正交試驗優選暖臍膏醇提工藝

仇 凡 李明梅 火躍芳 陳 俊

1.鹽城衛生職業技術學院藥學系，江蘇 鹽城 224001；2.江蘇南京中康藥物科技有限公司，江蘇 南京 210009

暖臍膏（橡膠膏）是一種傳統的中藥處方，收載于中華人民共和國衛生部部頒標準第15冊[WS3-B-3010-98]。它由當歸、白芷、烏藥、小茴香、八角茴香、木香、香附等13味中藥組成，具有溫里散寒、行氣止痛的功效，常用于寒凝氣滯、少腹冷痛、脘腹痞滿、大便溏瀉等癥狀。其制法為取處方中除乳香、沒藥、麝香外，其余當歸等10味藥材，用75%～85%乙醇回流提取，濃縮得浸膏；將乳香、沒藥、麝香及上述浸膏加入由橡膠、松香等制成的基質中，制成涂料[1]。筆者在工藝研究中，不擬對其基本工藝進行改變，但擬進一步細化。原暖臍膏標準中提取工藝未明確所用乙醇的濃度、乙醇的用量、提取的時間以及提取次數，本項研究以當歸中阿魏酸的提取量為指標，通過實驗確定了乙醇的濃度、乙醇的用量、提取時間以及提取次數，完善了提取工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100液相色譜儀（美國 Agilent公司），Mettler AE240電子天平（10萬分之一），SYZ-A石英亞沸高純水蒸餾器（江蘇信達儀器廠），HH-6恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）。

1.2 試藥

乙醇（分析純），甲醇（TEDIA，USA，色譜純），水（重蒸餾，臨用前制備），醋酸（上海化學試劑有限公司，分析純），阿魏酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：0733-9910）；當歸、白芷、烏藥、小茴香、八角茴香、木香、香附、乳香、母丁香、肉桂、沉香均購于江蘇省淮陰藥材采購供應站。

2 方法與結果

2.1 正交試驗的設計[2-4]

以當歸中阿魏酸的提取量為考察指標，選用L9（34）正交試驗，考察藥材提取所用乙醇的濃度、乙醇的用量、提取的時間以及提取次數，各因素水平見表1。

表1 提取工藝的因素水平

按處方量配比平行稱取藥材9份（58 g/份），依據表1具體試驗參數進行試驗。

2.2 暖臍膏醇提取部分得膏率的測定方法

分別精密吸取50 mL醇提取液，置于精密稱重的潔凈蒸發皿中，水浴揮至近干，加入精密重量的柱層析硅膠，攪勻，低溫鼓風干燥至恒重，置干燥器中冷卻后迅速稱定重量，按下式計算：干浸膏得率＝（W1/W）×100%。式中，W1為 50 mL提取液中干浸膏質量；W為每份藥材的質量。

2.3 阿魏酸含量的測定[5-8]

2.3.1 色譜條件 Agilent KR100-5 C18（5μm，4.6 mm×250 mm）；流動相：甲醇-水-醋酸（25.0∶75.0∶0.7）；流速：1 mL/min；檢測波長為 280 nm；柱溫：30℃；進樣量：5 μL；理論塔板數按阿魏酸峰計算不低于2 000。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對照品適量，加流動相溶解制成每1 mL含49.8μg阿魏酸的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 分別將9份醇提液濃縮并定容至200 mL 量瓶中，分別取 25 mL，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續濾液，即得。

2.3.4 線性關系的考察 精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成濃度分別為 20.02、33.30、48.62、65.77、82.40、95.25μg/mL的溶液，分別精密稱取上述各對照品溶液5 μL，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積。以對照品溶液進樣量（μg）為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線，計算得回歸方程為 Y=1.54X×106＋3.32×105（r=0.999 6）。 表明阿魏酸進樣量在0.10～0.47μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.5 樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，按《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD法[9]測定。

2.4 正交試驗分析

根據得到的阿魏酸含量和得膏率結果，按下式計算綜合評分：綜合評分=（阿魏酸含量/最高阿魏酸含量）×100×0.7+（得膏率/最高得膏率）×100×0.3。 正交試驗結果見表 2，方差分析結果見表3。

表2 醇提正交試驗結果分析

表3 方差分析結果

根據數理統計理論，筆者對實驗數據進行計算和分析。從表2和表3可知，影響提取效果的因素大小依次為：D＞B＞C＞A，較主要的因素是D，即提取次數對阿魏酸提取量和得膏率有顯著影響，其次是 B、C、A。水平優勢為 A1＞A3＞A2，B2＞B1＞B3，C3＞C2＞C1，D2＞D1＞D3，因此最優提取工藝為 A1B2C3D2。即加 9 倍量75%乙醇，提取90 min，再加6倍量75%乙醇，提取60 min。

2.5 驗證試驗

為了驗證最佳工藝的合理性，按A1B2C3D2條件制備暖臍膏配方藥材3批，測定提取液得膏率以及阿魏酸的含量。結果各項指標RSD均小于7%，表明該工藝較穩定，重現性好。并且該項試驗結果較正交試驗結果好，表明優化條件可行，故確定最佳工藝為A1B2C3D2。見表4。

表4 最佳工藝條件驗證結果

3 討論

筆者在預實驗時按照中藥材提取的常規操作，將藥材浸泡在溶劑中，為了減小這一操作對實驗結果的影響，故將浸泡時間一致定為30 min。綜合考慮該劑型的需要，將得膏率作為指標之一，最后以綜合評分的形式評價提取工藝。另外該方劑中的有效成分以小分子化合物居多，且有揮發性，所以在操作過程中需要注意實驗環境的溫度和濕度，以減小實驗誤差。實驗證明，分次提取的效果最好，但是提取的時間均較長，這也是和實驗室常規提取小分子物質如揮發油成分的情況是吻合的。

[1]國家藥典委員會.衛生部藥品標準中藥成方制劑[S].中國中藥雜志，1998：210-211.

[2]謝秀瓊，周淑芳，韓麗，等．現代中藥制劑新技術[M].北京：化學工業出版社，2004：348-351.

[3]張曉云，馬蓉，王荷，等．復方半夏止咳貼膏劑的工藝研究[J].蘭州醫學院學報，2001，27（4）：17.

[4]雷黎明，王先教，周家茂，等.正交設計優選活絡健骨膠囊的提取工藝[J].中國醫藥導報，2011，8（3）：64-65.

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[7]何玲玲.高效液相色譜法測定當歸養血丸中阿魏酸含量[J].中國醫藥導報，2011，8（3）：60-61.

[8]賀云彪，劉軍，伍良知.高效液相色譜法測定當歸養血丸中阿魏酸含量[J].中國現代藥物應用，2010，4（16）：15-17.

[9]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄 37.