固相萃取-高效液相色譜-質譜法測定污水中糖皮質激素

摘 要 建立了同時測定污水中7種糖皮質激素的固相萃取超高效液相色譜串聯質譜的分析方法。利用單因素實驗優化固相萃取影響因素：洗脫液、洗脫體積、水樣pH值及淋洗液。在此基礎上，進行L9（34）正交實驗。通過直觀分析和方差分析區分主次因素，確定了最佳固相萃取條件：洗脫劑為乙酸乙酯，洗脫劑用量為10 mL，pH＝5.0，清洗劑為20%甲醇。7種糖皮質激素的檢出限為1.56～10.59 ng/L；在20～100 ng/L的3個添加水平范圍內的平均回收率為72.5%～101.4%，相對標準偏差（RSD）小于10.9%。

關鍵詞 固相萃取； 超高效液相色譜串聯質譜法； 糖皮質激素； 正交實驗

1 引 言

糖皮質激素具有良好的抗炎、抗免疫、抗毒素和抗休克作用，被廣泛應用于疾病的治療與預防。研究表明，進入人和動物體內的糖皮質激素有相當一部分隨糞、尿等排泄物排出，并最終排放進入環境\\，可能對生物體造成危害，如人類生殖系統疾病，動物生殖功能異常、雌雄同體率以及性比例失調等\\。

目前，有關污水處理廠進出水及其它樣品中糖皮質激素檢測方法的研究較多，主要采用固相萃取氣相色譜法、固相萃取氣相色譜串聯質譜法、固相萃取液相色譜法及固相萃取液相色譜串聯質譜法\\。優化固相萃取影響因素時，很多學者\\僅對部分因素進行了單因素實驗，或忽視了主效應及各因素之間的交互作用；或不能區分實驗結果的差異是由各因素的水平變化而導致，還是由實驗的隨機波動而導致。本實驗采用超高效液相色譜串聯質譜法（UPLCMS/MS）進行測定，在單因素實驗的基礎上，采用L9（34）正交實驗優化固相萃取條件，利用直觀分析法及方差分析法確定影響因素的主次順序，運用單因素分析和正交表確定最佳固相萃取條件，并應用于南京市污水處理廠進出口水樣的檢測。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

ACQUITYTM超高效液相色譜儀Quattro Premier XE質譜儀（Waters公司），配MassLynxV4.1軟件；MilliQ超純水器（美國Mimpore公司）；MH3 微型旋渦混勻器（上海瀘西分析有限公司）；AG285電子天平（Mettler公司）；MG2200氮吹儀（EYELA公司）；12通道固相萃取裝置（美國Waters公司）；Waters Oasis HLB固相萃取柱（200 mg，6 mL，Waters公司）。

甲酸、乙腈和甲醇（色譜純，德國Merck公司）。潑尼松（PRE，99.0%）， 氫化潑尼松（PDL，98.0%）甲基潑尼松龍（MET，99.0%）倍他米松（BET，99.5%）地塞米松（DEX，97.0%）醋酸潑尼松龍（PDA，98.5%）， 醋酸氫化可的松（HDA，99.0%），均購于Dr.Ehrenstorfer公司。取標準品適量，用甲醇配成質量濃度為500 mg/L 的標準儲備液，于4 ℃冰箱中保存。

2.2 樣品的采集和處理

采集南京地區4個主要污水處理廠的進出口水樣，保存于棕色瓶中，加入1%甲醛，避免微生物降解，于4 ℃冰箱避光保存。

L。梯度洗脫程序：0～13.0 min，28%～45% A；13.0～13.1 min，45%～28% A；13.1～15.0 min， 28% A。

采用電噴霧離子源（ESI＋）。離子源溫度為120 ℃，脫溶劑溫度為350 ℃，脫溶劑氣和錐孔氣為氮氣，脫溶劑流速為600 L/h，錐孔氣流速為50 L/h，碰撞氣為高純氬氣，采用（MRM）多反應監測模式檢測。質譜分析參數見表1。