茴拉西坦及其制劑含量測(cè)定方法的改進(jìn)

郭志淵 徐燕 傅萍

（四川省食品藥品檢驗(yàn)所，四川 成都 610097）

茴拉西坦為腦功能改善藥，曾用名阿尼西坦，通過(guò)血腦屏障選擇性作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)茴拉西坦及其制劑的含量測(cè)定均采用以甲醇－水為流動(dòng)相的HPLC法或紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定［1－4］；文獻(xiàn)報(bào)道茴拉西坦及其制劑的檢測(cè)方法也以甲醇－水為流動(dòng)相［5－7］。在檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)茴拉西坦樣品在甲醇及流動(dòng)相中的穩(wěn)定性相當(dāng)差影響到最后的檢測(cè)結(jié)果。本文采用以乙腈－水（35：65）為流動(dòng)相的HPLC法對(duì)茴拉西坦的含量進(jìn)行測(cè)定，大大提高了樣品溶液的穩(wěn)定性，使測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確、可靠。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

Waters2695－2487高效液相色譜儀，Agilent1200高效液相色譜儀；茴拉西坦原料（晉城海斯制藥有限公司提供）；乙腈為色譜純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Altima C18柱 250×4.6mm 5μm，Agilent EclipssXDB－C18柱250×4.6mm 5μm，流動(dòng)相：乙腈－水（35：65）；檢測(cè)波長(zhǎng)采用283nm，理論板數(shù)以茴拉西坦計(jì)算應(yīng)不低于1500。

1.2.2 測(cè)定方法

取本品適量，精密稱定，加流動(dòng)相使溶解并稀釋制成每1ml中含茴拉西坦0.08mg的溶液，作為供試品溶液。精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取茴拉西坦對(duì)照品，同法處理作為對(duì)照品溶液。

1.2.3 專屬性試驗(yàn)

吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、及按供試品溶液制備方法制成的空白輔料溶液各10μl注入液相色譜儀。照1.2.1方法測(cè)定。

1.2.4 線性關(guān)系

精密稱取對(duì)茴拉西坦對(duì)照品19.48mg置25ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1、2、5、10、20、40、80ml分別置100ml量瓶中用流動(dòng)相稀釋至刻度。精密量取10 μl，注入液相色譜儀，照1.2.1方法測(cè)定。

1.2.5 精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，照1.2.1方法測(cè)定。

1.2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批6份，制備供試品溶液，照1.2.1方法測(cè)定。

1.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取本品供試品溶液分別在0、1、2、4、8h進(jìn)樣，照1.2.1方法測(cè)定。

同時(shí)照1.2.1方法，以甲醇－水（60：40）為流動(dòng)相測(cè)定供試品溶液在0、1、2、4、8h的穩(wěn)定性。

1.2.8 回收率試驗(yàn)

按處方比例精密稱取一定量的空白輔料（對(duì)應(yīng)于茴拉西坦10mg）9份，分別置10ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml置25ml量瓶中，各精密加入茴拉西坦對(duì)照品溶液（濃度0.9212mg·ml－1）1.6ml、2.0ml、2.4ml，加流動(dòng)相稀釋至刻度，照1.2.1方法測(cè)定。

1.2.9 樣品含量測(cè)定

取各劑型的樣品照1.2.2測(cè)定方法測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 專屬性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果空白輔料溶液在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上無(wú)吸收，證明空白輔料溶液無(wú)干擾，對(duì)照品、供試品及空白溶液色譜圖見圖1～3。

圖1 空白輔料溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

2.2 線性關(guān)系測(cè)定結(jié)果

以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，直線回歸方程為 Y＝2.7004×106X－4.6914×104，R＝1.0000。由回歸方程和直角坐標(biāo)圖可見，茴拉西坦進(jìn)樣量在0.07792～6.2336μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖3 對(duì)照品溶液色譜圖

2.3 精密度試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

以測(cè)得峰面積，計(jì)算RSD0.14%，精密度良好。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

計(jì)算得茴拉西坦的平均含量為100.6%，RSD為0.97%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

8小時(shí)內(nèi)茴拉西坦峰面積的RSD為0.46%，表明供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，能滿足測(cè)定需要。而當(dāng)流動(dòng)相為甲醇－水（60：40）時(shí)8小時(shí)內(nèi)茴拉西坦峰面積的RSD為1.76%。

表1 乙腈－水（35∶65）為流動(dòng)相的穩(wěn)定性

表2 甲醇－水（60∶40）為流動(dòng)相的穩(wěn)定性

回收率測(cè)定結(jié)果 通過(guò)峰面積，計(jì)算回收率，茴拉西坦的平均回收率為100.2%，RSD1.6%。

表3 回收率試驗(yàn)

2.7 樣品測(cè)定結(jié)果

結(jié)果見表4。

表4 樣品測(cè)定

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇

本實(shí)驗(yàn)考察了不同的流動(dòng)相及相應(yīng)的溶劑：甲醇－水（60：40）、乙腈－水（35：65）。發(fā)現(xiàn)當(dāng)以甲醇－水（60：40）為流動(dòng)相及溶劑時(shí)，茴拉西坦8小時(shí)內(nèi)峰面積RSD為1.76%，樣品穩(wěn)定性差，不能滿足測(cè)定需求；而用乙腈－水（35：65）為流動(dòng)相及溶劑時(shí)，樣品穩(wěn)定性較好，8小時(shí)內(nèi)峰面積RSD為0.46%，測(cè)定精密度大大提高。所以本文最終選擇以乙腈－水（35：65）為流動(dòng)相。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

茴拉西坦及其制劑的原標(biāo)準(zhǔn)［1－4］及文獻(xiàn)報(bào)道的茴拉西坦含量測(cè)定方法［5，7］的檢測(cè)波長(zhǎng)均不一致，并且考慮到改換溶劑后樣品的最大吸收也會(huì)發(fā)生位移，所以本實(shí)驗(yàn)也對(duì)以乙腈－水（35：65）為溶劑的供試品溶液進(jìn)行了紫外掃描，發(fā)現(xiàn)茴拉西坦在283nm處有最大吸收。故選283nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

綜上所述，本文建立的茴拉西坦及茴拉西坦系列制劑的含量測(cè)定方法改變了現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)［1－3］的流動(dòng)相及檢測(cè)波長(zhǎng)，結(jié)果重現(xiàn)性更好，更準(zhǔn)確可靠。

1 國(guó)家藥典委員會(huì).新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)［S］.第25冊(cè).北京：人民衛(wèi)生出版社，2002，965－968.

2 國(guó)家藥典委員會(huì).新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)［S］.第46冊(cè).北京：人民衛(wèi)生出版社，2002，21－21.

3 國(guó)家藥典委員會(huì).新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)［S］.第51冊(cè).北京：人民衛(wèi)生出版社，2005，183－183.

4 國(guó)家藥典委員會(huì).新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)［S］.第65冊(cè).北京：人民衛(wèi)生出版社，2009，134－134.

5 婁志紅，苑淑俐.HPLC法測(cè)定茴拉西坦膠囊含量［J］.黑龍江醫(yī)藥，2006，19（5）：333－334.

6 許晉星.HPLC法測(cè)定茴拉西坦分散片的有關(guān)物質(zhì)［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，25（4）：373－375.

7 劉東權(quán)，王曉文，陳鑫，等.HPLC法測(cè)定茴拉西坦咀嚼片中的含量［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（02）：19－21.