液質聯用法檢測減肥類保健品中非法摻入的化學品

孫曉娟，董 宇，王曉黎

目前，中藥制劑及保健品的需求逐年增加，但不法廠家為了牟取暴利，不惜在中藥制劑及保健品中非法添加化學成分，欺騙、坑害消費者。不法廠家在降壓類中藥制劑中添加氫氯噻嗪等化學藥物7-719RGANICS［1-2］，在抗風濕類藥物中添加醋酸潑尼松、吲哚美辛等化學藥物［3-4］，非法添加現象屢屢出現。在減肥類中藥制劑及保健品的檢測中，國家標準(編號2006004)僅對西布曲明、芬弗拉明、麻黃堿3個非法添加成分進行檢測，并且采用了2個色譜系統，實驗過程相對繁瑣。本實驗利用液質聯用技術，采用一個色譜系統，可快速、準確地同時檢測減肥類中藥制劑中非法摻入的12種具有減肥功效的化學藥物。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LCQ DECA XP MAX離子阱型液質聯用儀，配有電噴霧離子化源(美國 Thermo公司)。

1.2 試藥與試劑 鹽酸麻黃堿、咖啡因、鹽酸安非他酮、鹽酸芬氟拉明、布美他尼、鹽酸西布曲明、鹽酸氟西汀、鹽酸舍曲林對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:171242-200405、171215-200305、100671-200301、10073-0002、173-9301、100624-200401、100513-200401、100702-200401)、鹽酸東布曲明、奧利司他(Sigma公司，批號:D0676、04139)、呋塞米(Dr.Ehrenstorfer GmbH，批號:00820)、酚 酞 (ACROSORGANICS，批 號:A0280446)。甲醇、冰醋酸為色譜純，水為二次重蒸水，其余試劑為分析純。53批樣品為省內監督抽樣的減肥類保健食品:碧生源牌減肥茶，14批次;大印象牌減肥茶，8批次;貝興牌左旋肉堿茶多酚膠囊，4批次;御生堂牌減肥茶，4批次;丹健減肥營養精，11批次;婷采牌減肥靚顏膠囊，2批次;綠之源瘦腩清脂素膠囊，1批次;清牌減肥晶，1批次;金領牌金領減肥沖劑，1批次;經典瘦身咖啡，1批次;人人瘦減肥茶，1批次;興維牌清麗爽減肥茶茶劑，1批次;雙禮牌清通舒軟膠囊，1批次;康氏牌減肥茶(濃縮型)，1批次;梅山牌減肥神茶，1批次;時尚麗人堂清脂三天瘦，1批次。

2 方法與結果

2.1 色譜及質譜條件 色譜柱:迪馬Diamonsil C18柱(150mm × 4.6mm，5μm);流動相:甲醇-20mmol/L醋酸銨(0.1%冰醋酸);梯度洗脫程序見表1;流速:0.5mL/min。

離子源:電噴霧離子化(ESI)源;檢測方式:正負離子檢測方式;離子源噴射電壓:5.0 kV;毛細管溫度:300℃;毛細管電壓:15 V;鞘氣流速:1.05 L/min;輔助氣流速:0.15 L/min;掃描方式:一級全掃描方式，二級全掃描方式。

表1 梯度洗脫程序(%)

表2 化合物準分子離子及特征碎片離子

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取鹽酸麻黃堿、咖啡因、鹽酸東布曲明、鹽酸安非他酮、呋塞米、鹽酸芬氟拉明、布美他尼、酚酞、鹽酸西布曲明、鹽酸氟西汀、鹽酸舍曲林、奧利司他對照品適量，以甲醇溶解并稀釋制成每種化合物濃度均為10μg/mL的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 若供試品為片劑，取數片，研細;若供試品為膠囊劑，取數粒，傾取內容物，研細，稱取1次口服劑量;若供試品為口服液，量取1次口服劑量，分別置100mL量瓶中，加甲醇適量，超聲提取20min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻。濾過(必要時進行適當的稀釋)，作為供試品溶液。

2.2.3 空白溶液的制備 取不含12種目標化合物的中藥制劑，按“2.2.2”項下操作，配制成空白溶液。

2.2.4 空白加樣溶液的制備 取不含12種目標化合物的中藥制劑，按常規口服劑量加入對照品，配制成模擬樣品，按“2.2.2”項下操作，配制成空白加樣溶液。

2.3 測定方法 分別吸取對照品溶液、供試品溶液、空白溶液、空白加樣溶液各10μL，注入液質聯用儀，記錄色譜圖和質譜圖。

2.4 對照品溶液分析結果 采用上述色譜系統對對照品溶液進行LC-MS-MS分析，12種目標化合物的保留時間、準分子離子、特征碎片離子見表2，色譜圖見圖 1、圖2。

圖1 對照品溶液(正離子檢測)選擇離子監測色譜圖

圖2 對照品溶液(負離子檢測)選擇離子監測色譜圖

2.5 檢測限 以信噪比為3∶1時的對照品進樣量作為檢測限，各目標化合物的檢測限見表3。

表3 目標化合物檢測限

2.6 耐用性 考察不同牌號的色譜柱對12種目標化合物的分離效果，色譜柱分別為Kromasil C18柱(250mm ×4.6mm，5μm)和 Waters C18柱(150mm ×3.9mm，5μm)。結果表明，耐用性良好。

2.7 供試品溶液測定結果 對空白溶液、空白加樣溶液及53批供試品溶液進行分析，結果表明，空白溶液中的中藥成分不干擾測定(見圖3)?？瞻准訕尤芤褐袡z測到相應的目標化合物，質譜響應良好。53批供試品溶液中，有16批檢測到保留時間與鹽酸西布曲明對照品相同的化合物，樣品質譜信息見圖4;有3批檢測到保留時間與酚酞對照品相同的化合物，樣品質譜信息見圖5。

圖3 空白溶液色譜圖

圖4 供試品溶液中鹽酸西布曲明質譜圖

圖5 供試品溶液中酚酞質譜圖

3 討論

由于在按藥品標準進行的常規檢驗中無法檢出添加的化學藥物，所以，在中藥制劑及保健品中擅自添加化學成分具有極大的隱蔽性和危害性。本方法可用于檢測目前臨床上最為常用的12種具有減肥作用的化合物，比文獻［5-7］中檢測的目標化合物更為全面。

通過采用甲醇、乙腈、氯仿等不同提取溶劑對模擬樣品進行提取，最終確定采用甲醇超聲提取法對片劑、膠囊劑及口服溶液進行預處理，制備方法簡便，且提取液可直接用于液質聯用儀分析。提取時間考察將陽性樣品分別超聲提取5、10、15、20、25min，結果表明，20min時已提取完全。

在對53批樣品的檢測中，筆者在11批樣品(減肥茶)中檢測含有咖啡因，但通過對樣品工藝及處方的研究發現，茶類及含有茶多酚的樣品均存在天然咖啡因成分，不存在非法添加現象，因此，此類樣品可不檢測咖啡因。

綜上所述，本文所建立的方法操作簡便、干擾少、靈敏度高，檢測結果更準確。

［1］劉吉金，楊敏，李軍，等.HPLC同時檢測保健品及中成藥中非法添加9種抗高血壓化學藥物的研究［J］.中國現代應用藥學雜志，2008，25(8):717-719.

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