清遠市腫眼肉雞病原診斷和藥敏試驗

許華

摘要：廣東省清遠地區３群肉雞臨床表現不同程度的腫眼、流鼻水等癥狀，臨床治療處理效果不理想。在3群病雞中各取病雞鼻竇腔分泌液進行細菌分離培養、革蘭氏和瑞氏染色，并對分離菌株進行了玻片凝集和生化試驗。結果表明，革蘭氏染色呈陰性，瑞氏染色呈藍色，油鏡下可見細菌呈短桿菌或球桿菌，兩極著色，３群分離株均與副雞嗜血桿菌Ａ型血清完全凝集反應，與Ｂ和Ｃ型血清無凝集反應，確定腫眼肉雞病原為Ａ型副雞嗜血桿菌。同時選用多種藥物研究了該病原菌的藥敏性，結果顯示，Ａ型副雞嗜血桿菌對頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素３種藥物均表現極敏。

關鍵詞：副雞嗜血桿菌；病原診斷；藥敏試驗

中圖分類號：Ｓ８５２．６１文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）04－0782-03

副雞嗜血桿菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｇａｌｌｉｎａｒｕｍ，ＨＰＧ）是引起雞上呼吸道疾病的一種致病菌，俗稱雞傳染性鼻炎，以鼻腔和鼻竇發炎、流鼻汁、臉部腫脹和眼結膜炎為主要特征。１９２０年，Ｂｅａｃｈ首先報道該病，Ｄｅｂｌｉｅｋｃ于１９３１年首次分離到了該病的病原菌［１］。本病呈世界性分布，主要引起產蛋雞的產蛋量下降，育成雞的生長發育緩慢，給養禽業造成很大的經濟損失。我國從１９８０年起就有許多疑似該病的病例出現，馮文達［２］于１９８７年首先在北京分離到１株病原菌。２０１０年１１月，廣東省清遠市某肉雞養殖合作社３群肉雞表現不同程度的腫眼、流鼻水癥狀，并有嚴重的呼吸道疾病，病雞表現為精神沉郁、咳嗽、腫頭等癥狀，雞群經治療處理，效果不理想，死淘較大，給肉雞合作社農戶造成較大的經濟損失。筆者對這３群發病肉雞的病原菌進行了分離鑒定，同時進行了藥物敏感試驗，旨在篩選出臨床上有效治療該致病菌株的敏感藥物，為防治該病提供一定的參考。

１材料與方法

１．１材料

病料采集于廣東省清遠市某肉雞養殖合作社（３群，分群采集），副雞嗜血桿菌A、B、C 3種血清型的陽性血清均購自中國獸醫藥品監察所；常規培養基、生化試劑和藥敏紙片購于杭州天和微生物試劑有限公司。

１．２方法

１．２．１細菌分離培養在無菌操作條件下，用棉拭子蘸取病雞鼻竇腔內分泌物，劃線接種于巧克力瓊脂培養基，置于３７ ℃恒溫箱燭缸培養２４ ｈ，之后挑取單個菌落進行純培養。分群采集，培養。

１．２．２染色鏡檢挑取單個菌落進行革蘭氏染色及瑞氏染色，在光學顯微鏡下觀察細菌的形態特征。

１．２．３血清學鑒定采用快速血清平板凝集試驗方法，取所分離純培養的各菌株分別與副雞嗜血桿菌的Ａ、Ｂ、Ｃ 3種血清型的陽性血清分別進行玻片凝集試驗。

１．２．４生化試驗對所分離的３株病原菌進行葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和海藻糖發酵試驗，并進行接觸酶、吲哚試驗、硝酸鹽還原試驗及Ｈ２Ｓ試驗等生化指標的測定。

１．２．５藥敏試驗細菌純培養后，挑選分離的單個菌落，用無菌生理鹽水洗下混勻，?。埃?ｍＬ接種于巧克力培養基上涂布均勻，均勻貼上各藥敏紙片，置于３７ ℃恒溫箱燭缸培養２４ ｈ后觀察結果，并記錄抑菌圈直徑大小。

２結果與分析

２．１菌落形態、染色、鏡檢和血清學鑒定結果

對臨床的３群肉雞均分離到疑似副雞嗜血桿菌菌株，具體表現為在巧克力培養基上形成灰白色、邊緣整齊、光滑隆起、半透明、針尖大小、露珠樣的菌落。由表1可知，３群肉雞分離的菌株革蘭氏染色陰性，瑞氏染色藍色，油鏡下可見細菌呈短桿菌或球桿菌，兩極著色，３群肉雞病原分離株與副雞嗜血桿菌的Ａ型陽性血清均發生完全凝集反應，而與其他兩種血清均無凝集反應，故鑒定這３群分離菌株為Ａ型副雞嗜血桿菌。

２．２生化試驗結果

生化試驗結果見表2，３群肉雞病原分離菌株的生化特性完全一致，即細菌不發酵海藻糖，發酵葡萄糖、蔗糖和麥芽糖；能還原硝酸鹽，吲哚試驗陰性，接觸酶陰性，不產生Ｈ２Ｓ。

２．３藥敏試驗結果

由表3可見，該病原菌對頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素極敏，對丁胺卡那、阿莫西林高敏，對多西環素中敏，對泰樂菌素低敏，對磺胺嘧啶不敏感。

３小結與討論

本研究通過巧克力燭缸培養，Ａ型副雞嗜血桿菌分離率較高，屬于致病菌，由于該次培養未能完全達到５％ ＣＯ２培養箱的條件，導致菌株生長不良，出現菌落數偏少的現象。

本研究３群清遠肉雞病原分離菌株在生化特性上表現為發酵葡萄糖、蔗糖和麥芽糖，而且分離菌株能還原硝酸鹽，接觸酶陰性，吲哚試驗陰性，不產生Ｈ２Ｓ，這些結果與羅廷榮等［３］確定副雞嗜血桿菌的生物化學特性完全一致；３群肉雞病原菌分離株與副雞嗜血桿菌的Ａ型陽性血清產生均完全凝集反應，而與其他兩種血清均無凝集反應。由以上這些特性可鑒定這３群分離菌株均為Ａ型副雞嗜血桿菌，說明目前清遠地區肉雞Ａ型副雞嗜血桿菌的流行占據主導地位［４］。但從近年的文獻報道來看，我國部分地區已經有Ｂ、Ｃ型副雞嗜血桿菌的存在［５－７］，呈現為近年來我國雞傳染性鼻炎流行的新特點。因此，養殖過程中對肉雞進行免疫時應注意該流行病的這一特點，同時在疫苗研發時也應注重多價苗或全價苗的研究與開發［８］。雖然，目前肉雞的鼻炎疫苗均有效，但菌苗的保護率一般不能達到１００％，所以肉雞養殖過程中需要增強雞群的抵抗力，做好環境的消毒及病雞的隔離。由于康復帶菌雞是主要的傳染源，所以肉雞合作社各存欄雞舍內的動物用具要做好隔離，以避免病原菌的群間傳播。

從藥敏試驗結果發現，Ａ型副雞嗜血桿菌對頭孢噻呋、氟苯尼考、青霉素、丁胺卡那和阿莫西林都表現出了很高的敏感性，其中對頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素這３種藥物的敏感性最高。根據本研究藥敏試驗結果，筆者選用了頭孢噻呋、氟苯尼考和青霉素這３種極敏感藥物對該肉雞養殖合作社３個發病雞群進行了注射治療，同時投服藥物輔助治療，并補充電解多維等增強肉雞機體抵抗力，結果發現雞群采食量逐漸恢復，精神好轉，呆立、嗜睡雞明顯減少，４ ｄ后基本恢復正常。因此，肉雞感染Ａ型副雞嗜血桿菌后可以考慮選擇這３種藥物進行臨床治療。治療時，除了注射給藥和口服給藥外，也可考慮滴鼻或者噴霧治療。

參考文獻：

［１］ ＰＯＥＲＮＯＭＯ Ｓ， ＳＵＴＡＲＭＡ， ＲＡＦＩＥＥ Ｍ，ｅｔ ａｌ． Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉzａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｇａｌｌｉｎａｒｕｍ ｆｒｏｍ Ｉｎｄｏｎｅｓｉａ［Ｊ］． Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０００，７８（１１）：７５９－７６２．

［２］ 馮文達． 北京雞傳染性鼻炎病原菌分離及鑒定［Ｊ］． 微生物學通報，１９８７（５）：２１６－２１９．

［３］ 羅廷榮，艾博特，梁家權，等． 二株副雞嗜血桿菌分離株的生物學特性鑒定［Ｊ］． 中國預防獸醫學報，２０００，２２（３）：１７０－１７３．

［４］ 馬艷平，張杰，陳豪泰，等． 副雞嗜血桿菌的分離鑒定［Ｊ］． 西南農業學報，２００９，２２（３）：８３４－８３７．

［５］ 張培君，苗得園，龔玉梅，等． Ｂ型副雞嗜血桿菌的分離鑒定［Ｊ］． 中國預防獸醫學報， ２００３，２５（１）：５６－５８．

［６］ 孫慧玲，苗得園，王艷平，等． Ｂ型副雞嗜血桿菌北京株的分離與鑒定［Ｊ］． 中國獸醫雜志，２００５，４１（２）：２８－２９．

［７］ 張培君，陳小玲，苗得園． 雞傳染性鼻炎流行學調查（Ⅱ）［Ｊ］． 中國獸藥雜志，２００１，３５（１）：２１－２３．

［８］ 苗得園，孫惠玲，陳曉峰，等． 副雞嗜血桿菌的分離鑒定及我國雞傳染性鼻炎的流行狀況分析［Ｊ］． 中國預防獸醫學報，２００６，２８（４）：３９２－３９５．