超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定水產(chǎn)調(diào)味品中的羅丹明B、結(jié)晶紫和孔雀石綠

1 引 言

羅丹明B常被違法用于調(diào)味品的染色，孔雀石綠和結(jié)晶紫因具有消毒和殺菌作用而常被違法應(yīng)用于水產(chǎn)品養(yǎng)殖中。三者結(jié)構(gòu)類似，都具有高毒、高殘留和致癌、致畸、致突變等特點(diǎn)，色譜分離較難，且由于食品基質(zhì)復(fù)雜，對質(zhì)譜檢測影響較大。目前，單獨(dú)檢測3種物質(zhì)的方法分別有高效液相色譜法[1]、氣相色譜-質(zhì)譜法[2]、液相色譜-質(zhì)譜法[3]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[4]，未見有應(yīng)用固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對復(fù)雜食品基質(zhì)中上述3種物質(zhì)同時測定的報(bào)道。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器、試劑與材料 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（ACQUITY UPLC-Quattro Premier XE， Waters公司）。色譜柱: Acquity UPLCTM BEH C18柱（50 mm×2.1 mm， 1.7

SymbolmA@ m，Waters公司）；固相萃取柱（OASIS MCX， 60 mg/3 mL， Waters公司）。羅丹明B、結(jié)晶紫、孔雀石綠（Sigma公司），用乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司）配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2 色譜-質(zhì)譜條件 流動相A為乙腈，B為0.2%甲酸溶液，流速為0.2 mL/min；進(jìn)樣量：10

SymbolmA@ L；柱溫: 35 ℃，梯度洗脫: 0～1 min， 30%～40% A; 1～2 min， 40%～50% A; 2～3 min， 50%～70% A; 3～5 min， 70%～90% A; 5～6 min， 90%～70% A; 6～7 min， 70%～30% A。電噴霧離子源正離子多反應(yīng)監(jiān)測，毛細(xì)管電壓：3.0 kV；離子源溫度：120 ℃；脫溶劑氣溫度：350 ℃；脫溶劑氣流量：800 L/h；錐孔反吹氣流量：50 L/h。其它質(zhì)譜參數(shù)見表1。

孔雀石綠Malachite329313.*208603834 * 定量離子對（Quantification ion pair）。

2.3 提取 稱取勻漿后的水產(chǎn)品配料調(diào)味醬2 g于具塞離心管中，依次加人1 mL 20%鹽酸羥胺，1 mL 0.1 mol/L對甲苯磺酸，2.5 mL 0.1 mol/L乙酸銨緩沖溶液和12 mL乙腈，漩渦振蕩提取5 min，低溫（5 ℃） 10000 r/min離心5 min。上清液移至另一離心管中，將殘?jiān)鼡v碎，用12 mL乙腈重復(fù)提取，合并上清液；加入5 g中性氧化鋁，漩渦振蕩提取5 min后，低溫（5 ℃） 1

SymboltB@ 104 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加人15 mL二氯甲烷，10 mL水，振搖2 min，靜置分層，收集下層有機(jī)層，再用10 mL二氯甲烷萃取一次，合并有機(jī)相于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干。

2.4 凈化 依次用甲醇、0.2%甲酸各3 mL活化MCX 固相萃取柱，提取物用6 mL乙腈溶解后過柱，柱流速低于1 mL/min。再用 3 mL 0.2%甲酸，3 mL 50%甲醇淋洗，最后用 3 mL 10%氨水-甲醇溶液洗脫，洗脫液于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，殘留物用1 mL流動相定容，經(jīng)0.2

SymbolmA@ m濾膜過濾， 供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

3 結(jié)果與討論

3.1 超高效液相色譜條件的優(yōu)化 研究了水-甲醇和水-乙腈兩種體系中水相及有機(jī)相比、添加物的種類（甲酸和乙酸胺）及添加比例對目標(biāo)物分離的影響。結(jié)果表明，選用乙腈-0.2%甲酸做流動相時，3種染料有較好的分離度，且色譜峰峰型良好，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM及總離子流色譜圖見圖1。

SymbolmA@ g/L）MRM、總離子流色譜圖

Fig．1 Multiple reaction monitoring，total ion curren chromatograms of Rhodamine B，crystal violet and malachite standard solution（10

SymbolmA@ g/L）

3.2 方法檢出限和定量限 對3種物質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在5

SymboltB@ 10

Symbolm@@ 4 ～1.0 mg/L濃度范圍內(nèi)進(jìn)行分析， 線性相關(guān)系數(shù)r≥0.997。在空白樣品中添加目標(biāo)化合物，測得該方法的檢出限為0.18～0.48

SymbolmA@ g/kg。

3.3 回收率、精密度及實(shí)際樣品測定

在空白水產(chǎn)調(diào)味品中添加不同濃度（5.0， 20.0和100.0

SymbolmA@ g/kg）的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測得平均回收率分別為羅丹明B 90.7%～96.8%、結(jié)晶紫78.4%～90.3%、孔雀石綠78.6%～88.9%；日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均＜10%，日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均＜15%。用本方法對10份水產(chǎn)調(diào)味品樣品進(jìn)行檢測， 其中一份樣品中羅丹明B呈陽性。

References

1 Rushing L G， Hansen J E B. J. Chromatogr. B， 1997， 700（1-2）: 223～231

2 Doerge D R， Churchwell M I， Rushing L G， Bajic S. Rapid Commun Mass Spectrom.， 1995， 10: 1479～1484

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4 Hurtaud-Pessel D， Couedor P， Verdon E. J. Chromatogr. A， 2011， 1218（12）: 1632～1645

Simultaneous Determination of Rhodamine B，Crystal Violet

and Malachite in Aquatic Flavourings by Solid-phase

Extraction Coupled with Ultra Performance Liquid

Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

ZHANG Zhen-Li1，2， ZHANG Pin.1， SHEN Da-Zhong*1

.1（College of Chemistry， Chemical Engineering and Materials Science， Shandong Normal University， Jinan 250014， China）

.2（Zibo Institute of Product Quality Supervision Inspection， Zibo 255033， China）

Abstract A method was developed for the simultaneous determination of rhodamine B， crystal violet and malachite in aquatic flavourings based on solid phase extraction-ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The samples were extracted with acetonitrile-buffer， partitioned against methylene dichloride and then cleaned up by a solid phase extraction cartridge. The target analytes were separated on a BEH C18 column with gradient elution using acetonitrile and water （containing 0.2% （V/V） formic acid） as mobile phases. The linear ranges were from 5×10

Symbolm@@ 4 to 1 mg/L with the limits of detection of 0.18－0.48

SymbolmA@ g/kg. The recoveries of the method were 90.7%－96.8%， 78.4%－90.3%， 78.6%－88.9%， respectively.

Keywords Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; Solid-phase extraction; Rhodamine B; Crystal violet; Malachite; Aquatic flavourings

（Received 15 September 2011; accepted 3 November 2011）