氣相色譜-質(zhì)譜法對當(dāng)歸及其炮制品揮發(fā)油的指紋圖譜和潛在標志物研究

摘 要 建立了一種基于氣相色譜質(zhì)譜技術(shù)（GCMS）的化學(xué)指紋圖譜， 以發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸及其不同炮制品潛在標志物的方法。利用GCMS獲得當(dāng)歸及其不同炮制品揮發(fā)油化學(xué)指紋圖譜， 對產(chǎn)生的75樣本×259變量數(shù)據(jù)進行歸一化、修正80%規(guī)則和數(shù)據(jù)縮放等方法預(yù)處理， 通過正交校正偏最小二乘法（OPLS）模式識別方法對樣品進行模式識別， 根據(jù)模型的變量重要性因子（VIP）和非參數(shù)檢驗結(jié)果篩選出12個潛在標志物。經(jīng)相關(guān)分析和結(jié)構(gòu)鑒定， 其中11個化合物分別被鑒定為丁內(nèi)酯、萜烯醇、6丁基1， 4環(huán)庚二烯、2壬酮、6十一烷酮、2甲氧基苯酚、δ欖香烯、4，5，6，7四甲基苯酞、Z丁烯基酞內(nèi)酯、亞油酸甲酯、1，7異丙基4甲基1，4，5，6，7，7a六氫2H茚2酮。

關(guān)鍵詞 中藥材； 炮制； 化學(xué)指紋； 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用； 當(dāng)歸； 標志物

1 引 言

近年來， 中藥化學(xué)指紋圖譜已廣泛應(yīng)用于中藥質(zhì)量標準研究。涉及的方法包括：高效液相色譜指紋圖譜\\、氣相色譜指紋圖譜\\、薄層色譜指紋圖譜\\、高速逆流色譜指紋圖譜\\、毛細管電泳指紋圖譜\\和紅外光譜指紋圖譜\\等。這些方法以“識別指紋圖譜”的表現(xiàn)形式控制中藥飲片及復(fù)方的質(zhì)量， 而建立在中藥指紋圖譜基礎(chǔ)之上的大量化學(xué)數(shù)據(jù)中， 發(fā)現(xiàn)潛在的標志物對評價中藥飲片質(zhì)量是非常有意義的。

當(dāng)歸為傘形科當(dāng)歸屬植物當(dāng)歸（Angelica sinesis （Oliv.） Diels）的干燥根\\， 主產(chǎn)于甘肅岷縣、漳縣、渭源、宕昌等地， 是甘肅的道地藥材之一\\。當(dāng)歸中含有內(nèi)酯類、生物堿類、有機酸類或酚類以及中性揮發(fā)油等多種成分。在中醫(yī)藥臨床中， 可對當(dāng)歸采用不同的炮制處理， 以發(fā)揮不同的療效。當(dāng)歸常用炮制品有油當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、土當(dāng)歸、當(dāng)歸炭等\\。本研究以當(dāng)歸及其不同炮制品為例， 以氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（GCMS）為分析方法， 運用統(tǒng)計分析手段， 建立從化學(xué)指紋圖譜中發(fā)現(xiàn)不同炮制品潛在標志物的方法。2 實驗部分

2.1 儀器、試劑與材料

6890N/5973N型GCMS氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國Aglient公司）；揮發(fā)油提取器（5 mL24#標準口， 天津市天玻玻璃儀器有限公司）， DM內(nèi)熱式玻璃纖維電熱套（山東省永興儀器廠）。

當(dāng)歸藥材采自甘肅， 由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院魏彥明教授鑒定為A.Sinensis （表1）。石油醚、乙醚、無水Na2SO4等均為分析純， 實驗用水為二次蒸餾水。炮制所用輔料黃酒、香油均購于當(dāng)?shù)爻校煌练塾筛拭C中醫(yī)學(xué)院炮制教研室提供供炮制用輔料。

2.2 當(dāng)歸不同炮制品的制備\\

（1）酒當(dāng)歸 取當(dāng)歸片， 加黃酒拌勻， 稍悶， 待酒被吸盡后， 用文火炒至深黃色， 微具酒香氣時， 取出放涼， 每100 kg當(dāng)歸， 用黃酒10 kg。（2）土當(dāng)歸 將土粉置鍋內(nèi)炒熱， 倒入當(dāng)歸片， 微炒至當(dāng)歸片粘滿細土?xí)r取出， 篩去土粉， 放涼即可， 每100 kg當(dāng)歸， 用土粉30 kg。（3）當(dāng)歸炭 取當(dāng)歸片， 置鍋內(nèi)， 用中火炒至當(dāng)歸外表焦黑色， 內(nèi)部棕褐色， 略具焦氣， 質(zhì)枯脆時， 取出放涼。（4）油當(dāng)歸 取凈當(dāng)歸片，加入3 %的香油拌勻， 悶潤， 文火炒至色澤加深， 微顯焦斑， 待顯油潤有香氣時出鍋， 晾涼。樣品編號見表1。