“瘦肉精”快速檢測方法篩選中應注意的幾個問題

陳 玲 尹伶靈 彭媛芳 陸慶泉 魏秀麗 張呈軍 關曉敏

（①山東省獸藥質量檢驗所 濟南 250022 ②青島農業大學）

近年來隨著“瘦肉精”事件的的頻發，特別是2011年“3.15雙匯瘦肉精”事件后，豬、牛、羊“瘦肉精”的檢測成為了各地殘留監控的重中之重。山東省作為畜牧養殖大省，為保證生豬、牛、羊及其產品的質量安全，投入大量資金多次進行瘦肉精專項整治工作。在專項整治工作中，為了保證檢測的時效性，首先運用快速方法進行篩選，陽性樣品送省級檢測機構進行確證、定量。目前所使用的快速篩選方法主要是酶聯免疫測定法（ELLSA法）和試紙卡法。筆者發現，由于不同的檢測條件，不同的樣品狀態，以及不同生產廠家的試劑盒（試紙卡），對檢測結果有著許多不確定的影響因素。筆者通過以往的檢測工作，總結了“瘦肉精”快速篩選中應注意的幾個問題，以便獲得準確可靠的“瘦肉精”檢測結果提供有益的參考。

1 正確的采集和處理尿樣

樣品的正確采集、保存和處理，可確保結果的準確性。為防止抽取的尿液或肌肉等組織樣品變質，在取樣后，樣品應立即置于0～4℃條件下保存；如需較長時間存放，應在-18℃條件下保存。運輸過程中，樣品溫度不得超過4℃，時間不超過24h。

2 酶聯免疫試劑盒法（ELLSA法）

酶聯免疫測定法是將抗原與抗體反應和酶化學反應結合到一起的測定技術，具有靈敏度高、特異性強、快速的特點，所需儀器化程度低和樣本前處理相對簡單，適于大量樣本篩查。

由于不同試劑盒生產廠家和不同批次間存在一定的差異，為保證檢測結果的準確性，采用酶聯免疫法時，各實驗室應對所采購的試劑盒性能進行評價，篩選出適合本實驗室使用的試劑盒。評價指標包括靈敏度、準確度、精密度、特異性、穩定性等方面。

檢測時應注意以下幾個方面：（1）樣品在離心分離時，應注意離心的溫度和轉速，若達不到離心轉數則相應增加離心時間，以達到上清無雜質的要求。（2）肌肉等組織樣品前處理過程中，有兩相以上分離時，應確保取目的相時不帶入其它相。（3）每個酶標板在測定時均應做標準曲線，一個酶標板的標準曲線不能用于另外一個酶標板的測定；并且應做陰性、陽性對照；不能使用自來水、純化水及蒸餾水作為陰、陽性對照。（4）酶聯免疫測定加樣時應避免加在孔壁上部，并注意不能濺出樣品孔外，以防止樣品間的交叉污染；每個樣品加樣后應更換吸頭，加樣速度要均一。（5）反應溫度和時間應按規定的要求執行。試劑盒使用之前將所有試劑和需用板條回升至室溫（20～25℃）并平衡30min以上；加入終止液后檢測時間一般不超過5 min。因為酸終止后吸光度值會慢慢下降，應盡快比色測定。（6）酶聯板的洗滌要徹底。洗滌的次數一般為3～4次，有時需洗5～6次。洗板所用水為去離子水，若沒有制備去離子水的儀器，也可使用市售娃哈哈純凈水。（7）酶聯免疫試劑盒為一次性檢測用品，不能重復使用。（8）酶標儀在使用前應經過計量部門的檢定，以保證檢測結果的合法有效。

3 快速檢測試紙卡法

“瘦肉精”快速檢測試紙卡是單克隆抗體技術、免疫層析技術和金標顯色技術的綜合運用。對于基層工作著和養殖戶來說，金標試紙卡具有使用簡便、快速、易于實現現場檢測的優勢。檢測時應注意以下問題：（1）必須使用陰性、陽性對照；不能使用自來水、純化水及蒸餾水作為陰性對照。（2）尿液如是澄清的可以直接檢測；如顯渾濁，最好進行離心后取上清液進行檢測，沒有離心機的可適當靜置一段時間（10～20min）后在進行檢測。（3）尿液的滴加量應嚴格按照說明書的要求，使用配套的滴管進行滴加。（4）所有試紙卡啟封后1h內使用。試紙卡在室溫下一次性使用，避免陽光直射和電風扇直吹；試紙卡為一次性檢測用品，不能重復使用。（5）由于尿樣的差異，有的檢測線紅色可能偏淡或偏灰，此情況也應判定為陰性結果。（6）試紙卡的保存溫度一般為4～30℃，保存期限為18～24個月，保存溫度不當或時間過長，試紙卡都有可能失效。檢測時溫度在20±5℃時最佳，檢測前應將試紙卡進行回溫，如果在養殖場或屠宰場現場測定時環境溫度過低，可在室內進行測定。

“瘦肉精”的快速檢測方法僅限于大量樣品的快速篩查和現場檢測，不能作為行政處罰的依據，對其篩選出的陽性樣品要使用儀器方法進行確證。目前本省的確證方法統一采用農業部1063號公告規定的《動物尿液中11種β-受體激動劑殘留檢測 液相色譜-串聯質譜法》和農業部1025號公告規定的《豬尿中β-受體激動劑多殘留檢測—液相色譜-串聯質譜法》檢測。