黃精提取物中總皂苷含量的測定

黃祥元 黃美容

（1.永州職業技術學院，湖南 永州 425000；2.安徽科創中藥天然藥物研究所有限責任公司，安徽 合肥 230088）

黃精屬百合科多年生草本植物，是常用的滋補中藥［1］。近年來，人們對黃精屬的研究不斷深入，已從該屬植物中分離得到糖類、皂苷類、黃酮類等化學成分，其中皂苷類是研究報道得最多的成分［2］，目前已經分離得到了78 種皂苷［3］。黃精皂苷具 有 調節血糖［4］、抗腫瘤［5，6］、改善學習 記 憶［7］、抗氧化、延緩衰老［8］等生理功效。目前，測定總皂苷的主要方法是采用分光光度法，該法準確可靠，重復性好［9，10］，但是利用分光光度法測黃精中總皂苷含量的鮮有報道。

本試驗以黃精提取物中有效成分黃精皂苷為檢測指標，采用紫外分光光度法測定黃精提取物中總皂苷的含量，并進行方法學考察，旨在為黃精提取物中總皂苷的含量測定提供理論和試驗依據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試驗設備與儀器電子天平：AG135型，梅特勒－托利多儀器有限公司；超聲清洗器：SY－360型，上海寧商超聲儀器有限公司；恒溫水浴鍋：HH－s型，金壇市金城國勝實驗儀器廠；紫外－可見分光光度計：UV757CRT 型，上海精科儀器公司。

1.1.2 材料與試劑

黃精片：批號070601、070602，蕪湖華信生物藥業有限公司；

人參皂苷Re對照品：批號110754－200421，中國藥品生物制品檢定所；

黃精：天津藥材公司；

硬脂酸鎂：成都市恒昌化工有限責任公司；

糊精：遼寧東源藥業有限公司；

所用試劑：均為分析純，市售。

1.2 試驗方法

1.2.1 對照品溶液制備 精密稱取人參皂苷Re對照品8.3mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為人參皂苷Re標準溶液。

1.2.2 供試品溶液制備 取樣品10片，研細，取2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加80%乙醇50 mL，超聲提取30min，濾過，濾紙、濾渣加80%乙醇洗滌2次，每次15mL，洗液并入濾液。濾液置水浴上蒸干，殘渣加1%氫氧化鈉溶液20mL 使其溶解，移入分液漏斗，加水飽和的正丁醇提取3次，每次15mL，合并正丁醇液，加正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15mL，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解并定量移入5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

1.2.3 測定波長選擇 取適量的供試品溶液于10mL具塞試管，于水浴中揮去甲醇，加5%香草醛－冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，搖勻，置60 ℃水浴中加熱15min，立即置冰水浴中冷卻，加入冰醋酸5.0mL，搖勻，以相應的試劑為空白，在波長450～700nm 范圍內掃描，供試品溶液在585.2nm 處有最大吸收，故選擇586nm 為測定波長。

1.2.4 標準曲線制備 精密吸取人參皂苷Re標準溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.8，0.9mL，分別置10mL具塞刻度試管中，于水浴中揮去甲醇，加5%香草醛－冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，搖勻，置60 ℃水浴中加熱15min，立即置冰水浴中冷卻，加入冰醋酸5.0mL，搖勻，以相應的試劑為空白，在586nm 的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標（Y），人參皂苷Re含量為橫坐標（X，mg），繪制標準曲線，得回歸方程為Y ＝3.229 9 X ＋0.006 9，相關系數r＝0.999 3。結果見表1。

表1 人參皂苷Re對照品含量與吸光度相關性Table 1 Ginsenoside the Re reference substance content absorbance（n ＝8）

結果表明：人參皂苷Re在0.033 2～0.298 8 mg范圍內，其含量與吸光度線性關系良好，符合技術要求。

2 結果與分析

2.1 樣品測定

精密吸取供試樣品溶液0.5mL，于10mL 具塞刻度試管，置水浴中揮去甲醇，加5%香草醛－冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，搖勻，于60 ℃水浴中加熱15min，立即置冰水浴中冷卻，加入冰醋酸5.0mL，搖勻，顯色。從標準曲線上查得相應含量，計算總皂苷含量。結果見表2。

2.2 陰性對照試驗

按黃精500g，糊精400g，硬脂酸鎂5g的配方，取糊精輔料按樣品測定方法在波長450～700nm 范圍內掃描，糊精輔料在586nm 處無最大吸收，表明陰性無干擾。

表2 總皂苷含量測定結果Table 2 Determination of total saponin／（10－2g·g）

2.3 精密度試驗

取同一顯色后的供試品溶液，按2.1的方法進行測量，重復測定5次，記錄吸光度值，結果見表3。

表3 精密度試驗結果Table 3 Precision test results（n ＝5）

結果表明，精密度試驗RSD 為0.2%，表明儀器精密度良好。

2.4 穩定性試驗

取同 一顯色后的供試品溶液于0，5，10，20，30，40，50min內，按2.1 的方法進行測量，分別測定，記錄吸光度值，結果見表4。

表4 穩定性試驗結果Table 4 Stability test results

結果表明：穩定性試驗RSD 為0.6%，樣品在50min內穩定性良好。

2.5 重現性試驗

按樣品中總皂苷含量測定方法及條件，取同一批樣品（070601）分別制備5份供試品溶液，分別測定，從標準曲線上查得相應含量，計算總皂苷含量。結果見表5。

結果表明：重現性試驗RSD 為1.9%，表明重現性良好。

表5 重現性試驗結果Table 5 Reproducibility of test results（n＝5）

2.6 加樣回收率試驗

取已知總皂苷含量為1.145mg／g的華信牌九華山黃精片（070601），6份，分別加入人參皂苷Re對照品溶液（人參皂苷Re含量為1.35mg／mL）各2mL，按樣品測定方法制備各供試品溶液，按2.1的方法進行測量，從標準曲線上查得相應含量，計算總皂苷含量，考察本方法的加樣回收率，結果見表6。

表6 加樣回收率試驗結果Table 6 Sample recovery test results（n＝6）

結果表明：本方法的加樣回收率為96.7%，RSD為1.4%。

3 討論

黃精中最主要的兩種化學成分是皂苷類和黃精多糖類，這兩種成分均可以采用分光光度法來測定。故在供試品制備的過程中加入20mL 的1%氫氧化鈉溶液，其原理是在堿性條件下可以沉淀黃精多糖類成分，從而排除對黃精總皂苷測定的影響。目前，測定總皂苷的方法還是以分光光度法應用最廣泛，與其它方法相比，它具有適應性廣、穩定性高、重現性好的優點。

本試驗結果表明：利用紫外分光光度法測黃精提取物中總皂苷的含量，人參皂苷Re在0.033 2～0.298 8 mg范圍內，其含量與吸光度線性關系良好，穩定性好、回收率高，測定結果準確可靠。

1 中國藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S］.2005 版.北京：化學工業出版社，2005：215.

2 祝凌麗，徐維平.黃精總皂苷和多糖的藥理作用及其提取方法的研究進展［J］.安徽醫藥，2009，13（4）：719.

3 張潔，馬步平，楊云，等.黃精屬植物甾體皂苷類成分及藥理活性研究進展［J］.中國藥學雜志，2006，41（6）：330～331.

4 Chol S B，Park S A.Steroidal glycoside from Polygonatum odoratum.（Mill.）druce.Improves insulin resistance but does not alter insulin secretion in 90% pancreatectomized rate［J］.Biosei Biotechnoi Biochem.，2002，66（10）：2 036～2 043.

5 Wang Z，Zhou J B，Ju Y，et al.Effects of two saponins extracted from the Polygonatum zanlanscianensepamp on the human leukemia（HL－60）cells［J］.Biol.Pharm Bull，2001，24（2）：159～162.

6 Cai J，Lium J，Wag z，et al.Apoptoais induced by dioscin in Helacells［J］.Biol.Phalto Bull，2002，25（2）：193～196.

7 孫隆儒，李銑，郭月英，等.黃精改善小鼠學習記憶障礙等作用的研究［J］.沈陽藥科大學學報，2001，18（4）：286～289.

8 毛雁，馬蘭軍，呂永安，等.黃精提取物對大強度耐力訓練大鼠心肌線粒體抗氧化能力及ATP酶活性影響的實驗研究［J］.四川中醫，2008，26（2）：15～17.

9 沈婷，聶麗華，周亞球，等.斷血流提取物中總皂苷的含量測定［J］.安徽中醫學報，2010，29（2）：70～71.

10 徐佳芮.分光光度法測定益氣膠囊中總皂苷含量［J］.兒科醫學雜志，2010，16（2）：50～71.