2，4—二硝基苯肼柱前衍生高效液相色譜法測定1—脫氧—D—木酮糖—5—磷酸合酶穩態動力學參數

摘 要 利用含羰基化合物與2，4-二硝基苯肼在酸性條件下反應得到的產物腙對紫外-可見光有吸收的特性，采用柱前衍生高效液相色譜法測定了1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶穩態動力學參數。酶反應產物1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸在堿性磷酸酶的作用下生成去磷酸化產物1-脫氧-D-木酮糖，然后與2，4-二硝基苯肼衍生成腙。衍生化反應的適宜條件為：HClO4濃度為1.5%，反應溫度37 ℃，反應時間60 min，2，4-二硝基苯肼與1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸的摩爾比為6∶1。色譜條件：0～17 min，40%～80%甲醇；18～20 min，40% 甲醇。結果表明，本方法具有較高的靈敏度和良好的線性關系，1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸的檢出限為1.0 mg/L，在0.005～1.0 g/L范圍內線性相關系數為0.999，相對標準偏差小于5.0%（n=3），標準回收率為102.22%。用本方法測得的1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶穩態動力學參數Km、Vmax和Kcat與文獻報道一致。

關鍵詞 非甲羥戊酸途徑；1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶；動力學參數；2，4-二硝基苯肼；高效液相色譜法 