HPLC測(cè)定蒙成藥塔日努蘇木朱爾散劑中大黃酚的含量

周曉明 王曉琴 李 波

(1.內(nèi)蒙古呼倫貝爾市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼倫貝爾 021008;2.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

塔日努蘇木朱爾散劑是由波葉大黃、狼毒、白礬3味藥組成的蒙藥復(fù)方制劑，具有清熱燥濕、殺蟲止癢的功效，用于治療皮炎、牛皮癬、濕疹、皮膚瘙癢。其中波葉大黃為方中主藥。波葉大黃(Rheum undulatum)，又名山大黃，為蓼科大黃屬藥用植物，屬呼倫貝爾市地產(chǎn)蒙藥材，有破積滯，行瘀血的作用，可用于癰腫疔毒，跌打瘀痛，口瘡糜爛等癥[1]。其根及根莖主要含有以大黃酚和大黃素為苷元的結(jié)合型蒽醌和游離型蒽醌;其中，游離型蒽醌中主要為大黃酚和大黃素甲醚[2]。為了保證產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，本文選擇大黃酚作為質(zhì)量控制指標(biāo)，參照“中國(guó)藥典”2010年版一部“大黃”項(xiàng)下的含量測(cè)定方法[3]，采用高效液相色譜法建立了大黃酚的含量測(cè)定方法。并經(jīng)過(guò)方法學(xué)考察及陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，表明該方法重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，方中其它組分對(duì)大黃酚的測(cè)定無(wú)干擾，可作為該復(fù)方制劑的質(zhì)控方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:島津LC－2010A HT高效液相色譜儀;CBM－20A型控制器;SPD－10Avp型檢測(cè)器，LC solution色譜工作站。Sartorius Bp121S(0.1mg)、Bp211D(0.01mg)電子天平。

1.2 試劑與試藥:大黃酚對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)110796－2003120);甲醇為色譜純;水為高純水，其它試劑均為分析純。蒙成藥塔日努蘇木朱爾散劑由呼倫貝爾市新巴爾虎右旗蒙醫(yī)醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:Diamonsil RP－C18色譜柱(250× 4.6mm，5μm);流動(dòng)相為甲醇 －0.1%磷酸(85﹕ 15);柱溫30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)254nm;流速1mL·min－1;進(jìn)樣量10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取大黃酚對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含32.16μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品粉末約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5mL，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10mL，超聲處理2min，再加三氯甲烷10mL，加熱回流1h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10mL，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性空白對(duì)照溶液的制備:按處方比例并以相同工藝制備不含波葉大黃的空白樣品，按供試品溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液。

圖1 HPLC色譜圖

2.3 空白陰性實(shí)驗(yàn):分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性空白對(duì)照溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果陰性空白對(duì)照溶液色譜圖中在與大黃酚對(duì)照品及供試品色譜圖相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其它組分對(duì)大黃酚的測(cè)定無(wú)干擾，在此條件下，大黃酚和相鄰成分完全分離。

2.4 線性關(guān)系考察:精密稱取大黃酚對(duì)照品約10mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度;精密量取0.5、2、3、4、5mL置25mL量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，各取10μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果大黃酚在 0.00804～0.0804μg·mL－1濃度范圍內(nèi)與封面積呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為Y=518724X －1711.3，r=0.9995。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn):取樣品含量測(cè)定項(xiàng)下制備的供試品溶液1份，分別于0、4、8、12、16、24h 進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果大黃酚峰面積基本不變，RSD為0.27%(n=6)。試驗(yàn)結(jié)果表明，大黃酚在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，RSD為0.4%。試驗(yàn)結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批號(hào)樣品6份，約1.0g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制得樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件分析，測(cè)得平均含量為1.457mg·g－1，RSD為1.8%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn):精密稱取已知大黃酚含量(含量為1.457mg·g－1)的樣品 9份，每份約 0.6g，分別精密加入濃度為0.143m·mL－1的大黃酚對(duì)照品甲醇溶液5mL、10mL、15mL，制成低、中、高3種濃度的溶液各3份，按供試品溶液的制備方法制得樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件分析，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為100.4%，RSD%為1.96%。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品的含量測(cè)定:取本品3個(gè)批號(hào)共6份，各約1.2g，按供試品溶液的制備方法處理，分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照溶液各10μL注入液相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算含量。三批樣品的測(cè)定結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇:取大黃酚對(duì)照品溶液，于紫外－可見分光光度計(jì)上，自190nm－600nm做光譜掃描，結(jié)果大黃酚在255.5nm和428.5nm處有最大吸收，在428.5nm波長(zhǎng)下，基線不穩(wěn)，結(jié)合“中國(guó)藥典”一部大黃酚含量測(cè)定項(xiàng)下的測(cè)定方法，選擇254nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

表2 樣品中大黃酚的含量測(cè)定結(jié)果

3.2 提取條件的選擇:參照《“中國(guó)藥典”2010年版一部“大黃”項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，考慮到大黃酚易溶于三氯甲烷等低極性有機(jī)溶劑，故選擇用甲醇加熱回流提取，然后用三氯甲烷萃取。實(shí)驗(yàn)中考察了提取3次、4次、5次、6次等不同提取次數(shù)對(duì)提取效率的影響，結(jié)果表明提取4次后供試品中大黃酚的含量最高，故將提取次數(shù)定為4次。

本實(shí)驗(yàn)精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有較好的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性，可作為該制劑的含量測(cè)定方法。

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì).中華本草[M]，第六卷.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999:2705.

[2]肖培根.大黃屬的植物親緣關(guān)系、化學(xué)成分與療效間聯(lián)系性的初步研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1980，(1):33－39.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010版(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:22.