胎膜早破胎膜中白細胞介素18的表達及其臨床意義

張茗

(大連市婦產醫院產科五病房，遼寧大連116033)

胎膜早破胎膜中白細胞介素18的表達及其臨床意義

張茗

(大連市婦產醫院產科五病房，遼寧大連116033)

［目的］探討白細胞介素18(interleukin-18，IL-18)作為診斷胎膜早破(premature rupture of membrane，PROM)生物學標志的可能性。［方法］應用免疫組織化學SP法檢測42例PROM患者及28例正常產孕婦胎膜的IL-18表達，并加以比較。［結果］PROM胎膜中IL-18表達明顯高于正常胎膜組織(P＜0.05)。合并亞臨床絨毛膜羊膜炎PROM胎膜組織的IL-18表達明顯高于不合并絨毛膜羊膜炎組織(P＜0.05)。IL-18的表達與胎膜早破時間無明顯相關性。［結論］IL-18作為一種細胞因子有可能成為PROM的預測性指標。

白細胞介素18;胎膜早破;免疫組織化學

胎膜早破(premature rupture of membrane，PROM)是妊娠期常見并發癥之一。導致胎膜早破的因素很多，其中感染是最常見的原因，多為生殖道病原微生物上行引起的亞臨床感染，如出現明顯的臨床癥狀及體征再予治療，多為時已晚。白細胞介素18(interleukin-18，IL-18)是近年發現的一種新的細胞因子［1］，其生物學活性與白細胞介素12(interleukin-12，IL-12)非常相似，但其誘生γ-干擾素的能力要強于IL-12。近年來諸多研究證實，IL-18具有多種生物學效能，能促進多種細胞因子的分泌。IL-18在免疫調節、抗感染、變態反應性疾病發病過程中發揮著重要的作用。

本實驗應用免疫組織化學SP方法對IL-18在PROM胎膜中的表達進行研究，探討 IL-18與PROM發生的關系，并且分析 IL-18作為診斷PROM生物學指標的可能性。

1 材料和方法

1.1 標本來源

選取2008年3月—2008年12月于大連市婦產醫院產科住院，足月分娩的單胎初產婦共70例，其中正常孕婦者28例，PROM患者42例。42例PROM病例中，10例合并亞臨床絨毛膜羊膜炎，32例非絨毛膜羊膜炎。胎膜早破＜12 h者20例，12～24 h者15例，＞24 h者7例。所有孕婦均實行剖宮產，術中直視下宮頸內口取胎膜2 cm×2 cm，蒸餾水沖洗后，置于10%福爾馬林中固定，石蠟包埋備用。

1.2 免疫組織化學

將蠟塊制成5 μm厚的切片。經水化，阻斷內源性過氧化物酶活性，用非免疫牛血清阻斷非特異性抗原后，加IL-18抗體(博士德公司)，室溫下孵育90 min。滴加生物素化二抗，室溫下孵育10 min，再滴加SP復合物，室溫下孵育10 min。各步驟之間均用PBS緩沖液洗3次，DAB顯色后加入蘇木素復染。陰性對照省略第一抗體，用PBS緩沖液代替。

1.3 結果判斷標準

陽性表達為棕黃色顆粒，有胞漿染色的細胞定義為陽性細胞。在光鏡下隨機觀察10個高倍視野，細胞胞漿內基本未著色為(-);胞漿內著色為淺黃色，陽性細胞數＜25%為(+);胞漿內著色為棕黃色，陽性細胞數介于25%～50%之間為(++);胞漿內可見棕黃色顆粒，陽性細胞數＞50%為(+++)。

1.4 統計學方法

采用SPSS for Windows 11.5統計分析軟件進行分析。對IL-18的表達與臨床病理特征的關系采用卡方檢驗和確切概率法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 PROM組和正常孕婦組胎膜中IL-18的表達

IL-18在PROM胎膜中主要定位于絨毛膜和羊膜細胞的胞漿(圖1、2)，正常孕婦胎膜中IL-18無表達或者表達較弱(圖3)。經連續性卡方檢驗，兩者之間的差異有顯著性意義(χ2=9.502，P＜0.05)。見表1。

圖1 IL-18在PROM非絨毛膜羊膜炎中為陽性表達(SP×100)Fig 1 Positive expression of IL-18 in PROM without sub-clinical chorioamonitis(SP×100)

圖2 IL-18在PROM合并亞臨床絨毛膜羊膜炎中為強陽性表達(SP×400)Fig 2 Highly positive expression of IL-18 in PROM with subclinical chorioamonitis(SP×400)

圖3 正常組織中IL-18的表達較弱(SP×400)Fig 3 Poor expression of IL-18 in normal tissue(SP×400)

2.2 PROM組合并亞臨床絨毛膜羊膜炎和非絨毛膜羊膜炎胎膜中IL-18的表達

IL-18在PROM合并亞臨床絨毛膜羊膜炎胎膜中的表達明顯高于PROM非絨毛膜羊膜炎組，兩者之間的差異具有顯著性意義(χ2=10.428，P＜0.05)。見表2。

表1 PROM組和正常孕婦組胎膜中IL-18的表達Tab 1 Expression of IL-18 in PROM and Normal Tissues (n)

2.3 胎膜中IL-18的表達與胎膜早破時間的關系

隨時間延長，PROM胎膜中IL-18的表達差異無顯著性意義(P＞0.05)。見表3。

表2 PROM合并亞臨床絨毛膜羊膜炎和非絨毛膜羊膜炎胎膜中IL-18的表達Tab 2 Expression of IL-18 in PROM with and without Sub-clinical Chorioamonitis (n)

表3 胎膜中IL-18的表達與胎膜早破時間的關系Tab 3 The Relationship with the Expression of IL-18 and the Time of PROM

3 討論

PROM是妊娠期常見的并發癥，足月PROM發生率為 10%，足月前 PROM發生率為 2.0%～3.5%［1］。嚴重危及母兒健康，足月前PROM往往導致不可避免的早產。

導致PROM的因素很多，其中感染與胎膜早破的關系密切，胎膜因炎性細胞因子浸潤而水腫、脆性增加易于破裂。細菌感染后可產生多種酶類、自由基和細胞因子，參與PROM的發生。細胞因子刺激母體及胎兒的多形核白細胞產生并激活溶酶體，破壞胎膜組織。

當發生PROM時，感染或炎癥過程中產生的細胞因子，細菌產生的脂多糖、松弛素、細胞凋亡等增加，誘導基質金屬蛋白酶(MMPs)的合成和活化，尤以破膜處明顯，使其抗張力及彈性變形能力下降［2］。在PROM孕婦胎膜局部區域中可觀察到大量凋亡的羊膜細胞分散存在，而在剖宮產孕婦胎膜中僅發現有少量凋亡細胞存在，提示PROM與細胞凋亡有關［3］。

Menon等［4］研究證實，羊水中的IL-18，足月前胎膜早破患者較足月產顯著增高。Fortunato等［5］研究表明PROM患者羊水中IL-18水平較未破膜者顯著升高，且羊膜腔內感染患者其羊水中IL-18水平較未感染者明顯升高。IL-18又稱γ-干擾素誘導因子，最先是Okamura等于1995年發現在鼠的脾細胞中能激活自然殺傷細胞，可誘導產生γ-干擾素的誘導因子，枯否氏細胞核激活的巨噬細胞中可檢測到其基因的表達［6］。IL-18能促進凋亡發生和炎癥反應。PROM時羊水中的IL-18作為一種前凋亡因子明顯上升。絨毛膜和蛻膜來源的IL-18，在PROM患者中升高，同時IL-18誘導了羊膜絨毛膜Fas的表達。在許多疾病中，IL-18明顯升高，且能刺激多種細胞產生MMPs，降解基底細胞膜。

本研究顯示PROM組胎膜中IL-18的表達明顯高于正常孕婦組。PROM組中合并亞臨床絨毛膜羊膜炎者胎膜IL-18表達強度較無絨毛膜羊膜炎者顯著升高。可能是由于胎膜局部感染刺激絨毛膜滋養層細胞合成IL-18增加，而IL-18的增加可能刺激有關細胞釋放MMPs，降解基底細胞膜和/或IL-18通過誘導羊膜絨毛膜Fas的表達，促使細胞凋亡增加，兩方面的作用均減弱胎膜強度，增加胎膜脆性，最終引起胎膜破裂。

PROM患者胎膜中IL-18水平明顯高于正常對照組，這一趨勢在破膜早期即明顯表現出來，且與破膜時間無相關性。推測在沒有炎癥因素的干擾時，IL-18通過促進Th1型因子合成，使Th1/Th2型細胞因子失衡，導致PROM。由于這種作用并不隨著破膜時間的延長而增加，說明免疫的異常在破膜未發生時既已存在，因而IL-18有可能作為一種對PROM的預測性指標。

［1］樂杰.婦產科學［M］.第6版.北京:人民衛生出版社.2006.145-146.

［2］胡艷.基質金屬蛋白酶和胎膜早破的關系［J］.國外醫學婦幼保健分冊，2003，14(2):77-80.

［3］Locksmith GJ.Amniontic fluid concentrations of matrix metalloproteinase 9and tisser inhibitor lf metalloproteinase 1during pregnancy and labor［J］.Am J Obstet Gynecol，2001，184(2):159-164.

［4］Menon R，Lombardi SJ，Fortunato SJ.IL-18，a product of choriodecidual cells，increases during premature rupture of membranes but fails to turn on the Fas-FasL-mediated apoptosis pathway［J］.J Assist Reprod Genet，2001，18(5): 276-284.

［5］Fortunato SJ，Menon R.Distinct molecular events suggest different pathways for preterm labor and premature rupture of membranes［J］.Am J Obstet Gynecol，2001，184(7): 1399-1405.

［6］Nakanishi K，Yoshimoto T，Tsutsue H，et al.Interleukin-18 is a unique cytokine that stimulates both Th1 and Th2 responses depending on its cytokine milieu［J］.Cytokine Growhe Factor Rev，2001，12(1):53-72.

Expression and clinical significance of interleukin-18 in premature rupture of membrane

ZHANG Ming
(The Fifth Department of Gynecology and Obstetrics，Dalian Obstetrics and Gynecology Hospital，Dalian 116033，China)

［Objective］To detect expresson of interleukin-18(IL-18)in the tissne with premature rupture of fetal membrane(PROM)and clinical pathological significance of the expression.［Methods］The expression of IL-18 was detected in 42 tissues with premature rupture of fetal membranes and 28 normal of fetal membrane tissues without by immunohistochemistry.［Results］The expression of IL-18 was significantly higher in premature rupture of membrane than that in normal(P＜0.05)，and the expression of the tissues in PROM with sub-clinical chorioamonitis was significantly higher than that without(P＜0.05).The correlativity between the expression of IL-8 and the time of PROM was not clear(P＞0.05).［Conclusions］The IL-18 could become a predictable index of PROM.

interleukin-18;premature rupture of membrane;immunohistochemistry

R714.259

A

1671-7295(2012)04-0352-03

2012-02-24;

2012-05-20

張茗(1978-)，女，遼寧大連人，碩士，主治醫師。E-mail:lingfeng887463@sina.com