藥效學優化蒙藥“協日嘎－4”噴霧劑的提取方法

郭 建 張 濤 宋宏春

(1.內蒙古自治區人民醫院，內蒙古 呼和浩特 010050;2.內蒙古醫學院2006級研究生，內蒙古 呼和浩特 010050)

“協日嘎 －4”是蒙醫驗方[1，2]，該處方是由姜黃、黃柏、梔子和蒺藜(微炒)4味藥材組成，原劑型為洗劑，臨床用于治療真菌性皮膚病和細菌性皮膚病。擬將其劑型改革為現代劑型噴霧劑，以方便患者使用。

文獻資料報道“協日嘎－4”4味藥材中均含有抗真菌、細菌、抗炎和修復創傷的化合物。姜黃含有姜黃類物質，為二苯基庚烴類:包括姜黃素(含量為1.8% ～5.4%)、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素、二氫姜黃素和揮發油等[3，4]。其藥理作用有抗病原微生物作用;姜黃的醇提取液、姜黃素和揮發油具有抗病原微生物、抗病毒的作用，其中對黑曲霉的抑制作用最強;姜黃乙醇提取物、姜黃素及其揮發油有抗革蘭陽性菌作用，對金黃色葡萄球菌、卡他球菌有抑制作用。姜黃乙醇提取物、姜黃素及其揮發油還對鼠瘧原蟲有強抑制作用。姜黃揮發油洗劑具有抗石膏樣毛癬菌感染作用[5，6]。黃柏含有生物堿類:黃柏樹皮含小檗堿，藥根堿，木蘭堿，黃柏堿等[7]。其藥理作用有抗病原微生物作用:黃柏水煎劑、醇浸劑在體外對大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌等多種細菌有抑制作用;對多種皮膚真菌有不同程度的抑制作用;對陰道滴蟲也有抑制作用。黃柏水煎劑有較強的殺鉤端螺旋體的作用。黃柏對人結核桿菌、乙型肝炎表面抗原有抑制作用[8，9，10]。梔子含有環烯醚萜(甙)類:包括梔子甙即京尼平甙、羥異梔子甙和黃酮類化合物。藥理作用有抗病原微生物作用:體外實驗證明梔子浸液對痢疾桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌等有抑制作用。對部分真菌也有抑制作用。梔子浸液在體外可以殺死血吸蟲的成蟲及鉤端螺旋體等。抗病原微生物作用[11，12，13]。蒺藜含有生物堿:哈爾滿堿、哈爾明堿、黃酮、蒽醌類等。藥理作用有抗病原微生物作用:蒺藜果實的水提物具有抗炎作用，能抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的生長。蒺藜對甲型流感病毒57－4株具有較強的抑制作用。蒺藜只對少數的細菌和真菌有抑制作用效果，具有較弱的抑菌作用[14，15，16]。根據上述文獻資料可知“協日嘎 －4”處方中藥材的水煎液，醇提取液、揮發油提取液均有抗病原微生物作用。“協日嘎－4”噴霧劑應該選擇怎樣的提取工藝較為合理呢?本課題將依據循證醫學的方法通過藥效學優化蒙藥協日嘎－4噴霧劑的提取工藝，為“蒙藥協日嘎－4噴霧劑的制備工藝”提供科學的依據。

1 實驗材料

1.1 藥材:姜黃、黃柏、梔子、蒺藜(購于內蒙古惠豐藥業)。

1.2 菌種

1.2.1 實驗用醫學真菌:包括白色念珠菌(C.albicams，編號為ATCC11006)、紅色毛癬菌(T.rubrum)、石膏樣小孢子菌(M.grpseum)、羊毛樣小孢子菌 (M.lanosum)、犬小孢子菌(Microsporum Canis)。(白色念珠菌為內蒙古醫學院微生物實驗室提供的標準菌株;紅色毛癬菌、石膏樣小孢子菌、羊毛樣小孢子菌及犬小孢子菌為內蒙古醫學院第一附屬醫院皮膚科提供的臨床菌株)。

1.2.2 實驗用醫學細菌:包括金黃色葡萄球菌(S.aureas，細菌號為26003)、炭疽桿菌(Bacillus?anthraci，細菌號為63601)、白色葡萄球菌(Staphylococcus，細菌號為26101)、變形桿菌(P.mirabilis，細菌號為49001)、綠膿桿菌(Pseudomonas，細菌號為 10102)、大腸桿菌 (E.coli，細菌號為44001)(實驗用細菌為內蒙古醫學院微生物實驗室提供的標準菌株)。

3 培養基

1.3.1 淺部真菌及白色念珠菌選用沙氏麥芽糖蛋白胨瓊脂基，通稱沙堡弱培養基(Sabouraud dextrose agar，SDA)，其成分為麥芽糖100g，蛋白胨25g，瓊脂 50g，蒸餾水2500ml。

1.3.2 細菌培養基成分為營養瓊脂20g，蒸餾水400ml。

1.3.3 制法:將上述不同培養基的成分各自混合后，121℃，15分鐘滅菌后備用。

1.4 藥物:實驗用蒙藥為內蒙古醫學院藥學院藥劑實驗室制備的協日嘎－4醇提取液、協日嘎－4水提取液、協日嘎－4混合提取液、協日嘎－4揮發油提取液;青霉素G陽標為標準藥敏紙片，單位10mg，產地為杭州天和微生物試劑有限公司，批號為20080208，編號為Co23。

1.5 實驗儀器:ESJ200－4型電子天平，沈陽龍騰電子有限公司;YXQG01型電熱式蒸汽消毒器，隔水式電熱恒溫培養箱;試管、平皿、酒精燈、無菌白金耳、接種環、、游標卡尺。

2 實驗方法與結果

2.1 協日嘎－4提取液的制備:協日嘎－4水提液的制備:按處方量稱取藥材，即姜黃100g、蒺藜100g、梔子80g、黃柏60g，加入處方量8倍量的水，提取3次，每次3小時，合并水提液，濃縮至終濃度為0.4690g/ml(以生藥材計)，濃縮液備用。

協日嘎－4醇提液的制備:按處方配比，取上述四味藥，加入8倍量60%乙醇，提取3次，每次3小時，合并醇提液，濃縮，回收乙醇，使藥液終濃度為0.4690g/ml(以生藥材計)。

協日嘎－4混和提取液的制備:按處方配比，取上述四味藥，加入8倍量60%乙醇，提取3次，每次3小時，合并醇提液，濃縮，在藥材中再加入處方量8倍量的水，提取3次，每次3小時，合并水提液，濃縮，將二者濃縮液合并，調整使其終濃度為0.4690g/ml(以生藥材計)。

協日嘎－4揮發油提取液的制備:按處方配比稱取藥材，置揮發油提取器中，加入處方量8倍量的水，提取8小時，在水中加入少量的吐溫－80，使揮發油溶解，濃度調整為0.4690g/ml(以生藥材計)。

2.2 協日嘎－4提取液抑制真菌實驗方法及結果:采用沙堡弱(SDA)培養基，分別制成含協日嘎－4提取液30%(0.1407g/ml)、20%(0.0938g/ml)、10%(0.0469g/ml)、5%(0.02345g/ml)的培養基，將白色念珠菌、羊毛樣小孢子菌、紅色毛癬菌、犬小孢子菌、石膏樣小孢子菌的菌種分別接種在含不同濃度的藥物培養管內及空白對照組，置于30℃溫箱中，2周后觀察，結果見表1。

表1 不同協日嘎－4提取液對真菌的抑制作用

由表1可知，協日嘎－4揮發油提取液各濃度組對真菌都無抑制作用;水提液只有30%組(0.1407g/ml)對真菌有抑制作用，其余濃度組都無抑制作用;醇提液20%組(0.0938g/ml)、30%組(0.1407g/ml)對真菌有抑制作用，其他濃度組無抑制作用;而混和提取液10%組(0.0469g/ml)、20%組(0.0938g/ml)、30% 組(0.1407g/ml)對真菌都有抑制作用，只有5%組(0.02345g/ml)無抑制作用。實驗結果說明協日嘎－4揮發油提取液對真菌無抑制作用，水提液及醇提液對真菌均有一定的抑制作用，混合提取液抑制真菌的效果最好。

2.3 協日嘎－4提取液抑制細菌實驗方法及結果:采用營養瓊脂培養基，分別采用營養瓊脂培養基，每個平皿放置兩個直徑為5mm的滅菌不銹鋼小管，管內分別加入200ul(C=0.4690g/ml)的提取液和空白對照液，平皿內分別放入青霉素G(10ug)標準藥敏紙片，置于37℃恒溫培養箱中，24小時觀察藥物對細菌的作用。實驗結果見表2。

表2 不同協日嘎－4提取液對細菌的抑制作用

由表2可知協日嘎－4揮發油提取液對各細菌都無抑制作用;水提液、醇提液及混合提取液對細菌都具有一定的抑制作用，且抑制作用相近。

3 結論

綜合真菌抑制試驗和細菌抑制試驗結果確定，協日嘎－4噴霧劑的提取方法應該選擇醇提加水提的混合提取方法，而不選擇揮發油提取部分。

4 討論

循證醫學是近十余年來在臨床醫學實踐中發展起來的一門新興臨床學科。其核心思想就是重視證據。近年來，有關在民族醫藥領域進行循證醫學研究的討論日益引起人們的重視。許多民族醫藥界人士認為，循證醫學方法運用于民族醫中藥的研究，有助于促進民族醫藥的現代化，使民族醫藥的研究能夠得到科學研究的證據支持。所以循證研究是民族醫藥前進的必由之路。本課題通過循證研究為“協日嘎－4”新劑型的開發提供科學的實驗依據，使蒙藥的應用更全面更廣泛，為民族醫藥的繁榮和發展做出貢獻。

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