解毒化瘀散結湯抗肝纖維化的實驗研究

牛亞輝，王見賓，孫曉鳳

(1.邯鄲市傳染病醫(yī)院，邯鄲 056600； 2.河北工程大學附屬醫(yī)院，邯鄲 056601； 3.邯鄲市第一醫(yī)院，邯鄲 056000)

解毒化瘀散結湯為本院治療慢性乙型肝炎肝硬化的經(jīng)驗方，臨床和實驗表明，該藥對慢性乙肝肝硬化的治療具有較好的療效。筆者采用動物實驗的方法，觀察了解毒化瘀散結湯對CCl4誘導大鼠實驗性肝纖維化的影響，現(xiàn)將結果報道如下。

1 材料和方法

1.1實驗動物 Wistar大鼠，體質量(180±20) g ，雌雄兼用，由河北醫(yī)科大學醫(yī)學實驗動物中心提供。

1.2藥物與試劑 解毒化瘀散結湯的藥物組成: 黃芪30 g、白術15 g、金錢草30 g、郁金30 g、鱉甲15 g、丹參30 g、水蛭10 g、生甘草10 g等，加水400 ml，水煎20 min，取液200 ml；二煎加水300 ml，水煎20 min，取液150 ml，將兩次藥液混合，裝瓶備用。安絡化纖丸(森隆藥業(yè)有限責任公司生產(chǎn)，主要成分：地黃、三七、水蛭、地龍、牛黃、白術等)。CCl4(鄭州化學試劑二廠生產(chǎn)，批號20110906)。橄欖油(上海化學試劑站分裝，批號20110106)。Hyp試劑盒由南京建成生物制品研究所提供。

1.3實驗方法 將實驗動物隨機分成正常組、模型組、解毒化瘀散結湯組、安絡化纖丸組，每組10只。除正常組外，其余各組均采用CCl4高脂低蛋白復合因素制造大鼠肝纖維化模型。按0.3 ml/100 g體質量皮下注射40 % CCl4橄欖油溶液，每周2次，共6周。在整個實驗中，正常大鼠飼以全價顆粒飼料，其余各組均以飼料配方Ⅰ(79.5%純玉米粉+ 20%豬油+ 0.5%膽固醇壓制成顆粒飼料)喂養(yǎng)2周，繼以飼料配方Ⅱ(89. 5%純玉米粉+ 10 %豬油+ 0. 5 %膽固醇壓制成顆粒飼料)喂養(yǎng)至第6周末。另以30 %乙醇按1 ml/100 g體質量灌胃，每周2次，共6周。造模成功后第2日開始定時灌胃給藥，正常組和模型組給予生理鹽水5 ml/kg ，解毒化瘀散結湯組給予解毒化瘀散結湯5.8 ml/kg ，安絡化纖丸組給予安絡化纖丸200 mg/kg ，1次/d，共6周。

1.4檢測指標與方法 于給藥結束后第2日，擊昏大鼠斷頭取血5 ml ，離心分取血清。剖腹，于肝右葉取小塊肝組織，以中性甲醛固定做病理檢查。同時取肝左葉組織約1 g ，稱質量，用生理鹽水制成10 %肝組織勻漿，離心分取上清液，分別檢測:血清谷丙轉氨酶(ALT) 、谷草轉氨酶(AST) ，采用賴氏法；血清白蛋白(ALB) ，采用溴甲酚綠法；肝組織羥脯氨酸(Hyp)含量，按試劑盒說明書操作。肝組織標本經(jīng)10 %甲醛溶液固定，石蠟包埋制片，蘇木精- 伊紅染色和Masson染色，光鏡下觀察肝組織學改變和膠原纖維增生情況，按文獻[ 1]分級分期標準判定肝纖維化程度(s) 。

2 結果

2.1各組大鼠血清ALT、AST、ALB和肝組織Hyp含量的變化 大鼠造模后，血清ALT和AST顯著升高，解毒化瘀散結湯和安絡化纖丸均能使實驗動物的肝功能指標恢復至接近正常水平，解毒化瘀散結湯組較安絡化纖丸組效果更為明顯(P<0.05) 。解毒化瘀散結湯還能明顯升高大鼠血清ALB ，降低肝組織Hyp含量。結果見表1。

表1 各組大鼠血清ALT、AST、ALB和肝組織Hyp含量的變化

注: *與模型組比較， *P<0.01；與安絡化纖丸組比較，△P<0.05

2.2肝組織病理學變化 蘇木精- 伊紅染色標本觀察:正常組大鼠肝小葉結構完整，肝細胞排列整齊，無變性壞死。模型組大鼠肝小葉結構嚴重破壞，肝細胞廣泛脂肪變性，大部分標本可見程度、范圍不等的肝細胞壞死，肝組織中有炎性細胞浸潤。解毒化瘀散結湯組肝小葉結構基本正常，肝小葉周邊肝細胞有輕度脂肪變性，匯管區(qū)偶見少量淋巴細胞浸潤。安絡化纖丸組肝細胞脂肪變性，匯管區(qū)及肝小葉內有炎性細胞浸潤。Masson染色標本觀察:模型組肝組織內有大量纖維組織增生形成纖維間隔，膠原纖維從匯管區(qū)向小葉內延伸，其破壞界板，分割、包繞肝小葉，部分標本內可見完整的假小葉。安絡化纖丸組肝組織內膠原纖維增生明顯減輕，無假小葉形成。解毒化瘀散結湯組部分標本有輕度纖維組織增生，主要散在于中央靜脈和匯管區(qū)。各組大鼠肝纖維化程度分期見表2。

表2 各組肝組織病理學變化情況 例

注：與模型組比較， *P<0.05；**P<0.01；與安絡化纖維丸組比較，△P<0.05。

3 討論

肝纖維化是慢性肝病的一種組織學診斷，是多種慢性肝病向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)途徑[ 2]。自著名肝病學家Rogking提出了人的肝纖維化可以逆轉的論述以來，抗肝纖維化的研究不斷深入。中藥在抗肝纖維化方面有很好療效，認為血瘀是肝纖維化的基本病機，治療方法為疏肝健脾、活血化瘀、軟堅散結[3，4]。解毒化瘀散結湯就是按照該原則組方的，具有抗肝纖維化的理論基礎。本研究采用CCl4誘導大鼠實驗性肝纖維化。大鼠經(jīng)6周CCl4皮下注射和高脂低蛋白飼料喂養(yǎng)等復合因素刺激后，其肝組織結構受到嚴重破壞，肝細胞嚴重壞死、脂肪變性和廣泛炎性細胞浸潤，由膠原纖維構成的纖維間隔正在形成或已經(jīng)形成，其病理表現(xiàn)特征與人肝纖維化的形態(tài)特征相近。經(jīng)解毒化瘀散結湯治療后，大鼠肝組織結構基本正常，無膠原纖維增生或僅在匯管區(qū)和中央靜脈有少量增生纖維組織，其肝纖維化程度與模型組比較有非常顯著性差異，且優(yōu)于安絡化纖丸。血清生化指標檢測表明，解毒化瘀散結湯組大鼠血清ALT、AST水平顯著低于模型組，接近正常水平，且血清ALB升高，說明解毒化瘀散結湯對CCl4中毒引起的肝細胞損傷有較好的保護作用。測定肝組織Hyp含量是推斷膠原纖維含量的常用方法[5]。本實驗觀察到，模型組Hyp含量顯著升高，而解毒化瘀散結湯組明顯下降，這與肝組織形態(tài)學觀察反映出的各組肝纖維化程度相一致。

1 張育軒. 肝硬化臨床診斷、中醫(yī)辨證和療效評定標準(試行方案). 中國中西醫(yī)結合雜志，1994 ，14(4) :237

2 屈克義，黃繼海，李文勝，等. 冷飯團抗肝纖維化的實驗研究. 中國中西醫(yī)結合消化雜志，2002 ，9(2) :86

3 中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會·肝病學分會. 病毒性肝炎防治方案. 中華肝臟病雜志，2000 ，8(6) :324

4 王吉耀. 加強對肝硬化及其并發(fā)癥防治的研究. 中華醫(yī)學雜志，2002，82(17) :1153

5 謝仕斌，姚集魯，鄭樹森，等. 血清纖維化指標水平與肝組織纖維圖像分析的關系. 中華肝臟病雜志，2000 ，8(6) :203