頂空氣相色譜法測定醋酸地塞米松原料藥中殘留溶劑的含量

陳麗萍，丁邦東，譚志剛，吳 健

(1.揚州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，揚州 225127； 2.江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)集團(tuán)，揚州 225009)

醋酸地塞米松(Dexamethasoni Aeetas)是一種能影響物質(zhì)代謝、升高血糖的腎上腺皮質(zhì)激素藥。在產(chǎn)品生產(chǎn)過程中，需要用到甲醇、丙酮、醋酸乙酯、吡啶4種有機溶劑，這些溶劑會對人體健康造成危害，在生產(chǎn)過程中完全去除比較困難，但必須確保產(chǎn)品中的這些溶劑殘留量是人體可以接受的，《中國藥典》和 ICH對各類溶劑殘留量有嚴(yán)格的規(guī)定[1，2]。

本實驗首次建立了毛細(xì)管柱氣相色譜法，測定測定工藝中用到的4種溶劑，并進(jìn)行了方法學(xué)研究。結(jié)果顯示，該方法準(zhǔn)確，靈敏度高，可用于醋酸地塞米松中殘留溶劑的檢測。

1 儀器與試劑

6890N氣相色譜儀(Agilent公司)，7694E頂空進(jìn)樣器(Agilent公司)，N2000工作站(浙江大學(xué))。甲醇、丙酮、醋酸乙酯、吡啶(色譜純)，均購買于國藥試劑集團(tuán)。醋酸地塞米松(江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)集團(tuán)提供，批號201002001、201002002、201002003)，水為雙蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 DB-624毛細(xì)管色譜柱(SN US4652334H)(30 m×0.53 mm×3.0 μm)；程序升溫，初始溫度為50 ℃，保持2 min后，以 10 ℃/min的速率升溫至 160 ℃，保持 5 min；載氣 N2，流速3.5 ml/min。7694 E頂空瓶進(jìn)樣器， 進(jìn)樣體積1 μl，進(jìn)樣口溫度為 180 ℃，分流比為5∶1；頂空瓶溫度 70 ℃，定量環(huán)溫度 80 ℃，傳輸管線溫度 110 ℃/瓶，加熱時間45 min，瓶壓 9.23×104Pa，頂空瓶體積 10 ml，加入被測液體 1 ml，加蓋密封。 火焰離子化檢測器(FID)， 溫度 250 ℃，氫氣流速40 ml/min，空氣流速 400 ml/min，尾吹 30 ml/min。

2.2溶液配制

2．2．1對照儲備溶液的配制 精密吸取甲醇127 μl(相當(dāng)于100 mg)、丙酮127 μl(相當(dāng)于100 mg)、醋酸乙酯111 μl(相當(dāng)于100 mg)、吡啶102 μl(相當(dāng)于100 mg)分別置于4個事先裝有少量二甲亞砜(DMSO)的100 ml量瓶中，用DMSO稀釋到刻度，配制成4個相應(yīng)的二甲亞砜溶液。

2．2．2對照液的配制 分別吸取上述對照儲備溶液5 ml到4個50 ml的量瓶中，用DMSO稀釋到刻度，搖勻，配制成含各殘留溶劑濃度均為100 μg/ml的4種溶液A(甲醇)、B(丙酮)、C(醋酸乙酯)和 D(吡啶)溶液。

2.3專屬性試驗 精密量取上述各對照溶液，用DMSO逐步稀釋，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，出樣順序：甲醇A(RT=1.920)，丙酮B(RT=2.740)，醋酸乙酯C(RT=4.248)，吡啶D(RT=6.993)，DMSO(RT=10.023)。取上述對照液按1∶1混合進(jìn)樣。5個成分之間分離度均>3.0，且理論塔板數(shù)均大于10 000，對稱性好，見圖1。

2.4檢測限試驗 分別精密量取專屬性項下A甲醇溶液2.0 ml ，B丙酮溶液4.0 ml ， C醋酸乙酯溶液2.0 ml ，D吡啶溶液2.0 ml，置100 ml量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，搖勻，測定一次，再吸取A甲醇溶液0.75 ml，B丙酮溶液4.0 ml，C醋酸乙酯溶液1.0 ml，D吡啶溶液0.5 ml到100 ml量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，在信噪比大于3的條件下測得甲醇、丙酮、醋酸乙酯、吡啶的最低檢測濃度分別為0.75、2.0、1.0和0.5 μg/ml。

2.5線性關(guān)系測定 精密吸取甲醇380 μl(相當(dāng)于300 mg)、丙酮634 μl(相當(dāng)于500 mg)、醋酸乙酯556 μl(相當(dāng)于500 mg)、吡啶20.4 μl(相當(dāng)于20 mg)，置同一個事先裝有少量二甲亞砜的200 ml量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，配成含甲醇1 500 μg/ml、丙酮2 500 μg/ml、醋酸乙酯2 500 μg/ml、吡啶100 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液1、2、5、10、15和20 ml到6個100 ml量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，配成1#～6#的6個標(biāo)準(zhǔn)溶液。取上述6個標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣，線性關(guān)系見表1。

1.甲醇 2.丙酮 3.醋酸乙酯 4.吡啶 5.DMSO圖1 專屬性試驗

表1 線性關(guān)系考查結(jié)果

從上述結(jié)果可以看出：甲醇在濃度15～300 μg/ml之間，丙酮、醋酸乙酯在濃度25～500 μg/ml之間,吡啶在濃度1.0～20 μg/ml之間，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。

2．6回收率試驗 精密稱取供試品(批號201002001)9份，每份500 mg，分別置9個10 ml量瓶中，每份分別精密加入線性項下的2#、4#、6#標(biāo)準(zhǔn)溶液溶解(各3份)，再加DMSO稀釋到刻度，搖勻。同時做空白實驗，空白檢測溶液中測出丙酮A=12 746, 醋酸乙酯A=16 318，未測出甲醇，吡啶，再將上述9份樣品分別進(jìn)樣，并用各自相對應(yīng)的線性方程計算回收率，結(jié)果甲醇、丙酮、醋酸乙酯和吡啶的平均回收率及RSD分別為100.2%和2.0%、100.1%和3.1%、100.7%和1.9%及98.8%2.0%。見表2。

2.7精密度測定 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液10 ml到100 ml量瓶中，用DMSO稀釋至刻度，配成含甲醇150 μg/ml、丙酮250 μg/ml、乙酸乙酯250 μg/ml、吡啶10 μg/ml對照品溶液。精密量取對照液5份，每份2 ml 置20 ml頂空瓶中，同法測定，以峰面積計算，結(jié)果對照品溶液中甲醇、丙酮、醋酸乙酯、吡啶峰面積的RSD分別為2.1%、3.2%、1.8%和2.4%。

表2 回收率試驗結(jié)果

2.8樣品測定 取供試品(批號201002001、201002002、201002003) 3批，每個批號精密稱取500 mg到10 ml量瓶中，用DMSO溶解并稀釋至刻度。標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積取精密度項下標(biāo)準(zhǔn)溶液各溶劑峰面積，供試品殘留按外標(biāo)法計算。結(jié)果見表3。

表3 樣品測定結(jié)果 ng/ml

說明：符號“ -”表示未檢出。

3 討論

本文首次采用頂空氣相色譜法對醋酸地塞米松原料藥的4種殘留溶劑進(jìn)行檢測。方法驗證證明：該方法色譜條件分離良好，靈敏度高，在考查的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r>0.999 9)，回收率符合規(guī)定，符合《中國藥典》2010版附錄Ⅷ P中有機溶劑殘留量測定的要求，可以作為醋酸地塞米松原料藥中殘留溶劑的質(zhì)量控制方法。

1 中國藥典.二部.2005：附錄54

2 周海鈞．藥品注冊的國際技術(shù)要求(質(zhì)量部分)．北京：人民衛(wèi)生出版社 ，2001：82