薰衣草離體培養技術研究

摘要：以薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）帶芽莖段或頂芽為外植體，探討不同激素種類與水平等對其愈傷誘導、不定芽增殖與不定根形成的影響，并篩選了薰衣草試管苗過渡移栽的適宜基質。結果表明薰衣草離體培養適宜的培養基分別為，不定芽啟動培養基，ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ；繼代增殖培養基，ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ；生根培養基，Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ或Ｗｈｉｔｅ＋ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ。以等體積的泥炭與珍珠巖混合后作為基質馴苗，幼苗成活率可達９６．９％。

關鍵詞：薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）；離體培養；培養基

中圖分類號：Ｓ５７３＋．９；Ｑ９４５．５１文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）03－0623-03

Ｓｔｕｄy ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ

ＳＵ Ｃｈｅｎ

（Ｘｉａｎｇｆａｎ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｘｉａｎｇｙａｎｇ ４４１０２１，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｓｔｅｍ ｏｒ ｔｉｐ ｂｕｄ ｏｆ Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ ａｓ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｈｏｒｍｏｎｅ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ｏｎ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ， ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ， ａｎｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔｓ ｗere ｓｔｕｄｉｅｄ； Aｎｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｇｒｏｕｎｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌ． ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ ｓｅｅｄｌｉｎｇ was screened out． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅｔｔｅｒ ｂｅ ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ． ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ ｗａｓ ｇｏｏｄ ｆｏｒ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ． Ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ＋ ｓｕｃｒｏｓｅ ２０ ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ ｏｒ Ｗｈｉｔｅ＋ ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ＋ ｓｕｃｒｏｓｅ ２０ ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｕｓｉｎｇ ｍｉｘｅｄ ｐｅａｔ ａｎｄ ｖｅｒｍｉｃｕｌｉｔｅ ｗｉｔｈ ｅｑｕａｌ ｖｏｌｕｍｅ ａｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｎｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｗａｓ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒｙ ｔｏ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ａｓ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ ９６．９％

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ； ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｔｉｖａｔｉｏｎ； ｍｅｄｉｕｍ

薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）為唇形科薰衣草屬多年生植物，用途廣泛，其干燥花在醫藥上可作為鎮靜、驅風、利尿、興奮、強壯藥，提取的精油可作為高級香水、香皂、洗滌用品的香料，近年來作為園林觀賞植物受到廣泛關注，極具開發利用前景［１－３］。但我國栽培薰衣草品種主要依靠從國外引種，且種子萌芽率低，給薰衣草生產快速發展帶來困難。目前薰衣草離體培養與植株再生技術的研究已有少量報道［４－８］，本試驗以法國選育的薰衣草品種為材料，在已有的薰衣草離體培養技術的基礎上，進一步探討建立薰衣草植株再生體系進行無性快繁的技術，為實現薰衣草優良品種種苗規模化育苗奠定技術基礎。

１材料與方法

１．１材料

薰衣草種子為法國進口，種植于襄樊職業技術學院試驗基地，于２００９年４月從薰衣草母株上采取生長健壯的帶芽莖段作為外植體。

１．２方法

１．２．１外植體表面滅菌將采取的帶芽莖段帶回實驗室，去葉并剪切成３～４ ｃｍ長的莖段，用飽和洗滌液浸泡５～１０ ｍｉｎ，流水沖洗２０～３０ ｍｉｎ，在超凈工作臺上用７５％的乙醇浸泡３０ ｓ，再用０．１％的ＨｇＣｌ２浸泡６～７ ｍｉｎ，最后用無菌水沖洗３～４次，每次１～２ ｍｉｎ，用無菌紙吸干水分，以備接種。

１．２．２啟動培養取已表面滅菌的材料，切割成１～２ ｃｍ長的帶１芽莖段，接種于啟動培養基上，以獲得無菌材料，３５ ｄ后統計萌芽率。啟動培養基以ＭＳ為基本培養基，添加不同水平的ＢＡ（０．１、０．５、１．０、２．０ ｍｇ／Ｌ）。

１．２．３繼代增殖培養啟動培養中獲得的無菌材料切成長約２ ｃｍ的帶１芽莖段，接種于增殖培養基中，增殖培養基以ＭＳ為基本培養基，添加不同水平的ＢＡ（０．１、０．５、１．０、２．０、３．０ ｍｇ／Ｌ）和不同水平的ＩＢＡ（０．１０、０．２５、０．５０ ｍｇ／Ｌ）組合，共１５個處理。３０ ｄ后統計增殖率，以篩選適宜的增殖培養基。

１．２．４生根培養將叢芽分割成２～３ ｃｍ高帶３～４葉的單芽，接種于誘導生根培養基中，生根培養基以Ｗｈｉｔｅ為基本培養基，添加不同水平的ＩＢＡ（０．１、０．４、０．８ ｍｇ／Ｌ）或不同的水平ＮＡＡ（０．１、０．４、０．８ ｍｇ／Ｌ），并以Ｗｈｉｔｅ為對照，共７個處理。２５ ｄ后統計生根率，以篩選適宜的生根培養基。

以上啟動培養基、增殖培養基中添加蔗糖３０ ｇ／Ｌ，生根培養基中添加蔗糖２０ ｇ／Ｌ，3種培養基均添加瓊脂６．５ ｇ／Ｌ、ｐＨ為５．８～６．２；高溫高壓濕熱滅菌２０ ｍｉｎ。培養條件均為：光照強度１ ５００～２ ０００ ｌｘ，溫度（２３±１）℃，光照時間１３ ｈ／ｄ。

１．２．５試管苗過渡移栽當試管苗不定根長０．８～１．０ ｃｍ，苗高３～４ ｃｍ時，從培養瓶中取出，洗凈基部培養基，用６００～８００倍多菌靈稀釋液浸泡基部２～３ ｍｉｎ（藥浴）后，種植于不同基質中進行過渡移栽，同時采取適度降溫、遮光、增濕等技術措施，以提高試管苗過渡移栽成活率。過渡移栽基質設泥炭、泥炭與珍珠巖等體積混合、蛭石、珍珠巖等４個處理，２５ ｄ后統計成活率。

２結果與分析

２．１培養基中ＢＡ濃度對薰衣草愈傷與腋芽萌動的影響

帶芽莖段接種于啟動培養基上，５～７ ｄ時腋芽始萌發，３０～３５ ｄ時部分形成叢生芽。試驗結果（表１）表明，腋芽萌發率有隨啟動培養基中ＢＡ濃度的提高而升高的趨勢。在ＢＡ濃度為２．０ ｍｇ／Ｌ時，腋芽萌發率最高，不定芽數量多；在ＢＡ濃度較低時，不定芽數量少，但芽健壯、長勢旺，綜合兩方面因素，薰衣草啟動培養以ＭＳ培養基添加ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ的效果最好。

２．２激素種類與水平對薰衣草不定芽增殖的影響

帶芽莖段接種于繼代增殖培養基上，３～５ ｄ后芽陸續萌發，２５～３５ ｄ時再次形成不定芽叢。試驗結果（表２）表明，繼代增殖培養基中添加的ＢＡ與ＩＢＡ水平不同，芽的增殖率與長勢存在顯著差異。增殖率與ＢＡ濃度密切相關，在試驗濃度范圍內，增殖率先隨ＢＡ濃度的升高呈升高趨勢，但ＢＡ濃度過高時，增殖率有所下降，且芽的長勢減弱。后續試驗也表明，ＢＡ濃度為３．０ ｍｇ／Ｌ時，隨繼代次數增加，不定芽出現玻璃化現象，不利于后期成苗。增殖率與ＩＢＡ濃度亦表現出一定的相關性，在試驗濃度范圍內，ＩＢＡ濃度為０．２５ ｍｇ／Ｌ時增殖率最高。因此，薰衣草不定芽增殖培養中，ＭＳ培養基添加ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ和ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ增殖效果好，叢芽壯。

２．３激素種類與水平對薰衣草不定根形成的影響

單芽接種于生根培養基上，７～１０ ｄ時切口處出現白色根狀突起，試驗結果（表３）表明，Ｗｈｉｔｅ添加ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ或ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ時生根率較高，但添加ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ時根稍壯。

２．４不同基質對薰衣草試管苗過渡移栽成活率的影響

用等體積的泥炭與珍珠巖混合后做基質，試管苗生長快，過渡移栽成活率可達９６．９％，苗質優良；而以蛭石做基質，試管苗生長緩慢，且過渡移栽成活率最低，為８２．０％（表４）。此外，移栽試驗表明，薰衣草試管苗苗齡２０～２５ ｄ，根長０．８～１．０ ｃｍ時，試管苗生理活性旺，根吸收能力強，且此時期移栽不易傷根，成活率高。

３結論

本試驗結果表明，薰衣草離體培養適宜的培養基分別為：不定芽啟動培養基ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ；繼代增殖培養基，ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ；不定根分化培養基，Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ或Ｗｈｉｔｅ＋ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋瓊脂６．５ ｇ／Ｌ；以等體積的泥炭與珍珠巖混合后作為基質馴苗，幼苗成活率可達９６．９％。

參考文獻：

［１］ 陳和平，周賀新，賀瑞振，等． 薰衣草的研究進展［J］． 農墾醫學，2005，27（2）：142-145.．

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［６］ 許耀祖，王曉軍，趙民安，等． 薰衣草高頻植株再生系統的建立［Ｊ］． 西南農業大學學報（自然科學版），２００５，２７（３）：３４４－３４９．

［７］ 許耀祖，王曉軍，趙民安，等． 幾種生物學因子對薰衣草胚性愈傷組織懸浮培養生長的影響［Ｊ］． 生物技術通訊，２００５，１６（１）：３４－３６．

［８］ 周輝明，陳燕，羅慶國． 薰衣草的組織培養和快速繁殖［Ｊ］． 三明農業科技，２００６（３）：１２．

（責任編輯向闈）

收稿日期：２０１１－０８－１６

基金項目：湖北省襄陽市科技攻關項目

作者簡介：蘇琛（１９６８－），女，河北高碑店人，實驗師，主要從事園藝與生物技術實踐教學、研究與推廣工作，（電話）１３４８７１３１９１６（電子信箱）

ｄａｊｉｅ１９６８＠１２６．ｃｏｍ。