乳腺癌組織中NF-κB和Galectin-3的表達及意義

郭德超，安慧敏，孫廣正，張海峰，戴華衛，夏 康

（1.溫州醫學院附屬第三醫院普外科，浙江瑞安 325200；2.溫州醫學院附屬第三醫院病理科，浙江瑞安 325200）

·論 著·

乳腺癌組織中NF-κB和Galectin-3的表達及意義

郭德超1，安慧敏2，孫廣正1，張海峰1，戴華衛1，夏 康2

（1.溫州醫學院附屬第三醫院普外科，浙江瑞安 325200；2.溫州醫學院附屬第三醫院病理科，浙江瑞安 325200）

目的探討核轉錄因子-κB（nuclear transcription factor kappa B，NF-κB）和半乳糖凝集素3（Galectin-3）基因在乳腺癌組織中的表達及意義。方法采用免疫組織化學SP法檢測40例乳腺癌組織中NF-κB和Galectin-3的表達情況。結果乳腺癌組織中NF-κB和Galectin-3的陽性表達率分別為70.0%和55.0%；NF-κB、Galectin-3與乳腺癌淋巴結轉移呈正相關（r=2.497，P＜0.05）。結論乳腺癌中NF-κB、Galectin-3基因的表達呈正相關，在乳腺癌的發生發展中具有重要作用。

乳腺腫瘤；NF-κB；半乳糖凝集素-3

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，近年來呈發病率逐年上升和年輕化的趨勢。因此，關于乳腺癌的研究越來越受到世人的矚目。大量研究認為，核轉錄因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）是一種廣泛存在于體內的細胞轉錄因子，在多種腫瘤組織內呈活化狀態，可調控多種實體瘤（肝癌、結腸癌等）的MDR1基因表達，抑制NF-κB的活性可以抑制多種腫瘤MDR1基因的轉錄活性減少P糖蛋白的表達，從而提高抗腫瘤藥物在細胞內的濃度，增強化療藥物對耐藥細胞的抑制作用［1］。Galectin-3在多種腫瘤中均有表達，且濃度的高低與腫瘤的發生發展和轉移有關。通過免疫熒光法測定正常人與腫瘤患者血清中的Galectin-3，發現腫瘤患者（胃腸道腫瘤、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤）明顯高于正常人群，已經發生轉移的患者又高于局限性腫瘤患者［2-3］。本研究采用免疫組織化學SP法檢測乳腺癌組織中的NF-κB與Galectin-3的表達，并結合臨床病理學特征分析其中乳腺癌發生發展中的作用及相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選擇2007年6月—2010年12月溫州醫學院附屬第三醫院外科手術切除的乳腺癌患者40例，均為女性，年齡35～75歲，平均52.3歲；腫瘤大小＜2.0cm 13例，≥2.0cm 27例；TNM分期，Ⅰ期7例，Ⅱ期16例，Ⅲ期5例，Ⅳ期12例；組織學分級低分化3例，中分化4例，高分化33例；腋淋巴結轉移陽性者27例。另取10例癌旁組織（距癌灶8～10cm），病理證實為非腫瘤組織作為對照。所有病例術前均未經任何針對腫瘤的治療。

1.2 試劑：NF-κB鼠抗人多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司。單克隆兔抗人Galectin-3抗體購自基因科技（上海）有限公司。

1.3 免疫組織化學染色：手術切除的組織標本常規固定后石蠟包埋切成4μm厚切片2張，依次經脫蠟、梯度水化、3%H2O2溶液室溫下孵育5～10min、PBS振洗、微波抗原熱修復、山羊血清封閉、PBS振洗、分別滴加鼠抗人NF-κB（1∶100）和Galectin-3（1∶100）單克隆抗體、濕盒內4℃孵育過夜。再用PBS振洗、滴加親和素過氧化物酶復合物37℃濕育30min。最后用PBS振洗、DAB顯色、蘇木素復染、脫水、封片、顯微鏡下計數。用PBS代一抗作陰性對照。

1.4 結果判斷：光鏡下觀察陽性細胞的數量和分布，隨機計數5個高倍視野，求出平均每個高倍視野網格內陽性細胞百分率。NF-κB陽性表達為細胞漿，呈現棕黃色顆粒，Galectin-3陽性表達部位為細胞質，呈棕黃色。根據其表達率及染色強度分別記為陰性（-，無明顯陽性表達細胞或陽性細胞面積＜10%，染色淺）；弱陽性（+，陽性表達細胞面積＞10%，但＜50%，染色較深）；強陽性（++，陽性表達細胞面積＞50%，染色深）。

1.5 統計學方法：應用SPSS 12.0統計軟件進行數據分析，計數資料以百分率表示，采用χ2檢驗，相關性分析采用列聯表資料的χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

癌組織中NF-κB與Galectin-3的表達與患者性別、年齡及孕激素受體（progesterone receptor，PR）等方面差異無統計學意義（P＞0.05）；在有淋巴結轉移組，NF-κB和Galectin-3蛋白陽性表達率分別為88.9%和70.4%，而無淋巴結轉移組陽性率僅為30.8%和23.1%，差異均有統計學意義（P＜0.01），在雌激素受體（estrogen receptor，ER）（+）表達組中，NF-κB和Galectin-3蛋白陽性表達率分別為81.0%和52.0%，而ER（-）表達組陽性率僅為47.4%和40.0%，差異均有統計學意義（P＜0.05）；在Her-2（+）組中，NF-κB和Galectin-3蛋白陽性表達率分別為68.2%和76.2%，而Her-2（-）組陽性率僅為33.3%和36.8%，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。NF-κB在乳腺癌組織中的陽性表達見圖1、陰性表達見圖2；NF-κB在臨床分期方面差異無統計學意義（P＞0.05），Galectin-3在乳腺癌組織中隨組織學分級的增高，蛋白表達率上升，差異有統計學意義（P＜0.01），Galectin-3在乳腺癌組織中的陽性表達見圖3；本研究將40例乳腺癌按組織學分級分為2組，Ⅰ+Ⅱ為I組，Ⅲ為II組，隨著組織學分級的增加，NF-κB和Galectin-3蛋白表達均呈上升趨勢，差異有統計學意義（P＜0.05）。乳腺癌組織中NF-κB和Galection-3的陽性表達率分別為70.0%和55.0%，NF-κB和Galectin-3的表達情況呈正相關（r=2.497，P＜0.05），見表2。

表1 NF-κB和Galectin-3的表達與臨床病理指標的關系Tab le1 Relationship between the expression of NF-κB，Galectin-3 and clinical pathological paramenters

Her-2：human epidermal growth factor receptorⅡ；ER：estrogen receptor；PR：progesterone receptor

圖1 NF-κB在乳腺癌組織中的陽性表達（SP×400） Figure 1 Positive expression of NF-κB in breast cancer（SP×400）

圖2 NF-κB在乳腺癌組織中的陰性表達（SP×400）Figure 2 Negative expression of NF-κB in breast cancer（SP×400）

圖3 Galectin-3在乳腺癌組織的陽性表達（SP×400）Figure 3 Positive expression of Galectin-3 in breast cancer（SP×400）

表2 乳腺癌組織中NF-κB與Galectin-3關系的一致性檢驗Table 2 Consistency test of relationship between NF-κB and Galetin-3 in breast cancer tissue

3 討 論

隨著分子生物學和腫瘤學的飛速發展，人們發現NF-κB信號途徑在腫瘤發生發展的各個環節中扮演重要角色，而其在腫瘤細胞凋亡中的作用尤為顯著［4-7］。

NF-κB是一種分布和作用均十分廣泛的真核細胞轉錄因子，屬于NF-κB/Rel蛋白家族成員，能夠與B淋巴細胞免疫蛋白κ輕鏈基因的增強子κB序列特異的結合。隨后對NF-κB進行了廣泛的研究，發現它能與多種細胞基因的啟動子和增強子發生特異性結合，并促進相關基因的轉錄和表達，參與炎癥反應、損傷刺激、免疫防御、細胞增殖和凋亡等過程。研究［8］證實，NF-κB在腫瘤生長機制過程的信息傳遞中起重要作用，與腫瘤的發生發展、浸潤轉移密切相關。

本研究以鼠抗人單克隆抗體特異性標記乳腺癌組織中的NF-κB蛋白的表達。NF-κB蛋白在乳腺癌組織中呈陽性表達，證明NF-κB中乳腺癌組織中存在過度活化的現象，并隨著組織學分級的提高，陽性表達率增加，呈正相關，這提示NF-κB的高表達與乳腺癌的發生發展有密切關系。NF-κB蛋白在有無淋巴結轉移組中的表達，差異有統計學意義，這與Hou等［9］的研究結果具有相似性。

Galectin-3是一種β-半乳糖苷結合的動物凝集素，為脊椎動物半乳糖凝集素家族中的一種亞型，人Galectin-3的相對分子質量為31 000，Galectin-3對β-半乳糖有特別的親和力，可通過與特殊配體的反應發揮多種生物學效應。半乳糖凝集素在活化的巨噬細胞、嗜堿性細胞、上皮細胞及一些感覺神經元中表達最多。Galectin-3主要存在于細胞漿中，也可存在于細胞核、細胞表面或者細胞外［10］。Galectin-3能參與細胞生長，細胞與細胞之間、細胞與間質之間黏附，炎癥反應，細胞凋亡，免疫調節及腫瘤細胞轉移、浸潤［11］。Galectin-3在有淋巴結轉移組中的表達，明顯高于在無淋巴結轉移組中的表達，并隨著組織學及臨床分期的提高，陽性表達率增加，呈正相關。

總之，乳腺癌組織中NF-κB和Galectin-3的表達具有相關性，提示在乳腺癌的發生發展、腫瘤分化和淋巴結轉移及評估預后中具有很大的潛在價值。

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（本文編輯：趙麗潔）

EXPRESSION OF NF-κB AND Galectin-3 AND THEIR CLINICAL SIGNIFICANCE IN BREAST CANCER

GUO Dechao1，AN Huimin2，SUN Guangzheng1，ZHANG Haifeng1，DAIHuawei1，XIA Kang2
（1.Department of General Surgery，the Third Affiliated Hospital ofWenzhou Medical College，Zhejiang Province，Ruian 325200，China；2.Department of Pathology，the Third Affiliated Hospital ofWenzhou Medical College，Zhejiang Province，Ruian 325200，China）

ObjectiveTo explore the expression of nuclear transcription factor-kappa B（NF-κB）and Galectin-3 in beast cancer and their significance.MethodsThe expression of NF-κB and Galectin-3 were determined with immunohistochemistry in 40 cases of breast cancer.ResultsThe positive expression rates of NF-κB and Galectin-3 in breast cancer tissues were 70.0%and 55.0% respectively.Overexpressions of NF-κB and Galectin-3 in breast cancer were related to lymph node metastasis（r=2.497，P＜0.05）.ConclusionThe expression of NF-κB in breast cancer tissues is correlated with Galectin-3 expression，and theymay play a very important role in the progress of breast cancer.

breast neoplasms；NF-kappaB；galectin-3

R737.9

A

1007-3205（2012）03-0275-04

2011-08-23；

2012-01-16

瑞安市科技局科研項目（20082104）

郭德超（1978-），男，吉林磐石人，溫州醫學院附屬第三醫院主治醫師，醫學碩士，從事胃腸道及乳腺腫瘤診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.03.009