慈姑多糖降血糖的生物活性研究

羅永會，張翠香，徐春萍

（大理學院基礎醫學院，云南大理 671000）

糖尿病是血糖的來源和去向失衡的一種常見的內分泌代謝性疾病。糖尿病發病率高、并發癥多、死亡率高，嚴重威脅人類健康。且病因不明，目前無法根治，治療僅限于控制血糖水平，除注射胰島素外，主要口服磺脲類和雙胍類降血糖藥物，但長期服用這類降糖藥物不良反應顯著〔1-5〕。而天然降糖食品則來源廣泛、高效、毒副作用極小。研究發現，植物多糖具有多種生物活性，具免疫調節功能，能提高機體免疫功能、抗菌、抗病毒、抗腫瘤作用、抗肥胖、降膽固醇、降血脂、降血糖等作用。且大多數植物多糖降血糖作用的途徑廣泛，降糖作用明顯〔6-11〕，在臨床上有廣泛的使用價值〔4〕。

本研究以藥食同源、具有較高的藥用和保健價值的慈姑〔12〕作原料，參考多種植物多糖的提取工藝，通過實驗確定了慈姑多糖水提醇沉的最佳提取條件，制得慈姑粗多糖，經脫蛋白純化后得精制慈姑多糖，并以昆明種小鼠為實驗對象，觀察慈姑多糖對四氧嘧啶性糖尿病模型小鼠血糖的影響，對慈姑多糖降血糖生物活性進行了研究，以期為慈姑的開發研究提供參考。

1 材料

1.1實驗材料石油醚（沸程60℃～90℃）、無水乙醇、氯仿、正丁醇（洛陽市化學試劑廠生產）均為分析純。消渴丸（廣州中一藥業有限公司，批號：p02163），四氧嘧啶（alloxan，ALX），Sigma公司；艾科血糖試紙。

1.2實驗儀器BT-224S型電子天平（德國賽多利斯儀器公司）；HH－4數顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；TDL－4A低速離心機（上海菲恰爾儀器有限公司）；RA－6000旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器）；艾科血糖儀。

1.3實驗動物昆明種小鼠（雌雄各半），體重25 g以上，由大理學院實驗動物科提供。

2 方法

2.1慈姑多糖的制備稱取一定量的慈姑粉，加入10倍體積的石油醚于回流裝置中，60℃回流3 h，過濾，濾渣晾干，用10倍體積80%乙醇80℃回流2 h，以除去單糖，多酚，低聚糖和甙類小分子物質，過濾，濾渣晾干得脫脂慈姑樣品〔13-14〕。按料液比1∶15（g/mL）加入蒸餾水，于70℃水浴浸提3 h，過濾，濾渣重復浸提1次，合并提取液，濃縮至適當體積，加入95%的乙醇，使乙醇終濃度達80%（v/v）。充分攪拌后4℃下靜置24 h，離心收集沉淀。沉淀溶于少量蒸餾水中，用Sevage法（多糖溶液∶氯仿∶正丁醇＝25∶5∶1）脫蛋白，反復進行至無蛋白層后，取水層加入95%的乙醇，使含醇終濃度達80%（v/v），充分攪拌后4℃下靜置24 h，離心收集沉淀，并用無水乙醇、乙醚、丙酮反復洗滌多次，60℃以下低溫干燥至恒重，得慈姑多糖。

2.2動物造模健康昆明種小鼠50只，適應性喂養7 d，隨機選取10只為正常對照組，給予基礎飼料，其余40只禁食不禁水12 h后，以190 mg/kg四氧嘧啶一次性皮下注射（四氧嘧啶溶解于生理鹽水中，現配現用）致實驗性糖尿病。注射后72 h，禁食不禁水12 h，斷尾取血，用血糖儀測空腹血糖值，以血糖值大于11.1 mmol/L的小鼠作為高血糖模型動物〔10-14〕。

2.3分組和給藥糖尿病模型小鼠隨機分成4組，每組10只。分別為糖尿病模型對照組，慈姑多糖高劑量組、低劑量組，陽性對照組。慈姑多糖高劑量組、低劑量組每天分別灌胃（以下簡稱ig）給予慈姑多糖0.75 g/kg、0.375 g/kg，陽性對照組ig0.625 g/kg消渴丸，糖尿病模型對照組及正常對照組則ig等體積生理鹽水（NS），連續給藥14 d，實驗期間動物自由攝食。

2.4檢測指標試驗給藥至第7天、第14天時，禁食不禁水12 h，斷尾取血，用血糖儀測空腹血糖值〔15〕。

2.5統計學處理所有數據用SPSS17.0軟件進行分析，計量資料結果以均數±標準差（±s）表示，P＜0.05表示差異有統計學意義，統計學處理采用t檢驗。

3 實驗結果與分析

慈姑多糖對啶糖尿病模型小鼠血糖的影響。見表1。

表1 慈姑多糖對糖尿病小鼠空腹血糖的影響

由表1可知，與正常組比較，以190 mg/kg注射四氧嘧啶72 h后，各組小鼠空腹血糖變化差異顯著（P＜0.05）即造模成功；給藥后與模型組比較，陽性對照組、慈姑多糖高劑量組、低劑量組血糖明顯降低（P＜0.05）；與0 d（灌藥前）比較，7 d陽性對照組、慈姑多糖高劑量組小鼠空腹血糖變化差異顯著（P＜0.05）；與0 d（灌藥前）比較，14 d陽性對照組、慈姑多糖高劑量組、低劑量組小鼠空腹血糖變化差異顯著（P＜0.05），表明慈姑多糖具有一定的降血糖作用，并且慈姑多糖高劑量組降血糖效果較低劑量組明顯。與7 d比較，14 d正常組、陽性對照組、慈姑多糖高劑量組、低劑量組小鼠空腹血糖變化差異不顯著（P＞0.05），表明慈姑多糖不影響正常小鼠空腹血糖。

四氧嘧啶是一種特異性的B細胞毒劑，可選擇性地損壞多種動物的胰島B細胞，引起實驗性糖尿病。四氧嘧啶糖尿病模型是研究糖尿病治療藥物療效的常用動物模型〔16〕。實驗表明，慈姑多糖能使四氧嘧啶型糖尿病小鼠的血糖降低，但對正常小鼠空腹血糖無明顯影響，提示慈姑多糖可能具有一定的防治糖尿病作用。有關慈姑多糖的降糖機制有待進一步研究。

〔1〕劉華鋼，梁秋云，蒙華琳，等.人掌果多糖提取物降血糖作用的實驗研究〔J〕.中藥材，2010，33（2）：240-242.

〔2〕林文庭，廖冬冬.苔綠藻精對四氧嘧啶致糖尿病小鼠糖脂代謝的影響〔J〕.中國食物與營養，2012，18（4）：69-71.

〔3〕上官新晨，陳木森，蔣艷，等.青錢柳多糖降血糖活性的研究〔J〕.食品科技，2010，35（3）：82-84.

〔4〕劉延吉，劉金鳳，田曉艷，等.軟棗獼猴桃多糖降血糖降血脂活性研究〔J〕.食品與生物技術學報，2012，31（1）：86-89.

〔5〕孫世利，苗愛清，潘順順，等.茶多糖的降血糖作用機理研究進展〔J〕.茶葉通訊，2010，37（1）：34-36.

〔6〕楊靈玲，農紹莊，崔瑾，等.玉米須多糖的降血糖作用研究〔J〕.食品科技，2011，36（3）：152-154.

〔7〕劉月冉，耿越.植物多糖降血糖作用機制研究〔J〕.食品與藥品，2012，14（1）：64-67.

〔8〕文貴輝，李麗立，張彬，等.白術多糖對櫻桃谷鴨血清生化指標的影響〔J〕.家畜生態學報，2011，32（3）：46-49.

〔9〕陳貴元，張翠香，羅永會，等.地參多糖的提取工藝研究〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2011，17（21）：38-40.

〔10〕熊偉，陳貴元，左紹遠.糖脂康多糖的分離與純化研究〔J〕.科技信息，2010（1）：799-800.

〔11〕吳晶，李改茹，常軍民.刺糖中多糖的提取工藝研究〔J〕.中成藥，2011，33（5）：902-904.

〔12〕潘曉軍，劉芬.慈姑的研究進展〔J〕.西北藥學雜志，2006，21（3）：4.

〔13〕趙龍，阮美娟，秦學會，等.蒽酮－硫酸法測定慈姑中多糖的含量〔J〕.食品研究與開發，2009，30（12）：118-121.

〔14〕倪兆林，申元英，白麗，等.云龍黑木耳中多糖的提取與測定〔J〕.大理學院學報，2012，11（3）：31-34.

〔15〕丁雯芳.紅景天多糖對鏈脲佐菌素誘導糖尿病小鼠糖脂代謝的影響〔J〕.廣西中醫學院學報，2011，14（2）：4-5.

〔16〕常慧萍.南瓜多糖的降血糖作用研究〔J〕.安徽農學通報，2007，13（19）：75.