高效液相色譜電噴霧質譜快速鑒定粉葛中C-苷及O-苷同分異構體

摘 要 采用高效液相色譜（二極管陣列）/電噴霧質譜聯用系統（HPLCPDAESIMSn）快速鑒定中藥粉葛中C苷及O苷異黃酮同分異構體。選用Hypersil Gold C18 （150 mm×2.1 mm×3 m）色譜柱， 以水（含0.1%甲酸）乙腈為流動相進行梯度洗脫， 研究了粉葛中11種異黃酮類化合物的正離子一級、多級質譜及PDA光譜；分析鑒別了兩對同分異構體；預測了兩種未知微量成分結構， 建立了區分粉葛中異黃酮類化合物同分異構體的電噴霧質譜新方法。

關鍵詞 粉葛； 高效液相色譜電噴霧質譜； 同分異構體； 源內碰撞誘導解離

1 引 言

粉葛（Radix puerariae thomsonii）為豆科植物甘葛藤（ Pueraria thomsonii Benth）的干燥根， 味甘， 辛、涼，有解肌退熱、透疹、生津止渴、通經活絡之功效 \\。粉葛自古與野葛同作葛根用。研究發現， 粉葛與葛根（野葛）HPLC指紋圖譜\\及臨床應用\\存在較大差別， 2005版中國藥典首次將粉葛與葛根（野葛）分列作為中藥材記載。粉葛中主要成分為異黃酮類化合物， 大部分以苷的形式存在， 主要包括：葛根素、3′羥基葛根素、大豆苷等\\， 其主要結構見表1。該類化合物中存在多對同分異構體， 主要分為碳苷和氧苷兩類化合物。同分異構體結構相似， 極性相近， 分離難度大。分離和鑒別中藥中同分異構體化合物， 一直是藥物分析的難題。

高效液相色譜質譜聯用（HPLCESIMS）技術結合了色譜與質譜的優點， 可有效分析復雜混合物中的單個和多個組分\\。文獻\\采用高效液相色譜（二極管陣列）/電噴霧質譜聯用系統（HPLCESIMS）方法分析葛根中異黃酮類化合物。但對粉葛中化合物質譜分析尚未見報道。本研究采用HPLCPDAESIMSn技術鑒別分析了粉葛中C苷和O苷兩類化合物， 建立區分粉葛中異黃酮類化合物同分異構體的電噴霧質譜方法。表1 粉葛中主要異黃酮類化合物

譜配有電噴霧離子源（ESI）；高效液相色譜儀系統（Surveyor HPLC）包括 Surveyor PDA Plus檢測器、Surveyor AutoSample Plus自動進樣器、Surveyor MS Pump四元泵； Xcalibur 2.0化學工作站軟件； Mass Frontier 6.0軟件。

粉葛藥材購于合肥市當地藥店， 經安徽中醫學院藥學院中藥教研室王德群教授鑒定為豆科植物甘葛藤（ Pueraria thomsonii Benth）的干燥根；葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所， 批號 0752200509）; 乙腈、甲酸（色譜純， 美國Merck公司）， 實驗用水為亞沸蒸餾水。 

2.2 樣品處理

2.2.1 對照品溶液配制 準確稱定葛根素對照品1.2 mg， 置于10 mL容量瓶中， 以甲醇定容， 搖勻， 作為儲備液。準確移取1.00 mL儲備液， 以甲醇定容至10 mL， 經0.22

2.2.2 供試品溶液配制 取粉碎過40目篩粉葛藥材0.5 g（粒徑＜0.45 mm）， 準確稱定， 置平底燒瓶中， 加入50 mL甲醇水（2∶1， V/V）， 加熱回流30 min， 用甲醇水（2∶1， V/V）補足重量， 過濾， 取續濾液1.0 mL， 用甲醇定容至 10 mL.