溶劑萃取法提取藍莓中花色苷

1 引 言

藍莓（Blueberry），又稱越橘、藍漿果，屬杜鵑花科（Ericaceae） 越橘屬（Vaccinium spp）多年生落葉或常綠灌木。藍莓果實呈深藍色，含有豐富的花色苷?；ㄉ帐腔ㄉ嘏c糖以糖苷鍵結合而成的黃酮多酚類化合物，結構性質穩定，花色素的基本結構為3，5，7-三羥基-2-苯基苯并吡喃， 由于苯環中取代基、羥基和甲氧基位置和數量不同，衍生出不同的配糖體化合物。在花色素A環上的羥基以糖苷鍵與糖結合，形成花色苷。藍莓花色苷具有抗氧化、清除自由基、降血脂、抗炎、改善胰島素抵抗、保護內皮細胞及抗腫瘤等多種生物學功能[1～4]。陸英等[5]采用高速逆流色譜分離制備紫甘薯花色苷。對藍莓花色苷的研究主要集中在生理功能和穩定性方面，而對藍莓花色苷的提取研究較少。為探索更佳的提取工藝， 提高花色苷的提取率，本實驗采用酸性乙醇對藍莓花色苷進行提取，并用AB-8大孔樹脂純化，為以后的工業化生產提供理論依據。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑50CONC型紫外掃描儀（美國瓦利安公司）；B4-095型分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）；循環水式真空泵（鞏義市英峪儀器廠）；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（上海豫康科教儀器設備有限公司）；OSB-2100型EYELA油浴鍋（上海愛朗儀器有限公司）；N-1100型EYELA旋轉蒸發儀（上海愛朗儀器有限公司）；DZF-6200型真空干燥箱（上海精密實驗設備有限公司）；PHS-25酸度計（上海里達儀器廠）。藍莓（吉林吉康藍莓生產示范基地，7月中旬采收）；AB-8大孔樹脂（天津南開大學化工廠）；）；檸檬酸、檸檬酸鈉、FeCl3、醋酸鉛等均為國產分析純試劑。

2.2 實驗方法 （1）粗提 取適量藍莓果，破碎， 在40 ℃，用pH 3的60%乙醇溶液浸提2 h， 抽濾，收集濾液；于相同條件下，將再藍莓果殘渣提取1次，將2次的濾液于40 ℃下減壓濃縮，得到紅色粘稠的粗提液。（2）純化 將花色苷粗提液用pH=3的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液稀釋成3 g/mL，加入AB-8樹脂柱，充分吸附，以超純水沖洗去雜質，控制流速約為1 mL/min，用60%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液。（3）真空干燥 將洗脫液至于真空干燥箱中干燥，得紫黑色提取物。（4）花色苷提取物組成分析 分別用pH 1.0的酸性水溶液和0.1%（V/V）HCl-甲醇溶液溶解藍莓花色苷樣品，用紫外可見分光光度計進行光譜掃描，得到藍莓花色苷的紫外可見光譜圖。將藍莓花色苷甲醇溶液分別加入AlCl3和CH3ONa，進行光譜掃描，并與藍莓花色苷甲醇溶液中吸收光譜比較。（4）紅外光譜法分析提取物的化學基團組成 取少量樣品置于瑪瑙研缽中，再加適量KBr粉末研磨， 放入壓片模具中加壓，3 min后取出樣品，放入儀器的樣品槽中，進行傅立葉變換紅外光譜掃描，得到化合物的紅外光譜圖。（5）花色苷提取物色價及含量 精確稱取自制的花色苷提取物0.05 g，用pH 3.0的檸檬酸緩沖液定容至100 mL，在520 nm處測定其吸光值，計算花色苷提取物色價及含量。

3 結果與討論

3.1 花色苷提取物組成分析 （1） FeCl3顯色反應 提取物經乙醇溶解后，滴加1% FeCl3數滴，振蕩后溶液呈深褐色，表明其具有酚羥基的特征反應。（2）中性醋酸鉛反應 向1 g/L藍莓提取物中加入中性醋酸鉛，立即產生藍白色沉淀。隨著Pb2+濃度的增加，沉淀逐漸增多，表明提取物中含有酚基。因為酚基是黃酮類化合物的官能團之一，因此可以判斷藍莓花色苷屬于黃酮花色苷類色素。（3）紫外-可見光譜分析 測得提取物在60%乙醇與pH=3的檸檬酸-檸檬酸鈉溶液中于536和524 nm存在吸收峰，該吸收峰為花色苷的特征峰。藍莓花色苷在酸性水溶液中的吸收峰分別在279和520 nm處， 在甲醇溶液中的吸收峰分別在284和537 nm處（圖1）?；ㄉ兆畲笪詹ㄩL一個在可見光區的500～540 nm附近， 另一個在紫外275 nm附近，由此可以判斷藍莓色素屬于花色苷類色素。在300～330 nm處有小的吸收峰，說明藍莓花色苷中有?；幕ㄉ?。向藍莓花色苷的甲醇溶液中加AlCl3后，可見區的最大吸收峰向長波移動，說明含有B2環有鄰位酚羥基的花色苷。