(jié)果

3 討 論

紫錐菊中菊苣酸的提取一般采用水，甲醇，乙醇和超臨界提取[8]，由于水提取溫度高，容易造成菊苣酸的氧化；甲醇提取容易造成甲醇的殘留，降低產(chǎn)品的質(zhì)量和帶來不安全因素，因此不適合于工業(yè)化；超臨界提取方法既不會造成的氧化，也不會污染產(chǎn)品，但是由于其成本較高，收率低，不適合工業(yè)化研究。本實驗采用乙醇作為工業(yè)化提取溶劑，價格便宜，操作簡便安全，適合應(yīng)用于工業(yè)化[9]。

[1]鄔秀華.西洋參在臨床換藥中的應(yīng)用和體會[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1998,19(3):55.

[2]肖培根.國際流行的免疫調(diào)節(jié)劑-紫錐菊及其制劑[J].中草藥,1996,27(1):46.

[3]busing,1952;Vogel&Mitarb,1968;Bonadeo,1971.

[4]陳波,潘振球,范元成,等.高效液相色譜法制備菊苣酸標(biāo)準(zhǔn)對照品的研究[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué),2001,8(1):15-17.

[5]羅旭彪,陳波.紫錐菊及其復(fù)方制劑中菊苣酸的HPLC測定[J].中草藥,2002,33(10):890-891.

[6]王弘,王雪薇,陳世忠,等.松果菊屬3種植物的理化分析[J].中草藥,2001,32(10):934-936.

[7]何傳波,吳蘭蘭,湯鳳霞,等.鐵觀音茶多糖的酶法提取及脫蛋白工藝研究[J].云南民族大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2009,18(1):41-44.

[8]吳啟林,袁其朋,陳養(yǎng)文.紫錐菊中菊苣酸提取純化工藝研究[J].中草藥,2004,35(9):995.

[9]張雷,鄒任賢,鄧韻等.紫錐菊有效部位提取工藝的研究[J].中成藥,2008,30(4):603.