高效液相色譜法同時測定植物油中4種甾醇烯

摘 要 建立了高效液相色譜法同時測定植物油中4種甾醇烯的方法。樣品用石油醚提取，硅膠柱凈化，反相C30柱（250 mm×4.6 mm i.d， 5

SymbolmA@ m）分離，乙腈-叔丁基甲醚（75∶25，V/V）作流動相，等度洗脫，紫外檢測（235 nm）。結果表明： 4種甾醇烯的質量濃度在0.025～1.0 mg/L范圍內；峰面積與質量濃度呈良好的線性關系，線性相關系數r2>0.999。在加標水平為0.050， 0.10 和0.50 mg/kg時，4種甾醇烯的加標平均回收率為89.2%～109.8%；相對標準偏差RSD<8%；方法檢出限（LOD）為0.010 mg/kg。本方法已應用于實際樣品分析。

關鍵詞 高效液相色譜； 甾醇烯； 植物油

1 引 言

在脫色、水蒸汽洗滌以及除臭等精煉過程中，油脂中的甾醇易發生脫水反應，產生烯鍵，形成具有共軛雙鍵的甾醇烯類物質（Steradienes）[1，2]。在植物油精練過程中，以β-谷甾醇（β-Sitosterol）脫水產生的3，5-豆甾二烯含量最為豐富，其次為3，5-菜甾二烯（Campesta-3，5-diene）和3，5，22-豆甾三烯（Stigmasta-3，5，22-triene）。它們分別由菜甾醇（Campesterol）和豆甾醇（Stigmasterol）脫水生成。3，5-膽甾二烯（Cholesta-3，5-diene）是由膽固醇（Cholesterol）脫水形成，通常只存在于動物性油脂中，在植物油中含量非常低。4種甾醇烯的化學結構式見圖1。

圖1 4種甾醇烯的化學結構式

Fig.1 Chemical structure of steradienes

檢測4種甾醇烯的方法多采用氣相色譜法[3～6]，也有少數研究采用液相色譜[6～8]，主要是因為4種物質的結構相似。液相色譜的保留時間非常接近，不能夠完全達到基線分離。本研究采用高效液相色譜法同時測定植物油中4種甾醇烯。樣品前處理方法在文獻[3，5]基礎上加以改進，采用反相C30柱分離，乙腈-叔丁基甲醚（75∶25，V/V）作流動相等度洗脫，獲得基線分離，在235 nm進行紫外檢測，檢出限達到0.010 mg/kg，比文獻[6，7]的方法靈敏。本方法快速、靈敏、可靠，已應用于實際樣品分析。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

2695高效液相色譜系統（Waters公司），配2487紫外檢測器，Empower pro色譜分析軟件。N-EVAP III恒溫氮吹儀（Organomation Associates公司），渦旋混合器。硅膠柱（30 cm×15 mm i.d.）：加15 g硅膠，頂端加0.5 cm無水Na2SO4。

石油醚（色譜純，沸程35～60 ℃，Caledon公司）；乙腈（色譜純，Caledon公司）；正己烷（色譜純，J.T.Baker公司）；叔丁基甲醚（色譜純，Sigma公司）；無水Na2SO4（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）：于500 ℃烘4 h以上，冷卻后儲存于干燥器中備用；硅膠60（0.063～0.200 mm，Merck公司）：于450 ℃烘5 h以上，冷卻后加入2%水，混勻，轉移至廣口試劑瓶中，蓋塞備用；水為超純水。

甾醇烯類標準品：3，5-膽甾二烯標準溶液100 mg/L，純度>99.0%；100 mg/L 3，5-菜甾二烯-3，5-豆甾二烯混合溶液（19∶81，V/V， 純度>99.0%）和3，5，22-豆甾三烯標準溶液100 mg/L（純度>99.0%）均購自挪威Chiron AS公司。

進口植物油由上海出入境檢驗檢疫局提供；國產植物油購自超市； 地溝油樣品由上海食品藥品監督所提供。

2.2 實驗方法

2.2.1 樣品處理 稱取植物油樣品2.0 g（精確至0.01 g）于燒杯中，加入5 mL石油醚，混勻，倒入硅膠柱中，用5 mL石油醚潤洗燒杯2次，一并倒入柱中。當石油醚液面與上端無水Na2SO4層相切時，加入10 mL石油醚，棄去流出液。待液面再次相切時，用25 mL石油醚洗脫2次，收集洗脫液至50 mL收集管中，于45 ℃水浴中以氮氣吹至干，用乙腈-叔丁基甲醚（70∶30，V/V）定容至1.00 mL，待測。若樣液濃度超出線性范圍，則稀釋一定倍數，使之在線性范圍內。