薄荷油對小鼠肝腎損傷的動物實驗研究

李 枝，李 進，李世開，和海燕，師 濤，張 慶，陳海濱

（1.大理學院臨床醫學院，云南大理 671000；2.大理學院基礎醫學院，云南大理 671000）

薄荷在中醫藥中有較好的功效〔1〕，其中含有豐富芳香的薄荷油〔2〕，傳統認為無毒性而廣泛用于牙膏等生活日用品之輔料，民間多以調味和菜食而廣泛大劑量食用，近期卻有大量食用薄荷油中毒的報道。為了掌握其對肝腎等重要器官的毒害作用，本實驗通過不同劑量對分組小白鼠實施灌胃，測定致死量并解剖觀察肝、腎器官的病理形態改變，以確定薄荷油的毒性及其量效關系，對指導合理量食用、醫藥的劑量使用具有重要意義。

1 材料與方法

1.1實驗藥物100%薄荷油，由實驗室制取。

1.2儀器電子天平，顯微鏡，全能型脫水機，解剖器械。

1.3動物昆明小白鼠，同齡雌雄各半，由昆明醫學院實驗動物中心提供，（20±2）g。

1.4方法

1.4.1 薄荷油的提取

1.4.1.1 原理 薄荷揮發油與水不互溶。當受熱后，二者蒸氣壓的總和與大氣壓相同時，混合液即開始沸騰，繼續加熱則揮發油可隨水蒸氣蒸餾出來，冷卻靜置，即可分離〔3〕。

1.4.1.2 提取方法 水蒸氣蒸餾法〔4〕提取，稱取粉碎好的薄荷200 g，置揮發油提取器中，加水1 000 mL，按《中國藥典》2000版附錄XD揮發油測定法提取揮發油。蒸餾6 h，收集薄荷油。靜置分層，用無水硫酸鈉脫水，濾紙過濾。

1.4.2 灌胃和解剖觀察 為了能達到藥物在有效時間范圍內造成器官損傷的效果，進行了試探性實驗測定致死最小量。給藥劑量為1.00 mL/10 g的小鼠均在給藥半小時后死亡。當給藥劑量降至0.05 mL/10 g時，小鼠給藥后，立即出現呼吸加快后減慢到呼吸停止，4只小鼠大約30 min后陸續死亡，最短死亡時間為給藥后42 min。當給藥量降至0.005 mL/10 g時，小鼠癥狀減輕，但仍有部分小鼠給藥30 min后死亡。死亡小白鼠均進行解剖，制片并鏡下觀察。

按照試探性實驗測定結果設計急性實驗，如下：取小白鼠50只，體重相近（20±2）g，雌雄各半，隨機分為10組，其中1組空白對照組未灌胃，其他9組用100%薄荷油的不同劑量灌胃，觀察并記錄一般狀況和死亡情況等臨床過程，24 h后全部處死，解剖后取肝、腎作常規HE石蠟切片染色，光學顯微鏡下觀察其組織形態學變化。不同給藥劑量與切片檢查情況對照。見表1。

表1 小鼠1次灌胃不同劑量薄荷油對肝、腎組織形態的病理分級

2 結果

2.1不同劑量灌胃后小白鼠臨床改變按實驗設計不同劑量灌胃小白鼠，觀察24 h。小劑量組（0.001～0.002 5 mL/10 g）小鼠給藥30 min后均出現驚厥，部分小鼠出現步履蹣跚，行走易向一側摔倒，隨著時間推移，癥狀緩解，部分小鼠死亡。中劑量組（0.003～0.003 5 mL/10 g）小鼠給藥30 min后明顯驚厥，出現步履蹣跚，行走易向一側摔倒，行動遲緩，氣息微弱，部分可見抱腹現象，大多小鼠的上述癥狀隨著時間推移在1～2 h后得到緩解。劑量較大組（0.004 mL/10 g～0.005 mL/10 g） 小鼠大多30 min后出現異常反應且陸續死亡。各劑量組均可見出現異常反應的小鼠逐漸恢復正常。死亡小鼠解剖后肉眼檢查可見肝臟有不同程度的顏色變深、表面粗糙等，腎臟無明顯變化。具體死亡情況：空白組小鼠死亡數為0；薄荷油各組按劑量從低到高的死亡數依次為：0、1、3、3、2、4、3、5、5、5。第5、8、9、10組小鼠在給藥后分別立即死亡2、1、4、5只，剩余實驗組小鼠部分陸續死亡，其余小鼠24 h之后仍活著。

2.2不同劑量灌胃后小白鼠病理形體改變

2.2.1 不同劑量灌胃后小白鼠肝臟病理形體改變光鏡下觀察，空白組及低劑量第2組肝小葉結構清晰完好，肝細胞未見明顯變性、壞死及肝血竇改變。低劑量組（3、4、5組）：肝小葉結構尚正常，肝細胞可見水樣變性，細胞體積增大，胞漿變得透亮、淡染。中等劑量組（6、7組）：可見肝細胞水樣變性，細胞體積增大，胞漿變得透亮、淡染，偶見脂肪變性細胞，肝索不明顯，肝小葉結構不清，肝細胞排列混亂。高劑量組（8、9、10組）肝組織有顯著性損傷：肝小葉結構不清偶見壞死灶及炎性浸潤，大片肝細胞呈現脂肪變性，胞漿內圓形脂肪滴擠壓細胞核變形趨居一側，可見部分肝細胞氣球樣變及核溶解現象。見圖1～2。

圖1 肝細胞水腫（HE染色，10×40倍）

圖2 肝細胞脂肪變性（HE染色，10×10倍）

2.2.2 不同劑量灌胃后小白鼠腎臟病理形體改變光鏡下觀察，空白組及低劑量第2組腎組織切片顯示：腎小球結構完整，未見腎小管上皮細胞水腫等病理改變，管腔輪廓清晰。低劑量組（3、4、5組）：腎組織未見異常；中等劑量組（6、7組）：腎小管上皮細胞見輕度水腫及破壞，輪廓不清，相互融合。高劑量組（8、9、10組）：腎組織出現腎小管上皮細胞明顯腫脹，細胞體積明顯增大，胞漿淡染，可見絲狀淡染物質。部分腎小管管腔輪廓不清，相對變窄，腔內偶見脫落的上皮細胞及細胞核溶解現象。見圖3。

圖3 腎小管上皮細胞水舯（HE染色，10×40）

3 討論

薄荷在生活中應用廣泛，其價值受到青睞，對薄荷油的研究也日益增多〔5〕，但對其毒性研究較少，尤其腎毒性的研究甚少。Ilene B.Anderson等〔6〕報道過薄荷油中毒的病例，其中毒主要表現在中樞神經系統、肝和腎方面。陳光亮等〔7〕已在小鼠薄荷油急性毒性實驗中證實：薄荷油有中樞神經系統和肝毒性。對肝臟的損傷多有報道〔8〕，但對腎臟的損傷研究較少，為進一步了解其毒性作用，彌補該藥對腎臟損傷的空缺，進行本次研究，從而指導薄荷油的安全使用。

本實驗對小白鼠灌胃較大劑量（大于0.004 mL/10 g）30 min后，小鼠出現步履蹣跚，行動遲緩，易向一側摔倒，呼吸急促并有部分死亡。隨著劑量變大，小鼠死亡速率和死亡率呈增大趨勢。小劑量組某些小鼠亦可在給藥30 min后出現死亡，可能是個體對薄荷油的敏感性存在差異，亦可能是在灌胃過程中人為因素導致的。另外，有資料表明內服少量薄荷油有中樞興奮作用，但超過一定量時對中樞神經起抑制作用〔9〕。灌胃小劑量薄荷油即可使小鼠30 min后出現驚厥，表現為中樞神經興奮。30 min后出現步履蹣跚，行動遲緩，易向一側摔倒，類似醉酒狀態等異常反應，可能是隨著時間的延長，血藥濃度升高到一定程度后，薄荷油發揮中樞抑制作用的結果。顯微鏡下觀察，不同劑量薄荷油對小鼠肝臟和腎臟的病理損傷程度不同，采用灌胃方法給予小白鼠大劑量薄荷油時，肝細胞出現嚴重水腫、脂肪變性和壞死等改變，小劑量時變化不明顯。腎損傷均不明顯，大劑量時可見腎小管細胞水腫。出現上述病理改變的原因可能是薄荷油能夠引起肝、腎細胞內某些代謝酶變性〔10〕，或是代謝后產生了能夠損傷肝、腎細胞的毒性物質，具體毒理機制還有待進一步研究。大量資料表明，人體低劑量服用薄荷油并無毒性作用，日常生活及臨床應用中只要合理控制劑量并不會產生明顯的急性中毒，從而有效、安全地利用其藥用價值。一次大劑量服用本品可產生一系列的毒性作用，尤以中樞神經系統和肝毒性顯著，并對腎臟有輕度毒性，所以在使用過程中要謹慎。對薄荷油毒性作用的掌握有利于指導合理量食用及醫藥劑量的使用。

〔1〕江蘇新醫學院.中藥大辭典：下冊〔M〕.上海：上海科學技術出版社，1977：2648.

〔2〕劉穎.薄荷化學成分的研究〔J〕.中國中藥雜志，2005，14（30）：1086-1088.

〔3〕谷珉珉，賈韻儀，姚子鵬.有機化學實驗〔M〕.上海：復旦大學出版社，1991：198-200.

〔4〕王立斌，馬永純，班偉.水蒸氣蒸餾法提取薄荷中揮發油〔J〕.通化師范學院學報，2005，26（6）：56-57.

〔5〕徐健飛.文獻計量分析揭示我國薄荷研究現狀及發展趨勢〔J〕.桂林師范高等?？茖W校學報，2007，21（3）：146-149.

〔6〕Ilene B Anderson，Water H Mullen，James E Mceker，et al.Pennyroyal toxicity：measurement of toxic metabolite levels in two cases and review of the literature〔J〕.Ann Intern Med，1996，124（8）：726-734.

〔7〕Vo LT，Chan D，King RG.Investigation of the effects of peppermint oil and valerian on rat liver and cultured human liver cells〔J〕.Clin Exp Pharmacol Physiol，2003，30（10）：799-804.

〔8〕陳光亮，姚道云，汪遠金，等.薄荷油藥理作用和急性毒性的研究〔J〕.中藥藥理與臨床，2001，17（1）：10.

〔9〕梁呈元，李維林，張涵慶，等.薄荷化學成分及其藥理作用研究進展〔J〕.中國野生植物資源，2003，22（3）：9-12.

〔10〕劉紅杰，金若敏，張文斌，等.薄荷油致大鼠肝毒性機制研究〔J〕.毒理學雜志，2007，12（18）：2594-2596.