毛細(xì)管柱氣相色譜法測(cè)定七氟烷的有關(guān)物質(zhì)

王 悅 劉舒揚(yáng) 李銀峰 靳朝東

1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；2.天津藥物研究院分析測(cè)試中心，天津 300193

七氟烷是一種較新的吸入麻醉藥，1968年由Regan合成，1971年Willin等最先報(bào)道并于1975年對(duì)其理化性質(zhì)、藥理作用及毒理學(xué)進(jìn)行了評(píng)價(jià)，1992年使用于日本，1995年經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)在美國(guó)上市。吸入型麻醉劑[1-3]能通過(guò)呼吸有效地調(diào)節(jié)血中麻醉藥濃度，并能迅速被“洗出”，而七氟烷對(duì)心血管系統(tǒng)的影響比異氟烷小；不引起過(guò)敏反應(yīng)，對(duì)眼黏膜刺激輕微，麻醉深度易調(diào)節(jié)等，是一種非常優(yōu)良、具有較多理想特性的新型吸入型麻醉劑[4]。目前國(guó)內(nèi)使用的七氟烷多為進(jìn)口，為保證藥品質(zhì)量，針對(duì)國(guó)內(nèi)廠家的生產(chǎn)工藝，建立了毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定七氟烷的有關(guān)物質(zhì)，并對(duì)測(cè)定條件進(jìn)行了系統(tǒng)的考察。

1 儀器與試藥

Agilent Technologies 6890N氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器，七氟烷對(duì)照品（批號(hào)：090228），三批樣品（天津市智康科技有限公司，批號(hào)：090301、090302、090303），戊氟異丙基氟甲醚、己氟異丙基甲基醚均為USP對(duì)照品，1，2-二氯乙烷、二甲氧基甲烷均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱 Dikma Technologies DM-624（75 m×0.53 mm，3.0μm）；柱溫：程序升溫（初始溫度 45℃，保持 1 min，再以5℃/min的升溫速率升至120℃，保持1 min，再以10℃/min的升溫速率升至 200℃，保持 3 min）；載氣：氮?dú)猓ê懔鳎?.00 mL/min）；進(jìn)樣口溫度：230℃；檢測(cè)器溫度：250℃；進(jìn)樣量：2 μL。

在上述色譜條件下，按七氟烷峰計(jì)算理論板數(shù)應(yīng)不低于5 000，七氟烷峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于2。

2.2 分離度試驗(yàn)

分別取戊氟異丙基氟甲醚對(duì)照品和己氟異丙基甲基醚對(duì)照品適量，用1，2-二氯乙烷溶解，按上述色譜條件下分別測(cè)定，戊氟異丙基氟甲醚的保留時(shí)間為13.394 min，己氟異丙基氟甲醚為13.873 min。在對(duì)照品中加入少量以上兩種雜質(zhì)對(duì)照品，以二甲氧基甲烷為內(nèi)標(biāo)，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，戊氟異丙基氟甲醚的保留時(shí)間為13.503 min，己氟異丙基氟甲醚為13.859 min，七氟烷為14.465 min，內(nèi)標(biāo)為15.971 min，上述各峰分離度良好。見(jiàn)圖1。

圖1 七氟烷分離度試驗(yàn)色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察

取兩個(gè)5 mL量瓶，加入部分1，2-二氯乙烷溶劑，精密稱量七氟烷對(duì)照品（批號(hào)：090228）和二甲氧基甲烷各50 μL分別置于量瓶中，用1，2-二氯乙烷溶劑溶解并稀釋至刻度，得對(duì)照品儲(chǔ)備液和內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液100、150、250、400、500 μL，分別置 10 mL 量瓶中（先加入1，2-二氯乙烷適量），各加入內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液 250 μL 并用 1，2-二氯乙烷溶劑稀釋至刻度，搖勻，對(duì)照品溶液濃度分別為0.10、0.15、0.25、0.40、0.50 μL/mL；內(nèi)標(biāo)溶液濃度為 0.25 μL/mL。

用上述色譜條件對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，各進(jìn)樣2 μL，記錄樣品與內(nèi)標(biāo)峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)，樣品和內(nèi)標(biāo)物峰面積比為縱坐標(biāo)，回歸方程：Y=4.269X-0.041 3，r=0.999 6。

2.4 最低檢測(cè)限

取線性范圍測(cè)定項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，稀釋至0.002 5 μL/mL，進(jìn)樣2 μL，經(jīng)測(cè)定在選定的色譜條件下，七氟烷的最低檢測(cè)限為 7.96 ng（S/N=3）。

2.5 定量限

取線性范圍測(cè)定項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，稀釋至0.012 5 μL/mL，進(jìn)樣2 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，七氟烷與二甲氧基甲烷的峰面積比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為5.41%。

2.6 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

精密吸取含對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物0.25 μL/mL的溶液 2 μL注入氣相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，七氟烷與二甲氧基甲烷的峰面積比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.88%。

2.7 校正因子測(cè)定

取1，2-二氯乙烷適量，置于兩個(gè)5 mL量瓶中，精密稱定，用微量注射器分別加入對(duì)照品和二甲氧基甲烷（內(nèi)標(biāo)物）各 50 μL，精密稱定，用 1，2-二氯乙烷稀釋至刻度，搖勻，用微量注射器各取250 μL置同一10 mL量瓶中，用1，2-二氯乙烷定容，搖勻。量取2 μL，注入氣相色譜儀，平行進(jìn)樣4次，平均校正因子為0.56，七氟烷與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為3.1%。

圖2 七氟烷有關(guān)物質(zhì)測(cè)定色譜圖

表1 樣品的含量及有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果

2.8 有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定

精密量取七氟烷三批樣品（090301、090302、090303）50 mL于不同量瓶中，精密量取內(nèi)標(biāo)溶液12.5 μL分別加入樣品中，稱重，得樣品測(cè)定溶液（含內(nèi)標(biāo)0.25 μL/mL），將各批樣品溶液依上述色譜條件測(cè)定，每批平行測(cè)定2次，記錄色譜圖。見(jiàn)圖2。根據(jù)峰面積按下面公式計(jì)算雜質(zhì)含量。色譜圖中如有雜質(zhì)峰，主成分按自身對(duì)照法計(jì)算，各雜質(zhì)峰面積總和與內(nèi)標(biāo)的峰面積比，不得大于對(duì)照液主峰與內(nèi)標(biāo)的峰面積比（1%）。另一已知雜質(zhì)己氟異丙基甲基醚含量極小，在各批樣品中峰面積均小于1，樣品中所有雜質(zhì)含量均不大于0.0050%。根據(jù)上述方法測(cè)定3批樣品的有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可見(jiàn)，各樣品中未知雜質(zhì)總含量均小于0.005 0%，單個(gè)最大揮發(fā)性雜質(zhì)含量小于0.002 5%，含已知雜質(zhì)戊氟異丙基氟甲醚小于0.002 5%，己氟異丙基氟甲醚含量小于0.005 0%。以上各批樣品含量測(cè)定符合要求。

3 討論

3.1 程序升溫條件

分別考察了起始溫度為 40、45、60、100℃和流速 2、4、8、10 mL/min對(duì)保留時(shí)間的影響，發(fā)現(xiàn)起始溫度對(duì)保留時(shí)間的影響小于流速對(duì)其的影響，流速越慢，分離效果越好，在考慮保留時(shí)間和分離效果兩者后，選用流速4 mL/min，起始溫度45℃；并嘗試不同的升溫程序以保證主峰與各個(gè)雜質(zhì)峰的分離效果，得出最優(yōu)條件。

3.2 色譜柱的選擇

分別考察了 DB-624（30 m）和 DM-624（75 m）的毛細(xì)管柱，通過(guò)改變流速和升溫速度，比較各條件下的分離度，DB-624不能分離主峰前的兩個(gè)已知雜質(zhì)峰，而DM-624分離度較好，主峰保留時(shí)間為14.4 min，內(nèi)標(biāo)峰為15.9 min，戊氟異丙基氟甲醚為13.4 min，己氟異丙基氟甲醚為13.8 min，其他未知雜質(zhì)峰分別為 12.8、13.2、13.6、15.1、15.5、16.9、18.1、18.4、19.5、20.6 min。

3.3 雜質(zhì)的分離

戊氟異丙基氟甲醚雖未被證實(shí)對(duì)人體有毒性，但其已被實(shí)驗(yàn)證實(shí)可使大鼠腎中毒，使其近曲小管單個(gè)細(xì)胞壞死并擴(kuò)散。另?yè)?jù)報(bào)道，戊氟異丙基氟甲醚作用于非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物體內(nèi)8 h，會(huì)使其腎小管單個(gè)細(xì)胞退化及壞死，故實(shí)現(xiàn)戊氟異丙基氟甲醚與七氟烷主峰的分離并控制其含量是很有必要的；而己氟異丙基甲基醚對(duì)人體的毒性盡管未見(jiàn)報(bào)道，但作為已知雜質(zhì)，本方法對(duì)其進(jìn)行了很好的分離。

[1]姬梅，于布為.七氟烷用于承認(rèn)麻醉誘導(dǎo)的臨床觀察[J].上海醫(yī)學(xué)，2007，12（30）：11.

[2]Hut BA，Mazze RI，Cook TL，et al.Thremorcgulatory defect in rats during anesthesia[J].Anesth，1977，（56）：9.

[3]Bernard MR，John CL.The method of inducing anesthesia by administering an anesthetically effectiveamountofthe compound fluoromethyl1，1，1，3，3，3-hexafluoro-2-propylether[P].US：3，683.

[4]Bernard M.Regan，John C.Longstreet Fluorinated ether[P].US：689.