3種酒糟菌糠三萜類成分含量比較

王 松，殷中瓊，周瑞平，王 濤*

（1.宜賓學院 生命科學與食品工程學院，四川 宜賓 644000；2.宜賓學院 發酵資源與應用四川省高校重點實驗室，四川 宜賓 644000；3.四川農業大學 動物醫學院，四川 雅安 625014；4.四川宜賓市敘府酒業有限公司技術中心，四川 宜賓 644000）

酒糟栽培食用菌是合理利用酒糟的有效途徑之一[1]。以酒糟為主要原料栽培食用菌后的培養基即為酒糟菌糠。菌糠中殘留大量的菌絲體，富含蛋白質、氨基酸、維生素及一些生物活性物質[2-5]。三萜類化合物是天然物質中數量最多的一類化合物，廣泛存在于自然界，具有抗腫瘤、保肝、鎮痛、抗氧化等生理活性，是被人們所關注的重要活性物質之一。已在許多食用菌的子實體、孢子和菌絲體中提取出三萜類化合物組份且被證實具有抗腫瘤、免疫調節等作用[6-8]。

為了比較研究不同食用菌培養后以及在不同階段的酒糟菌糠的三萜含量的差異，對茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）這三種酒糟菌糠進行了三萜含量的測定，為酒糟菌糠飼料的進一步開發奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 酒糟菌糠

酒糟菌糠來源：茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇），由四川宜賓敘府酒業有限公司食用菌生產基地提供。

將鮮酒糟9.2kg、花生殼0.6kg、玉米粉0.27kg、蔗糖0.1kg、石膏0.1kg、石灰0.3kg混合，以配制培養基。在滅菌后的培養基上分別接種茶樹菇5號、雞腿菇特白。茶樹菇5號培養兩個月后，采摘第一茬菇后的菌糠為茶樹菇菌糠（出菇）；茶樹菇5號培養大約40d，菌絲體長滿后的菌包為茶樹菇菌糠（未出菇）；雞腿菇特白培養大約30d，菌絲體長滿后的菌包為雞腿菇菌糠（未出菇）。

酒糟菌糠的處理：酒糟菌糠在105℃烘箱中烘15min，然后降到60℃，烘干6h，冷卻后粉碎過40目篩。

1.2 儀器與試劑

RE-2000旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；ESJ200-4電子天平（沈陽龍騰電子有限公司）；LG-04C四兩裝高速中藥粉碎機（浙江瑞安市百信藥機器廠）；UV-2102PC紫外可見分光光度計（上海尤尼柯儀器有限公司）；HH-2數顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）等。

齊墩果酸對照品（中國生物制品檢定所），高氯酸、冰醋酸、香草醛、乙酸乙酯、甲醇等均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 提取物的制備

分別稱取茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）粉末20g，分別加入200mL石油醚，用索氏提取12h，得提取液。將提取液放置于通風櫥內12h，使石油醚揮發完全。然后將剩余物50℃真空干燥30min，稱取干燥物質量，計算得率。

1.3.2 提取物中三萜含量的測定[9]

香草醛-高氯酸比色法測定三萜含量。以齊墩果酸作為標準樣品。

1.3.3 標準曲線的制作

將齊墩果酸用甲醇配成0.2mg/mL的標準溶液，精確吸取該液0、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL和0.8mL分別置于具塞磨口試管中，水浴蒸干，溶劑揮干后，準確加入0.4mL 5%香草醛冰醋酸溶液（現配現用）和1.6mL高氯酸，混勻。然后將8支試管同時放入70℃恒溫水浴鍋中水浴15min，取出后冷卻至室溫。最后向每支試管中各加入8mL乙酸乙酯，用紫外分光光度法檢測。

1.3.4 三萜含量測定方法

分別將茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）石油醚提取物溶解在50mL甲醇中，再將茶樹菇菌糠（未出菇）甲醇溶液做1:10稀釋，茶樹菇菌糠（出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）做1:5稀釋。按標準曲線的測定方法，測出其在560nm下的OD值，根據標準曲線計算各代謝提取物中三萜含量，并計算三萜的得率。

2 結果與分析

2.1 酒糟菌糠提取物的得率

茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）的石油醚提取物的得率分別為0.31%、1.43%、0.54%，其中茶樹菇菌糠（未出菇）石油醚提取物的得率最高。

2.2 齊墩果酸標準曲線

以齊墩果酸濃度為橫坐標，吸光度測定值為縱坐標，繪制標準曲線見圖1。標準曲線回歸方程為：y=3.4321x-0.0131，R2=0.999 2。結果表明，本品在40μg/mL～160μg/mL范圍內線性關系良好。

圖1 齊墩果酸標準曲線Fig.1 Standard curve of oleanolic acid

2.3 酒糟菌糠的三萜含量

茶樹菇菌糠（出菇）、茶樹菇菌糠（未出菇）、雞腿菇菌糠（未出菇）三種酒糟菌糠三萜類物質含量OD值測定結果如圖2所示，根據其不同的濃度稀釋倍數，對應標準曲線，可計算出三種酒糟菌糠甲醇溶液濃度分別為0.25mg/mL、0.85mg/mL、0.51mg/mL。則三種菌糠提取物中的三萜含量分別為20.39%、14.82%、23.50%，進一步計算出三萜得率分別是0.06%、0.21%、0.13%，其中茶樹菇菌糠（未出菇）的得率最高。

圖2 三種酒糟菌糠三萜含量Fig.2 The triterpenoid content to three kinds of distiller's grains-based spent mushroom substrate

3 討論

大量研究表明，食藥用菌類菌絲體和子實體營養成分差異不明顯，都含有豐富的營養物質和菌體多糖等相關活性物質[10-12]。未出菇的酒糟菌糠中殘存大量的菌絲體，因此2種未出菇酒糟菌糠三萜含量較高。而出菇的酒糟菌糠中菌絲體較少，且出菇后，菌絲體中一部分生物活性物質轉運到子實體上，導致其三萜含量較低。

同樣在未出菇的條件下，茶樹菇酒糟菌糠三萜含量比雞腿菇酒糟菌糠大的多，推測可能是因為不同種類的食用菌對三萜的合成與貯藏的能力不同，在本實驗的條件下，茶樹菇三萜合成與貯藏能力優于雞腿菇；也可能是因為雞腿菇菌絲體中三萜類活性物質合成較慢，在本實驗期內其含量還未到峰值[13]。

本實驗研究表明，雖然含量不一，但三種酒糟菌糠都含有三萜類物質，結合我們對其他營養成分和喂飼情況的研究情況（結果另發），酒糟菌糠飼料是一種優良的飼料，其按一定的比例添加到家畜日糧中，具有良好的開發前景。

[1]何元麗，余世海，王 松，等.多糧濃香型白酒丟糟栽培猴頭菌的研究[J].中國釀造，2011，30（8）：68-70.

[2]LAW WM.Removal of biocide pentachlorophenol in water system by the spent mushroom compost ofPleurotus pulmonarius[J].Chemosphere，2003，52（9）：1531-7.

[3]KRZYCZKOWSKI.Isolation and quantitative determination of ergosterol peroxide in various edible mushroom species[J].Food Chem，2009，113（1）：351-355.

[4]COLLOPY PD,ROYSE DJ.Characterization of phytase activity from cultivated edible mushrooms and their production substrates[J].J Agr Food Chem，2004，52（25）：7518-24.

[5]王西民.菌糠飼料的開發利用技術[J].北京農業，2008，2（6）：41-42.

[6]劉 華，賈 薇，張勁松.樟芝菌絲體的不同提取方法及其抗腫瘤活性的研究[J].食品與發酵工業.2008，34（12）：171-175.

[7]余素萍，張勁松，唐慶九，等.不同發酵階段的靈芝菌絲三萜類成分與抗腫瘤作用的相關性研究[J].菌物學報，2003，23（4）：548-554.

[8]袁廣峰，徐瑞雅，張樹斌，等.茶薪菇培養物中粗三萜含量測定及抗氧化抗腫瘤活性研究[J].食用菌學報，2007，14（2）：41-43.

[9]帕麗達，堵年生，叢媛媛，等.比色法測定瑣瑣葡萄中總三萜類成分的含量[J].華西藥學雜志，2002，17（6）：475.

[10]張 碩，李 明，李守勉，等.猴頭菌菌絲體與子實體多糖產量相關性分析[J].安徽農業科學，2009，37（15）：6946-6947.

[11]張勁松，賈 薇，邢增濤，等.靈芝子實體和菌絲體的提取物及其各純化組份生物活性的比較[J].菌物學報，2004，23（1）：85-92.

[12]曹文濤，張 鑫.紅汁乳菇子實體與也太發酵菌絲體營養成分分析[J].貴州農業科學，2010，38（4）：80-81.

[13]黃生權，姚松君，劉翠玲，等.不同生長期的靈芝三萜含量測定及變化規律研究[J].現代食品科技，2011，27（8）：1015-1019.