新疆沙棗總黃酮含量的測定及提取工藝的優化

摘要：以蘆丁為對照品，ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ顯色體系為顯色劑，采用分光光度法測定新疆沙棗（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ Ｌ．）果實、樹葉和樹枝中總黃酮的含量。采用正交試驗優化新疆沙棗樹葉中總黃酮的提取工藝。結果表明，新疆沙棗樹葉的總黃酮含量為（１８．７５±０．１１）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３），樹枝和果實的總黃酮含量分別為（１１．７２±０．１2）ｍｇ／ｇ和（８．７５±０．１０）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３）。新疆沙棗樹葉總黃酮的最佳提取工藝為乙醇體積分數７０％，提取時間１．５ ｈ，料液比１∶１２（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ），提取２次。該方法簡單、準確、重復性好。

關鍵詞：新疆沙棗（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ Ｌ．）；總黃酮；工藝優化

中圖分類號：Q949.761.2；R284.2 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）16－3570-02

Determination of Total Flavonoids in Elaeagnus angustifolia from Xinjiang and Optimization of the Extraction Process

ＳＵＮ Ｙｕｎ１，２，ＬＩＵ Ｙｉ３，ＹＡＮ Ｘｕｅ－ｈｕａ１，２，ＤＩＮＧ Ｗｅｎ－ｈｕａｎ２，ＴＩＡＮ Ｓｈｕ－ｇｅ１，２

（１． Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆａｍｏｕｓ Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｆｏｒｍｕｌａｓ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ；

２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ；

３． Ｔraditional Chinese Medine Ｈｏｓｐｉｔａｌ in Ｕｒｕｍｑｉ of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００００，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｆｒｕｉｔ， ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｂｒａｎｃｈ ｏｆ Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ L. ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｗｉｔｈ ｒｕｔｉｎ ａｓ ｓｔａｎｄａｒｄ ａｇｅｎｔ ａｎｄ ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－ＮａＯＨ ｓｙｓｔｅｍ ａｓ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ｒｅａｇｅｎｔ． Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｎ ｌｅａｖｅｓ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｌｅａｖｅｓ， ｂｒａｎｃｈ ａｎｄ ｆｒｕｉｔ ｗａｓ（１８．７５±０．１１），（１１．７2±０．１2），（８．７５±０．１０）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３）， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｅ． ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ ｌｅａｖｅｓ ｗａｓ， ｖｏｌｕｍｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ， ７０％； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， １．５ ｈ； ｍａｔｅｒｉａｌ ｔｏ ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ， １∶１２（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ）； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， ｔｗｉｃｅ． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ， ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ repeatable．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ Ｌ．； ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ

沙棗（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ Ｌ．）屬胡頹子科（Ｅｌａｅａｇｎａｃｅａｅ）胡頹子屬（Ｅｌａｅａｇｎｕｓ）植物，又名香柳、桂香柳、銀柳和七里香等［１］，集中分布在中國東北、西北等地區，在新疆作為防風林被廣泛種植，具有抗旱、抗鹽堿的特性，其自然資源極為豐富。沙棗的枝、葉、花、果都具有開發利用價值，具有較高的經濟價值，被譽為沙荒、鹽堿地的“寶樹”。沙棗維藥名為吉嘎旦［２］，具有健脾胃、止瀉澀腸的作用，用于脾胃虛弱、消化不良、腸炎腹瀉、肺熱咳嗽等疾病的治療。一般每年秋季采摘成熟果實，曬干貯藏于干燥處。沙棗的果實、枝葉、花均能供藥用［３］。從沙棗樹葉粗提后制成的總黃酮片能治療慢性氣管炎，沙棗樹葉的黃酮制劑有緩解冠心病患者的癥狀、減少心絞痛的發病次數及改善心電圖的作用［４］。

近年來對沙棗的研究主要集中在其果實方面，對沙棗樹葉及樹枝的研究較少。試驗測定了新疆沙棗樹葉、樹枝和果實的總黃酮含量，比較了不同部位總黃酮含量的差異；同時對沙棗樹葉總黃酮的提取工藝進行了優化，獲得了最佳提取工藝，可為新疆沙棗資源的開發和合理應用提供參考。

１ 材料與方法

１．１ 材料

沙棗樹葉、樹枝和果實：于２０１０年１１月采自新疆維吾爾自治區昌吉回族自治區州阜康市２２２團場，陰干，密封保存。

試劑：蘆丁對照品購自中國食品藥品檢定研究院，批號１０００８０－２００７０７，純度﹥９８％；其余試劑均為分析純。

儀器：Ｓｐｅｃｔｒｕｍｌａｂ ２２ｐｃ紫外可見分光光度計購自上海棱光技術有限公司，ＢＳ２２０２Ｓ電子天平購自北京賽多利斯儀器系統有限公司，ＤＫ－６００Ａ型電熱恒溫水箱購自上海一恒科技有限公司，ＤＨＧ－９２４０Ａ型電熱恒溫鼓風干燥箱購自上海精宏實驗設備有限公司，ＲＥ－５２旋轉蒸發儀購自上海亞榮生化儀器廠，ＴＤＬ－５型低速臺式離心機購自上海隆拓儀器設備有限公司，ＤＬ－３６０Ａ超聲波清洗器購自上海之信儀器有限公司。

１．２ 方法

１．２．１ 對照品溶液的制備 精密稱取在１０５ ℃干燥至恒重的蘆丁對照品８．４０ ｍｇ，用體積分數為９５％的乙醇定容至５０ ｍＬ容量瓶中，得０．１６８ ｍｇ／ｍＬ對照品溶液，搖勻，備用［５－７］。

１．２．２ 最大吸收波長的確定 精確吸取２．０ ｍＬ蘆丁對照品溶液至２５ ｍＬ容量瓶中，加５０ ｇ／Ｌ ＮａＮＯ２溶液、１００ ｇ／Ｌ Ａｌ（ＮＯ３）３溶液和４０ ｇ／Ｌ ＮａＯＨ溶液為顯色劑，作蘆丁的吸收曲線，在２００～６００ ｎｍ波長下掃描其吸光度，結果表明在５００ ｎｍ處有強吸收峰，故選擇５００ ｎｍ作為測定波長。

１．２．３ 標準曲線的建立 分別準確量取上述蘆丁對照品溶液１、２、３、４、５、６ ｍＬ至２５ ｍＬ容量瓶中，各加去離子水至６ ｍＬ，加５０ ｇ／Ｌ ＮａＮＯ２溶液１ ｍＬ，搖勻，放置６ ｍｉｎ，加１００ ｇ／Ｌ Ａｌ（ＮＯ３）３溶液１ ｍＬ，搖勻，放置６ ｍｉｎ，加４０ ｇ／Ｌ ＮａＯＨ溶液１０ ｍＬ，加去離子水至刻度，搖勻，放置１５ ｍｉｎ，在５００ ｎｍ波長下測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，制作標準曲線。

１．２．４ 供試品溶液的制備 分別準確稱取沙棗果實、樹葉和樹枝粗粉各３０ ｇ，按料液比１∶１０（ｍ／Ｖ，下同）加入體積分數為７０％的乙醇于２５０ ｍＬ容量瓶中，浸泡３０ ｍｉｎ，回流提取２ ｈ，過濾，濃縮，然后用去離子水定容，作為供試品儲備液Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ。

１．２．５ 正交試驗 選取乙醇體積分數、提取時間、料液比和提取次數為考察因素，按照Ｌ９（３４）正交設計優化提取工藝［８－１０］，因素與水平見表1。

２ 結果與分析

２．１ 標準曲線的建立及各種驗證試驗結果

2.1.1 標準曲線的建立結果 以吸光度Ａ為縱坐標，濃度Ｃ為橫坐標，得線性回歸方程：Ａ＝０．１７３ ２Ｃ＋０．０１１ ７，ｒ＝０．９９８ ７。線性范圍為０～０．０４０ ３ ｍｇ／ｍＬ。

２．1.２ 精密度試驗結果 精密吸取上述蘆丁對照品溶液２ ｍＬ置于２５ ｍＬ容量瓶中，共３份，按１．２．３操作分別測定其吸光度。得到變異系數為０．３７％（ｎ＝３），表明儀器的精密度良好。

２．1.３ 穩定性試驗結果 按１．２．４操作制備沙棗樹葉供試品溶液，在波長５００ ｎｍ處測定吸光度，每隔３０ ｍｉｎ測定１次，連續測定４ ｈ，得到吸光度的變異系數為２．８７％，表明供試溶液在４ ｈ內基本穩定。

２．1.４ 重復性試驗結果 按１．２．４操作制備沙棗樹葉供試品溶液６份，在５００ ｎｍ處測定吸光度，得到變異系數為２．２４％，表明方法重復性良好。

２．1.５ 回收率試驗結果 按１．２．４操作精密吸取已知含量的沙棗樹葉供試品溶液６份，每樣吸取１ ｍＬ，分別精密加入蘆丁對照品溶液１ ｍＬ，按１．２．３操作分別測定吸光度，計算回收率和變異系數。得到平均回收率為９９．８９％，變異系數為２．７４％（表２）。

２．2 樣品的測定結果

準確量取供試品儲備液Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各２ ｍＬ，分別置于２５ ｍＬ容量瓶中，按１．２．３操作測定吸光度，由線性回歸方程計算供試品溶液中總黃酮的含量。測得沙棗果實、樹葉和樹枝中總黃酮含量分別為（８．７５±０．１０）、（１８．７５±０．１１）和（１１．７２±０．１2）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３）。試驗結果表明，沙棗樹葉中總黃酮含量最高。

２．3 正交試驗結果

方差分析結果表明，乙醇體積分數對總黃酮的含量有顯著影響。由表３可知，各因素的影響大小為乙醇體積分數＞料液比＞提取時間＞提取次數，新疆沙棗樹葉中總黃酮的最佳提取條件為Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ２，即乙醇體積分數為７０％，提取時間為１．５ ｈ，料液比為１∶１２，提取２次。

２．4 驗證試驗結果

按照最佳提取工藝Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ２進行驗證試驗，結果新疆沙棗樹葉總黃酮的平均含量為（１８．８９±０．０8）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３）。

３ 結論與討論

試驗結果表明，新疆沙棗樹葉的總黃酮含量最高，其次為沙棗樹枝，沙棗果實中最低。在乙醇體積分數為７０％，提取時間為１．５ ｈ，料液比為１∶１２，提取２次的最佳提取工藝條件下，新疆沙棗樹葉的總黃酮含量可達（１８．８９±０．０8）ｍｇ／ｇ（ｎ＝３）。試驗結果表明，沙棗的樹葉和樹枝中總黃酮含量豐富，具有廣泛的開發和應用價值。研究為今后新疆沙棗資源的開發應用提供了新的思路和方法。

參考文獻：

［１］ 中國科學院中國植物志編輯委員會．中國植物志（第５２卷）：第２分冊［Ｍ］．北京：科學出版社，１９８３．

［２］ 劉勇民． 維吾爾藥志（上冊）［Z］．烏魯木齊：新疆科技衛生出版社，１９９９．

［３］ 南京中醫藥大學．中藥大辭典（上冊）［Z］．上海：上海科學技術出版社，１９９７．

［４］ 劉媖心，楊喜林，姚育英．中國沙漠植物志（第２卷）［Ｍ］． 北京：科學出版社，１９８７．

［５］ 李 紅，郅 潔，馬彥梅，等．沙棗黃酮的提取及其抗氧化作用的研究［Ｊ］．時珍國醫國藥，２０１０，２１（１）：３５-36．

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