高效液相色譜電噴霧質(zhì)譜快速鑒定粉葛中C-苷及O-苷同分異構(gòu)體

摘 要 采用高效液相色譜（二極管陣列）/電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)（HPLCPDAESIMSn）快速鑒定中藥粉葛中C苷及O苷異黃酮同分異構(gòu)體。選用Hypersil Gold C18 （150 mm×2.1 mm×3 m）色譜柱， 以水（含0.1%甲酸）乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫， 研究了粉葛中11種異黃酮類化合物的正離子一級(jí)、多級(jí)質(zhì)譜及PDA光譜；分析鑒別了兩對(duì)同分異構(gòu)體；預(yù)測(cè)了兩種未知微量成分結(jié)構(gòu)， 建立了區(qū)分粉葛中異黃酮類化合物同分異構(gòu)體的電噴霧質(zhì)譜新方法。

關(guān)鍵詞 粉葛； 高效液相色譜電噴霧質(zhì)譜； 同分異構(gòu)體； 源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離

1 引 言

粉葛（Radix puerariae thomsonii）為豆科植物甘葛藤（ Pueraria thomsonii Benth）的干燥根， 味甘， 辛、涼，有解肌退熱、透疹、生津止渴、通經(jīng)活絡(luò)之功效 \\。粉葛自古與野葛同作葛根用。研究發(fā)現(xiàn)， 粉葛與葛根（野葛）HPLC指紋圖譜\\及臨床應(yīng)用\\存在較大差別， 2005版中國(guó)藥典首次將粉葛與葛根（野葛）分列作為中藥材記載。粉葛中主要成分為異黃酮類化合物， 大部分以苷的形式存在， 主要包括：葛根素、3′羥基葛根素、大豆苷等\\， 其主要結(jié)構(gòu)見(jiàn)表1。該類化合物中存在多對(duì)同分異構(gòu)體， 主要分為碳苷和氧苷兩類化合物。同分異構(gòu)體結(jié)構(gòu)相似， 極性相近， 分離難度大。分離和鑒別中藥中同分異構(gòu)體化合物， 一直是藥物分析的難題。

高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（HPLCESIMS）技術(shù)結(jié)合了色譜與質(zhì)譜的優(yōu)點(diǎn)， 可有效分析復(fù)雜混合物中的單個(gè)和多個(gè)組分\\。文獻(xiàn)\\采用高效液相色譜（二極管陣列）/電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)（HPLCESIMS）方法分析葛根中異黃酮類化合物。但對(duì)粉葛中化合物質(zhì)譜分析尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用HPLCPDAESIMSn技術(shù)鑒別分析了粉葛中C苷和O苷兩類化合物， 建立區(qū)分粉葛中異黃酮類化合物同分異構(gòu)體的電噴霧質(zhì)譜方法。表1 粉葛中主要異黃酮類化合物

譜配有電噴霧離子源（ESI）；高效液相色譜儀系統(tǒng)（Surveyor HPLC）包括 Surveyor PDA Plus檢測(cè)器、Surveyor AutoSample Plus自動(dòng)進(jìn)樣器、Surveyor MS Pump四元泵； Xcalibur 2.0化學(xué)工作站軟件； Mass Frontier 6.0軟件。

粉葛藥材購(gòu)于合肥市當(dāng)?shù)厮幍辏?經(jīng)安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥教研室王德群教授鑒定為豆科植物甘葛藤（ Pueraria thomsonii Benth）的干燥根；葛根素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所， 批號(hào) 0752200509）; 乙腈、甲酸（色譜純， 美國(guó)Merck公司）， 實(shí)驗(yàn)用水為亞沸蒸餾水。 

2.2 樣品處理

2.2.1 對(duì)照品溶液配制 準(zhǔn)確稱定葛根素對(duì)照品1.2 mg， 置于10 mL容量瓶中， 以甲醇定容， 搖勻， 作為儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確移取1.00 mL儲(chǔ)備液， 以甲醇定容至10 mL， 經(jīng)0.22

2.2.2 供試品溶液配制 取粉碎過(guò)40目篩粉葛藥材0.5 g（粒徑＜0.45 mm）， 準(zhǔn)確稱定， 置平底燒瓶中， 加入50 mL甲醇水（2∶1， V/V）， 加熱回流30 min， 用甲醇水（2∶1， V/V）補(bǔ)足重量， 過(guò)濾， 取續(xù)濾液1.0 mL， 用甲醇定容至 10 mL.