固相萃取—超高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測大鼠血漿中T—2毒素及其主要代謝產(chǎn)物

摘 要 應(yīng)用固相萃取-超高效液相色譜-三重四極桿-線性離子阱串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，建立了高靈敏度的大鼠血漿中單端孢霉烯族（T-2）毒素及其5種主要代謝物的分析方法。在優(yōu)化的固相萃取條件下，大鼠血漿經(jīng)HLB固相萃取柱凈化富集后，以XDB-C18色譜柱（50 mm×4.6 mm， 1.8 m）分離，以5 mmol/L乙酸銨溶液和甲醇溶液為流動相進行梯度洗脫，以玉米赤霉酮為內(nèi)標，在正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式下對各分析物進行定性和定量分析。各分析物在0.1～500.0

g/L范圍內(nèi)線性良好（R2>0.997）；檢出限介于0.02～0.3 g/L之間；加標回收率為93.5%～120.3%；相對標準偏差均小于13%。本方法快速、重現(xiàn)性好、靈敏度高，已成功應(yīng)用于T-2毒素中毒的溯源性研究。

關(guān)鍵詞 單端孢霉烯族毒素；代謝物；固相萃取；液質(zhì)聯(lián)用；血漿

1 引 言

單端孢霉烯族毒素是自然界存在的最危險的食品污染源之一[1]。在數(shù)十種單端孢霉烯族毒素中，T-2毒素毒性最強，極易污染農(nóng)作物和儲存的糧食。T-2毒素對哺乳動物的半數(shù)致死量為 3～10 mg/kg BW[2]。我國規(guī)定了配合飼料中T-2毒素的允許量≤1 mg/kg[3]。T-2毒素在許多動物體內(nèi)代謝較快，30 min后即檢測不到原型，因此，T-2毒素在體內(nèi)的毒性作用主要由其代謝產(chǎn)物所引起[4]。一般認為，T-2結(jié)構(gòu)中的環(huán)氧基團是其毒性基團，其體內(nèi)主要代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)中的環(huán)氧環(huán)仍然存在，或多或少表現(xiàn)出毒性作用[5]。T-2毒素進入機體后，主要的代謝方式如圖1解所示。

圖解1 T-2毒素的主要代謝方式Scheme 1 Main metabolic ways of T-2 toxin

目前，檢測T-2毒素方法有薄層色譜法[6]、酶聯(lián)免疫法[7]、氣相色譜法[8]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9～11]、液相色譜法[12～14]及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[15～24]等，其中，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法因其靈敏度高、樣品無需衍生化處理等優(yōu)點，近幾年被廣泛使用。

研究T-2毒素在動物體內(nèi)的代謝途徑及其主要代謝物、毒性化合物和殘留標志物，將有助于T-2毒素中毒后的溯源性研究。目前，有關(guān)生物體液（包括尿液、膽汁和血漿）中的單端孢霉烯族毒素[23，24]的測定僅有少數(shù)報道，針對T-2毒素及其5種主要代謝產(chǎn)物的同時測定尚未見報道。本研究建立了超高效液相色譜-三重四級桿-線性離子阱質(zhì)譜同時檢測血漿中T-2毒素及其主要代謝產(chǎn)物的方法。方法簡單快速，回收率高，準確可靠，對T-2毒素中毒的溯源性檢測具有重要意義。2 實驗部分

2.1 儀器與試劑