小檗堿對糖尿病腎病大鼠C反應蛋白的影響＊

楊靜 羅岷 劉昌權 劉旭平

（1.宜賓衛生學校藥學教研室，四川 宜賓 644000；2.宜賓衛生學校生理教研室，四川 宜賓 644000；3.宜賓衛生學校內科教研室，四川 宜賓 644000）

糖尿病腎?。―iabetic nephropathy，D N）即糖尿病腎病腎小球硬化癥，是糖尿病（Diabetes mellitus，DM）患者常見的并發癥之一，其早期的臨床征象主要表現為微量白蛋白尿。病理學上表現為腎小球肥大，腎小球基底膜增厚，系膜基質增寬，最后導致腎小球纖維化、硬化，是導致終末期腎衰竭（End stage renal failure，ESRD）的重要原因［1］。D N的發病機制較為復雜，至今尚未十分清楚，近年來研究顯示C反應蛋白（C－reactive protein，CRP）表達的升高在加速Ⅱ型DM大血管病變的進程中起重要作用［2］，因此若能篩選出有效抑制C R P表達的中藥對糖尿病腎病治療極具價值。

小檗堿（Berberine，Ber）是黃連素根莖中所含的一種主要生物堿，具有抗炎、降糖、糾正脂質代謝紊亂等特點，但是否有抑制糖尿病C反應蛋白表達尚未見報道。本研究通過研究小檗堿對糖尿病大鼠C反應蛋白表達的影響，探討小檗堿降糖效應是否與抑制C反應蛋白有關。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物

清潔級S D大鼠，雄性，體重20 0－24 0g，由瀘州醫學院實驗動物科提供（合格證號：川醫動字24 01 11 5）。

1.1.2 樣品及試劑

小檗堿（陜西森弗生物技術公司，純度99%，黃色結晶粉末）；鏈脲佐菌素（STZ）（美國Sigma公司，批號S0130）；C反應蛋白酶聯免疫試劑盒（ADL化學公司，美國）。

1.1.3 儀器

JPS－5型手持式快速全血葡萄糖測試儀（北京怡成生物電子技術有限公司），DNM 96 2型酶標分析儀（北京普朗新技術有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 糖尿病腎病大鼠模型建立［3］

雄性SD大鼠一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ，pH 4.5，0.1%枸櫞酸緩沖液新鮮配制）55m g·kg－1造糖尿病腎病大鼠模型。實驗期間動物自由進食、飲水。72h后采用大鼠斷尾取血測血糖值，取尿測尿蛋白，連續測3d。以血糖水平＞16.7mm ol·L－1，尿糖強陽性為糖尿病建模成功。

1.2.2 動物分組及處理

將40只建模成功雄性S D大鼠隨機分為模型組、小檗堿75、15 0、30 0m g·k g－1組、羅格列酮組，并設空白對照組，每組8只。成功造模后各組分別灌胃給予小檗堿75、150、300m g·k g－1以及4m g·k g－1羅格列酮，連續6w；模型組及空白對照組灌胃給予等體積生理鹽水，連續6w。實驗期間自由飲水飲食，不用胰島素，于第6w末稱重，最后一次給藥后禁食12h，尾靜脈取，血測空腹血糖（Fasting blood－glucose，FPG）。處死大鼠，右腎置于10%中性福爾馬林液浸泡固定，常規HE染色；左腎稱重、勻漿，嚴格按照ELISA說明書操作，酶標儀450n m檢測C反應蛋白活性。

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 小檗堿對大鼠體重、血糖、C反應蛋白含量影響

與空白對照組比較，糖尿病模型組大鼠血糖及CRP含量均明顯高于空白對照組，體重明顯低于正常組（P＜0.01），有統計學差異。與模型組比較，小檗堿75、150、300m g·k g－1組血糖及CRP含量均明顯低于模型組，體重高于模型組（P＜0.05），有統計學差異，見表1。

表1 小檗堿對糖尿病腎病大鼠體重、血糖、C反應蛋白活性影響（，n＝8）

表1 小檗堿對糖尿病腎病大鼠體重、血糖、C反應蛋白活性影響（，n＝8）

注：與模型組比較，▲P＜0.05?；與空白組比較，＊P＜0.01

組別 體重（g）血糖（mm o l·L－1）實驗前 造模后6w 造模后3d 造模后6w C R P活性（m g·L－1）空白對照組 22 3.9±3.3 38 1.5±22.6 6.05±0.80 6.08±1.02 27.34±14.06糖尿病腎病模型組 21 6.3±6.6＊ 20 2.3±17.5＊ 27.45±0.99＊ 29.29±0.58＊ 24 1.06±28.90＊羅格列酮組 21 4.2±15.5 23 1.6±24.9 26.15±2.35＊ 21.97±1.60 60.11±13.81 B e r 75m g·k g－1組 21 0.9±15.3 21 9.4±30.4▲ 25.25±1.99＊ 23.23±2.52▲ 75.23±15.78▲B e r 15 0m g·k g－1組 20 7.9±14.9 20 6.4±25.8▲ 24.15±2.50＊ 22.78±1.45▲ 68.72±12.98▲B e r 30 0m g·k g－1組 21 6.1±14.2 20 3.0±36.8▲ 25.02±1.95＊ 21.47±2.23▲ 64.38±11.94▲

2.2 小檗堿對腎臟病理變化影響

光鏡下可見空白對照組大鼠腎小球毛細血管形態及分布無異常，糖尿病模型組可見腎小球毛細血管充血、擴張，腎小球明顯增大，腎小球系膜區擴張和基膜不同程度增厚，腎小球細胞數目減少，腎小球細胞外基質明顯增多，系膜區擴大。小檗堿各治療組間腎小球增大不明顯，腎小球系膜細胞和系膜基質輕度增生，較糖尿病模型組病變明顯減輕，見圖1。

圖1 小檗堿對糖尿病腎病腎臟病理改變影響

2.3 小檗堿對大鼠24h尿蛋白、血漿肌酐、尿素氮影響

與模型組比較，小檗堿75、15 0、30 0m g·k g－1組24h尿蛋白、血漿肌酐、尿素氮均明顯低于模型組（P＜0.05），有統計學差異，見表2。

3 討論

慢性低水平炎癥與糖尿病相關，對糖尿病未來風險預測及臨床治療有效性評估均具有一定的價值。在糖尿病的微血管病變中，慢性炎癥反應亦發揮重要的作用，CRP（C－reactive protein，CRP）是一種急性時相反應蛋白，C反應蛋白水平與糖尿病患者尿微量白蛋白（Microal buminuri，MAU）呈強正相關［4］。C R P的增加可能導致了糖尿病腎血管病變的發生。研究顯示C R P主要由肝細胞合成和分泌，并受多種細胞因子如白介素6、白介素l等的調節和誘導，炎癥產生時，C R P增加也可促進其他炎性因子釋放增多。這些炎性因子共同作用于腎小球，更進一步加重腎臟損傷，而且隨著病程的延長，循環往復，尿蛋白漏出逐漸增多，腎臟損害漸進加重，導致糖尿病腎病的發生［5，6］。因此，通過抑制C R P的活性可能會有效的防止和改善糖尿病腎病的發生，如能從價廉物美的傳統中藥中篩選出對C R P有抑制作用的藥物極具價值。

表2 蘇木水煎液對糖尿病腎病大鼠24h尿蛋白、血漿肌酐、尿素氮影響（，n＝8）

表2 蘇木水煎液對糖尿病腎病大鼠24h尿蛋白、血漿肌酐、尿素氮影響（，n＝8）

注：與模型組比較，▲P＜0.05；與空白組比較，＊P＜0.01。

組 別 尿素氮（mm o l·L－1）肌酐（μm o l·L－1）24h尿蛋白（g·24h－1）空白對照組6.47 6±0.74 5 37.12 2±4.17 10.01 3±0.00 8糖尿病腎病模型組 13.72 4±1.64 5＊ 77.11 1±8.13 9＊ 0.07 7±0.03 2＊羅格列酮組 7.11 2±0.75 9▲ 41.44 3±3.92 9▲ 0.03 5±0.00 7 B e r 75m g·k g－1組 9.11 7±1.00 6▲ 53.42 4±5.59 0▲ 0.05 5±0.02 8▲B e r 15 0m g·k g－1組 9.30 1±0.98 3▲ 50.25 0±5.46 4▲ 0.04 5±0.01 5▲B e r 30 0m g·k g－1組 8.47 1±0.89 4▲ 44.94 7±5.00 6▲ 0.03 8±0.01 2▲

小檗堿具有的降血糖、調血脂、抗炎等作用促使其在糖尿病患者中應用［7］。但其降糖作用究竟是否與抑制C R P有關目前尚無實驗依據。本實驗通過小檗堿干預糖尿病大鼠，觀察糖尿病大鼠尿蛋白，腎功以及C R P的改變，結果發現小檗堿各劑量組明顯降低糖尿病大鼠24h尿蛋白、血漿肌酐、尿素氮以及C R P的表達（P＜0.05），與模型組比較有統計學意義，提示小檗堿具有降低保護糖尿病腎病大鼠腎功的作用，而次作用可能與抑制C R P有關，但由于糖尿病血管病變機制復雜，至于小檗堿的腎臟保護效應是否有其他機制和因素有關尚需進一步研究。

1 LehmannR，Schleicher ED.Molecular mechanism of diabetic nephropathy［J］.Clin Chim Acta，2000，297（1－2）：34－38.

2 劉慰華，黃河清，鄧艷輝，等.黃連素對糖尿病腎損傷大鼠腎功能氧化應激腎臟醛糖還原酶的影響［J］.中國藥理學通報，20 08，24（7）：95 5－95 9.

3 林鷺平，李興.鏈脲佐菌素誘導大鼠糖尿病腎病動物模型［J］.山西醫藥雜志，20 10，39（1）：27－28.

4 周秀艷，侯振江，邢桂芝.血清C反應蛋白與2型糖尿病腎病的關系［J］.中國老年學雜志，2007，27（4）：792－793.

5 黃萍，李耘.厄貝沙坦對血壓正常的老年初期糖尿病腎病患者尿微量白蛋白和超敏C反應蛋白的影響［J］.醫學臨床研究，2011，28（5）：956－957.

6 Barzilay JI，Abraham L，Heckbert SR，et a1.The relation of markers of inflammation to the development of glucose disorders in the elderly：the cardiovascular health study［J］.Diabetes，2001，50（10）：2384－2389.

7 閻文柱，王德山，邵佑之，等.小檗堿對2型糖尿病大鼠腎小管的影響［J］.重慶醫科大學學報，2011，36（5）：575－577.