云南紅河和文山地區女性宮頸人乳頭瘤病毒感染基因亞型分布狀況研究

趙菊芬，李 茜，張 琴，楊柳風，霍竹蕙，段麗婭

子宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，在全球婦女癌癥死亡率中位居第二。高危型人乳頭狀瘤病毒 (HPV)的持續感染是宮頸癌及其癌前病變的直接原因，對HPV感染的檢測是診斷宮頸病變的重要依據［1］。HPV感染具有很強的地域性，不同國家與地區HPV感染基因分型的流行病學分布不同。為了解云南紅河和文山多民族地區HPV感染流行病學特征，我院采用凱普醫用核酸分子快速導流雜交基因芯片技術，對來自云南紅河和文山多民族地區的2 887名女性進行生殖道21種HPV感染基因亞型篩查，分析常見感染亞型及分布特點，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2009年3—9月在我院就診的來自云南省紅河和文山兩個多民族地區的女性2 887名，年齡20～79歲，平均年齡 (38.9±2.4)歲。均無盆腔放療、化療史。

1.2 儀器與試劑 HPV－DNA提取試劑盒、聚合酶鏈式反應(PCR)擴增儀、凱普Hybrimax醫用核酸分子快速雜交儀，HPV基因微陣列分型檢測試劑盒。

1.3 標本采集和處理 采用凱普公司配套專用宮頸刷置于宮頸口，沿順時針旋轉5周獲得足夠的移行區上皮細胞樣本取出，放入3 ml專用細胞保存液中，沿刷柄折痕處將宮頸刷柄折斷，旋緊管蓋，做好樣本標記，立即送檢。

1.4 檢測方法 HPV感染基因亞型檢測步驟:(1)樣本DNA提取:取標本500μl，以14 000 r/min離心1 min，棄上清液后，用試劑盒提取DNA。(2)PCR擴增:將PCR試劑及Taq酶按比例混合后在反應管加入24μl，混合后進行PCR擴增。每一批同時擴增HPV 18型陽性對照及陰性對照各一份。(3)核酸分子快速導流雜交:采用凱普醫用核酸分子快速雜交儀及配套試劑盒，在雜交平臺上放入標記有21種HPV基因型寡核苷酸探針的低密度基因芯片雜交膜，按試劑盒說明進行導流雜交，酶標顯色。(4)結果判斷:肉眼觀察檢測結果，陽性點為清晰可見的藍紫色圓點，根據膜條HPV分布圖，判斷陽性點為何種類型的HPV。本檢測將HPV分為21種基因亞型，其中13種高危亞型為:16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，5種低危亞型為:6、11、42、43、44，中國人常見亞型為:53、66、CP8304。

1.5 統計學方法 采用SPSS 11.5統計軟件進行統計學分析，計數資料采用χ2檢驗，p＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV基因型分布 2 887名女性中有406名感染HPV，總陽性率為14.1%，21種基因亞型均被檢出。HPV各亞型感染率分布從高到低依次為 HPV 68(24.1%，98/406)、16(19.5%，79/406)、52(13.5%，55/406)、58(9.6%，39/406)、18(9.1%，37/406)、31(8.1%，33/406)、6(6.8%，28/406)、33(5.7%，23/406)、CP8304(5.2%，21/406)、43(4.2%，17/406)、39(3.9%，16/406)、11(3.9%，16/406)、53(3.4%，14/406)、59(2.7%，11/406)、66 (2.0%，8/406)。44 (1.0%，4/406)、56(1.0%，4/406)、35(1.0%，4/406)、45(0.7%，3/406)、51(0.7%，3/406)、42(0.2%，1/406)型。高危型中排列前5位的是:68、16、52、58、18;低危型中最常見的是:6、43;中國人常見亞型:CP8304。

2.2 不同年齡組女性HPV感染基因亞型檢出情況比較2 887名女性按不同年齡段分為3組，20～35歲組1 328例、36～45歲組1 168例、＞45歲組391例。HPV感染人群中以高危亞型 (包括單純高危感染及高低危混合感染例數)為主，占82.8%(336/406)。3組的HPV感染檢出率及類型比較，差異均無統計學意義 (P＞0.05，見表1)。

表1 不同年齡組女性HPV感染基因亞型檢出情況比較〔n(%)〕Table1 Comparison of HPV subtype detection between different age groups of women

2.3 不同年齡組女性HPV單一感染和多重感染率比較2 887名女性HPV感染陽性406例，其中單一感染330例，占81.3%;二重感染57例，占14.0%;三重感染15例，占3.7%，四重感染3例，占0.7%，六重感染1例，占0.2%;無五重感染;感染最多的有6個亞基因型，僅有1例樣本。3組單一感染與多重感染率比較，差異均無統計學意義 (P＞0.05，見表2)。

表2 不同年齡組女性HPV單一感染和多重感染率比較〔n(%)〕Table 2 Comparison of HPV single infection and multiple infections between different age groups of women

3 討論

近年來，女性生殖道的HPV感染由于與宮頸癌密切相關而越來越受到人們的重視。HPV基因分型檢測方法在評價宮頸癌前病變和宮頸癌的流行及發生方面，被認為是一種初篩宮頸癌較好的方法［2］。高危型HPV的持續感染是宮頸癌及其癌前病變的直接病因，沒有持續高危的HPV感染，便沒有可能發生宮頸癌。HPV感染的檢測已成為預防、診斷、處理宮頸病變的重要依據［1］。

3.1 HPV感染率及基因亞型存在地區差異 本研究利用導流雜交技術對云南省紅河和文山2個多民族地區的2 887名女性的宮頸HPV感染基因亞型進行檢測，HPV感染406例，總感染率為14.1%，高于馮淑燕等［3］報道的福建廈門市思明區1 026例育齡婦女11.6%的感染率;低于沈艷紅等［4］報道的山西省子宮頸癌高發區30～50歲婦女27.55%的感染率和彭秀紅等［5］報道的廣東674例年輕女性23.33%的感染率以及周楊楊［6］報道的淮安457例婦女55.6%的感染率。與彭永排等［7］報道廣州市1 285例20～74歲女性17.7%的感染率相近。高危型HPV持續感染是宮頸癌及癌前病變發生發展的必要條件，在國際癌癥協會 (IARC)的最新研究中，15種最常見的亞型分別為 16、18、45、31、33、52、58、35、59、51、73、68、66、53和83［8］。但上述研究未包括中國人。除16亞型外，18亞型感染率最高;居第3位的在非洲、南亞、歐洲、北美是45亞型，而在美國中南部則為31亞型;居第4位的在非洲北部是33和31，非洲南部則是33、58和56亞型，美國中南部是45和33亞型，南亞是52和58亞型，歐洲和北美是31和56、58亞型［9］。日本52亞型居第2位，韓國33和58亞型分別居第2、3位。目前，全世界HPV感染基因亞型最常見的是16，中國人中16、18、52、58、31、33是常見亞型［10］，其他常見亞型存在地區差異。本研究結果顯示，HPV 68感染率最高，HPV 16為第2位，HPV 52、58為第3、4位，與世界范圍的研究不太一致。但HPV 52、58僅次于HPV 16，這一點符合亞洲人群研究結果。與我國境內其他地區相比，HPV常見基因亞型也有一定地區差異:浙江省臺州地區常見基因亞型依次為16、11、52、33、58;北京地區常見基因亞型依次為16、58、52、53、33;西安地區常見基因亞型依次為16、6、39、58、11;廣州地區宮頸癌常見基因亞型為:16、52、58、68、33、53、59、CP3804、44［2］。本研究中云南紅河和文山多民族地區常見HPV感染基因亞型依次為68、16、52、58、18、31型。楊英捷等［11］研究北京地區女性，陶萍萍等［12］研究紹興地區女性，結果均提示HPV感染基因亞型除16、52、58型外，CP8304在我國最常見。本研究結果顯示，中國人常見HPV感染基因亞型仍為CP8304，與上述研究結果一致。但本研究中高危亞型HPV 68感染率最高，與其他研究結果均有所不同，最常見低危亞型HPV 6、43感染率與其他研究結果一致。表明HPV感染常見基因亞型具有明顯的人群和地域特點。

3.2 HPV感染的年齡分布 目前對HPV感染與年齡的相關性有不同觀點。我國對山西省子宮頸癌高發區30～50歲女性HPV感染的調查結果顯示，不同年齡女性HPV感染率無明顯差異［4］。楊英捷等［11］報道北京地區女性各年齡段HPV感染檢出率差異有顯著性意義。王魯平等［1］報道北京地區各年齡組女性HPV感染無差異，但年齡是HPV感染的重要因素，30歲以前的性活躍期，HPV感染頗為常見且易于清除;30歲以后HPV感染率下降，但隨著年齡增長，宮頸癌發病率明顯上升。高危型HPV感染容易促成宮頸癌的發生，并隨年齡增加其構成比逐步增加［13］。本研究結果顯示，不同年齡段HPV感染率無差異。

HPV感染主要通過性生活傳播，感染后通常無明顯的臨床癥狀。HPV在人群中普遍存在，然而大多數女性HPV感染是一過性的，特別是年輕女性機體對病毒的限制或清除功能遠比年長女性強［14］。因此，應用HPV檢測在宮頸癌防癌篩查中應注意受檢者的年齡。35歲以后高危亞型HPV的持續感染是宮頸癌的直接原因，特別是同一基因高危亞型HPV的持續感染更易造成宮頸癌。因此，對已婚女性，尤其對圍絕經期女性積極開展HPV感染基因亞型檢測以預防宮頸癌及宮頸癌前病變的發生很重要。

3.3 HPV多重感染情況 云南省紅河和文山兩地區女性HPV感染以單一感染為主，占81.2%。HPV多重感染率為18.71%，低于陶萍萍等［12］報道的44.35%。本研究結果顯示，在多重感染中，二重感染比例最高，為75.0%，各年齡段的單一感染率及多重感染率無差異。HPV感染的基因亞型數的多少是否提高宮頸病變的發生率一直是學者們關注的問題，但目前仍無統一說法。不少學者認為HPV多重感染并不增加宮頸癌的發生，但也有學者認為HPV多重感染出現持續性感染的危險性更大，而HPV的持續感染是宮頸病變發生的原因，因此，多重感染易導致宮頸病變［15］。HPV多重感染可能與患者的性伴侶數有關，性伴侶越多，多重感染可能性就越大。研究發現，HPV單一感染和多重感染的清除率相當，但某些特殊亞型，如HPV 16的感染和多重感染清除率低可能更易導致持續性感染，發生宮頸上皮內瘤變 (CIN)2、3級甚至鱗癌(SCC)［16］。對于云南紅河和文山地區HPV感染基因亞型與宮頸病變的關系，需在以后的工作中繼續研究。

由于HPV感染與宮頸癌及癌前病變的關系密切，且高危亞型與低危亞型以及單一和多重感染引起組織學變化不同，因此，早期、定期進行HPV分型檢測并結合宮頸細胞學檢查對宮頸癌的預防和治療極為重要。

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