紫外－可見分光光度法測定楓葉中的單寧

摘要：采用紫外－可見分光光度法在２７５ ｎｍ處對楓葉中單寧的含量進行測定。結果表明，紫外分光光度法測單寧的線性關系良好，回歸方程為Ａ＝３７．２４９c－０．００１ ８，Ｒ２＝０．９９９ ６，平均回收率為９９．９４％，ＲＳＤ＝０．７０％，該法測定楓葉中單寧的含量簡便、快速、準確。

關鍵詞：楓葉；單寧；紫外－可見分光光度法

中圖分類號：Ｏ６５７．３２ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）16－3590-02

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｎｎｉｎ ｉｎ Ｍａｐｌｅ Ｌｅａｆ ｂｙ ＵＶ-Vis Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

ＪＩＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｚｈｉ１，ＪＩＡＮＧ Ｒｏｎｇ－ｚｈｉ２，ＹＩ Ｃhｏｎｇ－ｋｕａｎ１

（１． Ｇｕａｎｇｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｖｏｃａｔｉｏｎ－Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００７， Ｃｈｉｎａ；

２． Ｗｕｚｈｏｕ Ｍａｔｅｒｎａｌ ＆ Ｃｈｉｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｗｕｚｈｏｕ ５４３００２， Ｇｕａｎｇｘｉ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔａｎｎｉｎ ｉｎ ｍａｐｌｅ ｌｅａｆ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｔ ２７５ ｎｍ ｂｙ ＵＶ－Ｖｉｓ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔs ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ， ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｗａｓ Ａ＝３７．２４９c－０．００１ ８， Ｒ２＝０．９９９ ６， ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９９．９４％ ｗｉｔｈ ＲＳＤ ｏｆ ０．７０％． Ｉｎ ａ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ， ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ， ｒａｐｉｄ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔａｎｎｉｎ ｉｎ ｍａｐｌｅ ｌｅａｆ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｍａｐｌｅ ｌｅａｆ； ｔａｎｎｉｎ； ＵＶ－Ｖｉｓ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

單寧又稱單寧酸、鞣酸，通常指相對分子量在５００～３ ０００ Da，能沉淀蛋白質、生物堿的水溶性多酚化合物。這類化合物廣泛存在于植物的葉、果、根及皮等部位，常用于醫藥、食品、制革、日用化學品、水處理等領域［１］。特定分子結構的單寧具有生理活性，能與生物體內的蛋白質、多糖、核酸等發生作用。食物中過量的單寧會產生抗營養作用，如降低蛋白質的營養價值、影響機體對維生素Ａ和維生素Ｂ１２的攝取［２］，單寧還具有收斂和抗菌作用［３］。單寧作為功能性組分，可用于生產食品添加劑、風味劑等；在化妝品中主要起收斂、防曬、美白、抗皺、保濕和防腐等作用［２］。

楓樹，別名楓香樹、大葉楓、雞爪楓，落葉喬木，葉為掌狀３裂或５淺裂，春天葉片呈綠色，秋季為紅色，常以根、葉、果及樹脂入藥，夏季采葉，全年采根。根性味苦、溫，可祛風止痛，用于風濕性關節痛、牙痛。葉性味苦、平，可祛風除濕、行氣止痛，用于腸炎、痢疾和胃痛等癥，外用治毒蜂螫傷，皮膚濕疹［４］。

目前，單寧測定方法包括皮粉法、干酪素法、膠體滴定法、絡合滴定法、氧化滴定法、分光光度法及高效液相色譜法等。皮粉法步驟繁瑣，誤差較大。高錳酸鉀滴定法終點誤差大，絡合滴定法在堿性條件下操作，鞣酸不穩定，而干酪素法操作復雜［２，３］。紫外－可見分光光度法操作簡便、快速，準確度高。本文采用紫外－可見分光光度法測定楓葉中單寧的含量，為快速分析單寧提供參考。

１ 材料與方法

１．１ 材料

單寧對照品，購于ｓｉｇｍａ公司，分析純；去離子水。

１．２ 儀器

Ｔ６新世紀紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；ＡＬ２０４電子天平（梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司）；ＨＨ－Ｓ數顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市醫療儀器廠）。

１．３ 方法

１．３．１ 貯備液配制 準確稱取單寧０．０１０ ０ ｇ，用去離子水定容至１００ ｍＬ，配制成０．１０ ｍｇ／ｍＬ單寧貯備液。

１．３．２ 波長選擇 吸取上述貯備液５．０ ｍＬ，以去離子水定容于２５ ｍＬ，配制０．０５ ｍｇ／ｍＬ的單寧溶液，于２００～４００ ｎｍ測定其紫外－可見光譜圖。

１．３．３ 繪制標準曲線 精確吸取不同體積的貯備液（０～５．０ ｍＬ）于２５ ｍＬ比色管中，加去離子水至刻度，搖勻，在２７５ ｎｍ測定吸光度，繪制標準曲線。

１．３．４ 溫度對單寧提取效果的影響 分別稱取１０．００ ｇ經粉碎的葉、莖、皮，放入不同的燒杯中，各加去離子水１００ ｍＬ，水浴加熱，在不同溫度下提取３０ ｍｉｎ，冷卻，過濾，定容至１００ ｍＬ，稀釋后在最大吸收波長處測定樣品吸光度，公式：單寧含量//ｍｇ/１００ ｇ ＝ ｃ×稀釋倍數×１ ０００，計算單寧含量。其中，ｃ為回歸方程中吸光度對應的單寧濃度，單位ｍｇ／ｍＬ。

１．３．５ 時間對單寧提取效果的影響 稱取１０．００ ｇ葉末樣品，加去離子水１００ ｍＬ，１００ ℃水浴加熱，提取不同時間，冷卻，過濾，定容至１００ ｍＬ，在最大吸收波長處測定提取液的吸光度，計算單寧含量。

１．３．６ 料液比對單寧提取效果的影響 稱取１０．００ ｇ葉末樣品，按不同的料液比加去離子水，１００ ℃水浴加熱，提取３０ ｍｉｎ，冷卻，過濾，定容至１００ ｍＬ，在最大吸收波長處測定提取液的吸光度，計算單寧含量。

２ 結果與分析

１）單寧的紫外－可見光譜圖。由圖１可知，單寧的測定波長為２７５ ｎｍ。根據標準曲線，得其回歸方程為Ａ＝３７．２４９ｃ－０．００１ ８，Ｒ２＝０．９９９ ６，在０～０．０２ ｍｇ／ｍＬ濃度范圍內線性關系良好。

２）溫度對單寧提取效果的影響。由圖２可知，楓葉不同部位單寧含量大小為：皮＞葉＞莖，１００ ℃提取的單寧含量最高。由于前處理簡單，樣品粉碎后均一，故后續試驗選用葉做原料，１００ ℃水浴提取。

３）時間對單寧提取效果的影響。由圖３可知，提取時間為３０ ｍｉｎ時效果最好。

４）料液比對單寧提取效果的影響。由圖４可知，隨著料液比增大，單寧提取效果下降，料液比為１∶３．３時提取效果較好。

５）精密度試驗。取同一批樣品分別制備５份樣品溶液，測定吸光度并計算單寧的含量，結果見表１。由表１可知，測定結果的相對標準偏差（ＲＳＤ）為２．３６７％。

６）回收率試驗。取已測得單寧含量的楓葉提取液０．５ ｍＬ，再加０．１０ ｍｇ／ｍＬ單寧對照品溶液１．５ ｍＬ，按上述方法測定，計算回收率。結果見表２。由表２可知平均回收率為９９．９４％。

３ 結論

用水作為提取劑，提取楓葉中單寧，在料液比為１∶３．３，１００ ℃水浴加熱３０ ｍｉｎ，采用紫外－可見分光法測定楓葉中的單寧達到３ ０６７ ｍｇ／１００ ｇ，不同楓葉部位的單寧含量依次為：皮＞葉＞莖。該方法的平均回收率為９９．９４％±０．７０％，ＲＳＤ為０．７０％，回收率高且重現性好，操作簡單快速，結果可靠。

參考文獻：

［１］ 但衛華，程鳳俠．制革化學及工藝學［Ｍ］． 北京：中國輕工業出版社，２００６．

［２］ 王全杰，任方萍，高 龍．植物單寧的含量測定方法［Ｊ］．西部皮革，２０１０，３２（２３）：２６－３１．

［３］ 李春華，沈國榮，府子琪．鞣酸軟膏中鞣酸的含量測定［Ｊ］．兒科藥學雜志，２００８，１４（５）：３８－３９．

［４］ 《全國中草藥匯編》編寫組．全國中草藥匯編［Ｍ］．北京：人民衛生出版社，１９７６．